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联合使用miR-34a及miR-let7对胰腺癌细胞生物学特性的影响
目的 探讨联合使用两种具有抑癌作用的microRNA (miRNA)同时转染人胰腺癌细胞对其生物学特性的影响.方法 采用脂质体法将miR-34a及miR-let7单独或同时转染胰腺癌PANC1、SW1990细胞及正常胰腺腺泡AR42J细胞,以转染阴性对照miRNA(miR-NC)组及未转染组作为对照.应用qRT-PCR法检测各组细胞miR-34a及miR-let7的表达,MTT法检测细胞增殖,Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 MiR-34a转染组、miR-let7转染组、双转染组细胞的miR-34a、miR-let7表达水平均较miR-NC转染组及未转染组显著上调,差异有统计学意义(P值均＜0.05),表明miRNA成功转染了细胞.双转染组的PANC1、SW1990细胞增殖活性分别为(0.665±0.010)％、(0.638±0.030)％,较miR-NC转染组的(0.974 ±0.030)％、(0.971±0.050)％,miR-let7转染组的(0.888±0.050)％、(0.863±0.060)％显著被抑制,差异有统计学意义(P值均＜0.05),较miR-34a转染组的(0.795±0.060)％、(0.793±0.060)％下降,但差异无统计学意义.AR42J细胞的增殖活性无显著变化,差异无统计学意义.PANC1细胞miR-34a转染组、miR-let7转染组的穿膜细胞数分别为(103.70±3.28)、(100.70±1.76)个/200倍视野,较miR-NC转染组的(231.30±2.60)个/200倍视野及未转染组的(153.70±2.60)个/200倍视野显著减少,双转染组穿膜细胞数为(61.67±3.18)个/200倍视野,又较两个单转染组显著减少,差异均有统计学意义(P值均＜0.01).细胞迁移实验与侵袭实验的结果一致.SW1990细胞侵袭及迁移能力的变化与PANC1一致.PANC1细胞的miR-34a转染组、miR-let7转染组、双转染组、miR-NC转染组、未转染组的细胞凋亡率分别为(16.66±1.27)％、(15.46±0.33)％、(23.35±1.80)％、(9.33±0.31)％、(8.83±0.36)％.两单转染组的细胞凋亡率较miR-NC转染组、未转染组显著增加;双转染组又较miR-let7组显著增加,差异有统计学意义(P值均＜0.05),而双转染组与miR-34a转染组的差异无统计学意义.结论 双转染的胰腺癌细胞增殖活性、细胞迁移和侵袭力均较单转染细胞显著下降,而细胞凋亡率较单转染细胞显著增加,双转染能够发挥更加显著的协同抗肿瘤作用.
