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AGS细胞系中12-LOX的表达及其抑制剂对细胞增殖的影响
目的:探讨人胃癌细胞系AGS中12-脂肪氧化酶(12-lipoxygenase,12-LOX)的表达情况及其抑制剂黄芩甙元(baicalein)对AGS细胞增殖的影响.方法:AGS在含100mL/L小牛血清+100kU/L青、链霉素的RPMI1640培养基中常规培养.用RT-pCR检测12-LOX在AGS中的表达情况,分别以20,40,80 μmol/L baicalein干预细胞,用四氮唑蓝(thiazolyl blue tetrazolium bromide,MTT)法在24,48,72 h测量细胞吸光度,检测baicalein对细胞增殖的影响;用倒置显微镜和电子显微镜进行形态观察;通过脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)和吖啶橙-溴化乙锭(AO-EB)染色法检测细胞凋亡指数.结果:AGS细胞中存在12-LOXmRNA表达;MTT显示baicalein大致呈时间、剂量依赖性抑制细胞增殖(各组间P＜0.01,除外40 μmol/L 24 h组与48 h组);AGS细胞存活率高为82.1%,低为38.4%.倒置显微镜下可见baicalein干预后的细胞皱缩,部分细胞胞体变圆,脱离贴壁状态,成为悬浮细胞;电镜下可见baicalein干预后的细胞出现了凋亡的特征性改变:核染色质边集及凋亡小体形成:AO-EB染色法显示除0 μmol/L组不同时间点细胞凋亡指数无显著差异外(P＞0.05),其余各干预组细胞凋亡指数均有显著差异(P＜0.01);TUNEL染色法显示48 h时,baicalein 80 μmol/L细胞调亡指数为38.37±0.36%而0 μmol/L组细胞调亡指数为7.27±0.21%,两组间存在显著差异(P＜0.01).结论:人胃癌细胞AGS中存在12-LOXmRNA表达,其特异性抑制剂baicalein能抑制AGS细胞增殖并促进其凋亡.
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黄芩甙元和槲皮黄酮对牙本质胶原耐酶解能力的影响
目的 评估黄芩甙元和槲皮黄酮对牙本质胶原耐酶解能力的影响,为寻找理想的牙本质粘接预处理剂提供实验基础.方法 黄芩甙元、槲皮黄酮及原花色素以20％二甲基亚砜乙醇溶液作为溶剂,配制成质量浓度为50 g/L的预处理剂,制备脱矿牙本质试件(黄芩甙元组、槲皮黄酮组及原花色素组,每组19个试件).37℃下预处理剂孵育24 h后,于酶解液中(含Ⅰ型胶原酶)进行消化.空白对照组和阴性对照组(每组19个试件)以20％二甲基亚砜乙醇溶液作为预处理剂,空白对照组所用酶解液不含Ⅰ型胶原酶.分别测试酶解24 h后各组试件的极限拉伸强度(每组10个试件)及酶解液羟脯氨酸含量(每组6个试件),场发射扫描电镜观察酶解12h后牙本质胶原形貌(每组3个试件).结果 酶解24 h后,黄芩甙元组极限拉伸强度高[(16.00±1.31) MPa],其次为原花色素组[(12.64±0.91) MPa]、空白对照组[(7.84±1.18) MPa]、槲皮黄酮组[(3.20±1.07) MPa]、阴性对照组(0 MPa),各组间差异均有统计学意义(P＜0.01).空白对照组酶解液羟脯氨酸含量低[(0.40±0.16) mg/L],其次为黄芩甙元组[(2.95±0.18) mg/L]、原花色素组[(4.78±0.38 mg/L]、槲皮黄酮组[(28.22± 1.53) mg/L]、阴性对照组[(34.39±0.39) mg/L],各组间差异均有统计学意义(P＜0.01).酶解12h后场发射扫描电镜显示空白对照组牙本质胶原网络完整;阴性对照组胶原网络完全断裂塌陷;槲皮黄酮组大部分胶原被降解;原花色素组仅少量胶原断裂塌陷;黄芩甙元组胶原网络基本维持完整.结论 50 g/L黄芩甙元和槲皮黄酮均可提高牙本质胶原的耐酶解能力,其中黄芩甙元作用优于原花色素,槲皮黄酮作用弱于原花色素.
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黄芩甙衍生物的合成及抗人免疫缺陷病毒活性研究
为了评价黄芩甙中糖的存在和糖的种类对抗HIV活性的影响,由天然黄芩甙出发制备了黄芩甙元和5,6-O-二苄基黄芩甙元,并合成了5-羟基-6-O-苄基黄酮-7-β-D-葡萄糖甙(12),5-羟基-6-O-苄基黄酮-7-β-D-半乳糖甙(13),5-羟基-6-O-苄基黄酮-7-α-D-甘露糖甙(14),5-羟基-6-O-苄基黄酮-7-α-D-阿拉伯糖甙(15).以上化合物及部分中间体的生物活性试验表明: 黄芩甙及黄芩甙元均抑制免疫缺陷病毒逆转录酶(HIV-1 RT)及在细胞培养中抑制HIV-1; 黄芩甙及黄芩甙元的6-位羟基被遮蔽则丧失抑制HIV-1 RT活性,说明6-羟基为抑制HIV-RT活性所必需; 黄芩甙元抑制HIV-1活性及细胞毒性均强于黄芩甙,两种化合物治疗指数相近.
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12-脂肪氧化酶抑制剂诱导人肝癌细胞凋亡及其对survivin基因表达的影响
目的:探讨12-脂肪氧化酶(12-LOX)抑制剂诱导人肝癌细胞凋亡的作用及其对survivin基因表达的影响.方法:对人肝癌细胞株HepG2进行细胞培养,取指数生长期细胞设对照组、12-LOX抑制剂组(baicalein 20、40和80μmol·L-1组),加试剂后继续培养72 h.透射电镜观察抑制剂组和对照组细胞形态.RT-PCR法分别检测实验组和对照组肝癌细胞12-LOX mRNA的表达情况.MTT法检测细胞增殖情况.DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡.RT-PCR法检测survivin mRNA的表达.结果:人肝癌细胞株HepG2中存在12-LOX mRNA的明显表达,baicalein干预后,12-LOXmRNA表达量明显减弱.透射电镜下发现,对照组细胞胞核和细胞器亚微结构清晰,核膜完整;而经baicalein处理后,凋亡细胞增多,而且同一电镜切片中可以观察到不同时期的凋亡形态学改变,并可见坏死细胞及细胞碎片.MTT显示大致呈时间-剂量依赖性抑制细胞增殖,细胞存活率随着baicalein给药后时间的延长和给药浓度的增加而逐渐下降(P＜0.05);baicalein干预后HepG2细胞提取DNA进行琼脂糖凝胶电泳,可见梯形条带,而对照组未出现梯形条带.12-LOX抑制剂baicalein可降低HepG2细胞中survivin表达,并呈浓度-时间依赖性.结论:12-LOX抑制剂能诱导人肝癌细胞HepG2的细胞凋亡,其诱导细胞凋亡的机制可能与下调抗凋亡基因survivin的表达有关.
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黄芩甙元和黄芩甙对皮肤真菌与细菌抑制作用的研究
本文研究了黄芩甙和黄芩甙元对十七种皮肤致病真菌与十六种皮肤细菌的抑制活性.在琼脂药物培养基上,黄芩甙元表现出了对酵母型真菌高度的选择抑制作用,其低抑制浓度MIC在70～100μg/ml之间,而对皮肤癣菌和丝状霉菌没有活性;黄芩甙则对所有的供试真菌几乎没有作用.另外,与脚气和腋臭有关的负责菌如固着微球菌、表皮葡萄球菌、人型葡萄球菌和干燥棒杆菌等,在黄芩甙元浓度为250μg/ml的条件下,其生长繁殖也能完全抑制.黄芩甙元的抗菌活性可能与其结构第七位羟基的存在有关.
