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人胎肾细胞株文献资料
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辛伐他汀通过磷酸化作用增强内皮一氧化氮合酶活性
目的 建立含人内皮一氧化氮合酶(eNOS)基因的人胎肾细胞株,研究他汀类药物对eNOS活性的影响.方法 用脂质体转染的方法将含有eNOS基因的质粒pcDNA3.l-eNOS导入人胎肾细胞(293细胞),利用G418筛选二次,以免疫印迹法鉴定并筛选出稳定表达eNOS的阳性克隆.将辛伐他汀(10 μmol/L)加入eNOS阳性细胞系培养2h后,收获细胞并用同位素二步色谱法检测eNOS的活性,同时用Western Blot蛋白检测eNOS、磷酸化的eNOS表达水平和细胞内信号分子Akt、AMPK水平以探讨辛伐他汀调节eNOS活性的机制.结果 Western Blot显示经转染pcDNA3.l-eNOS并筛选后的后的293细胞20%的克隆能稳定有效表达eNOS蛋白;辛伐他汀处理2 h后eNOS活性明显升高(P＜0.05).结论 成功建立了具有G418抗性的含pcDNA3.l-eNOS基因的人胎肾细胞株,并且证明辛伐他汀可通过调节eNOS的活性来调节NO的生成,这可能为心血管疾病的治疗提高一种新的思路.
