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夹竹桃麻素治疗大鼠急性坏死性胰腺炎的疗效
目的 观察NADPH氧化酶(NOX)抑制剂夹竹桃麻素治疗急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠的疗效,探讨其作用机制.方法 60只SD大鼠按数字表法随机分为对照组、ANP组、夹竹桃麻素组.采用胰胆管逆行注射5％牛磺胆酸钠方法制备ANP模型.夹竹桃麻素组在制模同时腹腔注射夹竹桃麻素10mg·kg-1 ·d-1.对照组仅开腹及关腹.术后12、24h分批处死大鼠.观察24h内各组大鼠存活率及呼吸、肾脏衰竭情况.取动脉血检测PaO2淀粉酶和肌酐,采用ELISA法检测血TNF-α、IL-6水平,蛋白质印迹法检测胰腺组织NOX亚基NOX2、p22phox、p67 phox及p-NF-κB p65表达.结果 ANP组大鼠24h的急性呼吸衰竭发生率为71.4％ (5/7),急性肾衰竭发生率为100％(7/7);夹竹桃麻素组发生率分别为22.2％(2/9)和0.两组差异均有统计学意义(P值均＜0.01).24 h时夹竹桃麻素组血PaO2显著高于ANP组[(68.4±6.8) mmHg比(56.5±6.1) mmHg,1 mmHg=0.133 kPa],血淀粉酶、肌酐、TNF-α、IL-6水平显著低于ANP组[(2 907±849) U/L比(6 421±690) U/L,(122.3±19.4)μmol/L比(213.0±39.2) μmol/L,(120.0±11.9) ng/L比(302.5 ±41.6) ng/L,(174.4±19.3)ng/L比(378.6±13.6) ng/L],胰腺病理评分显著低于ANP组[(3.16±0.91)分比(7.95±1.23)分],胰腺组织的p22phox、p67phox和p-NF-κBp65表达显著低于ANP组[0.79(0.75,0.84)比1.36(1.18,1.51),0.82(0.80,0.87)比1.70(1.47,1.80),0.82(0.80,0.84)比1.50(1.31.1.61)],NOX2表达完全被抑制[0比0.93(0.87,1.06)],差异均有统计学意义(P值均＜0.01).结论 夹竹桃麻素对ANP大鼠有治疗作用,其机制可能是通过抑制NOX介导的NF-κB活化和TNF-α、IL-6释放实现的.
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双重氧化酶1引起变应性疾病发生机制的初步研究
目的 探讨双重氧化酶-1 (dual oxidase-1,DUOX-1)在人气道上皮细胞(human bronchial epithelial cell)中导致气道高反应性的机制.方法 选择正常培养的人气道上皮细胞分为健康对照组、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)刺激组、甲基-β-环糊精(methyl-β-cyclodextrin,M-β-CD)+ TNF-α处理组、地昔帕明(desipramine,DES)+TNF-α处理组、二亚苯基碘(diphenylene iodonium,DPI)+TNF-α组、夹竹桃麻素(apocynin,APO)+TNF-α组.利用TNF-α作为刺激因素,采用蔗糖梯度离心的方法提取脂筏并应用免疫蛋白印记方法分析各组细胞膜上DUOX-1的含量；利用激光共聚焦显微镜观察细胞膜上DUOX-1的表达,同时观察其与脂筏标记蛋白霍乱毒素B亚单位(cholera toxin B subunit,CTXB)和神经酰胺(ceramide)的共定位现象；用活性氧试剂盒检测细胞内活性氧的生成.采用Sigmastat 3.02软件进行统计学处理.结果 ①活性氧的生成,对照组:l.00±0.00;TNF-α组:1.95±0.16;M-β-CD+TNF-α组:0.91±0.16; DES+ TNF-0组:1.49 ±0.20;DPI+TNF-α组:1.03±0.16；APO+ TNF-α组:1.47±0.26；六组差异有统计学意义(F=3.83,P＜0.05).②DUOX-1蛋白的含量,对照组:0.21 ±0.02;TNF-α组:0.49±0.04;M-β-CD+TNF-α组:0.08±0.02；DES+TNF-α组:0.09±0.03；差异有统计学意义(F=3.96,P＜0.05).③DUOX-1蛋白荧光值,对照组:1.72±0.21；TNF-α组:8.11±1.23；M-β-CD+ TNF-α组:1.51±0.32,DES+TNF-α组:1.43±0.11；差异有统计学意义(F =4.87,P＜0.05).④DUOX-1蛋白基因检测,对照组:1.00±0.00；小胞浆RNA(small cytosol RNA,ScrRNA)+TNF-α组:1.75±0.04;DUOX-1ScrRNA+TNF-α组:1.15±0.02;差异有统计学意义(F=4.19,P＜0.05).结论 TNF-α可以引起气道上皮细胞内DUOX-1在脂筏中的含量增加,并导致该酶的激活,从而致气道上皮细胞活性氧产生增加,引起气道高反应性,可能导致变应性疾病的发生；酸性鞘磷脂酶抑制剂DES可以抑制上述过程,说明这一过程可能依赖于脂筏来源的神经酰胺.
