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糖尿病肾脏疾病患者转化生长因子β1对胆固醇调节元件结合蛋白1活化和功能的调控作用研究
目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)在DKD发病中的作用机制.方法 TGF-β1(2 ng/ml)和/或高糖(HG,24.4 mmol/L)处理肾小球系膜细胞(GMC),Western blot检测胆固醇调节元件结合蛋白1(SREBP-1)和脂肪酸合成酶(FAS),油红O确定GMC中脂滴形成;SD大鼠左肾灌注携带TGF-β1基因腺病毒载体(AdTGF-β1)和空载体(AdLacZ).处死后取左肾,免疫组织化学检测SREBP-1和p-Smad3蛋白表达.结果 与正常细胞对照组(Con)比较,TGF-β1作用于GMC后,mSREBP-1蛋白表达增加,且呈时间依赖性[(1.06±0.55)vs(1.50±0.44)vs(1.59±0.68)],[(1.23±0.52)vs(1.34±0.65)];TGF-β1+HG作用也增加了mSREBP-1的蛋白表达.与Con组比较,TGF-β1处理增加了GMC FAS的蛋白表达[(1.18±0.04)vs(1.38±0.11)vs(1.40±0.13),P<0.05],油红O证实GMC出现脂滴,呈红染颗粒状;大鼠肾脏灌注AdTGF-β1免疫组织化学法发现,TGF-β1能明显增加SREBP-1和p-Smad3的蛋白表达.结论 TGF-β1是参与DKD的重要致病因子,其作用机制可能与诱导SREBP-1活化,引起GMC细胞内脂质沉积密切相关.TGF-β1可能为DKD的预防和治疗提供新方法.
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降脂颗粒对非酒精性脂肪性肝病大鼠肝X受体α和固醇调节元件结合蛋白1c表达的影响
目的:研究降脂颗粒(Jiangzhi Granule,JZG)对非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠肝X受体α(liver X receptor α,LXRα)和固醇调节元件结合蛋白1c(sterol regulatory element-binding protein-1c,SREBP-1c)表达的影响.方法:雄性Wistar大鼠40只随机分成正常组、模型组、吡格列酮(pioglitazone,PIO)组和JZG组,每组各10只.正常组给予普通饲料,模型组、PIO组及JZG组给予高脂饲料(88％普通饲料+10％猪油+2％胆固醇).造模4周后药物干预4周,留取肝脏组织,苏木精和伊红染色进行病理学观察,并检测肝组织三酰甘油( triacylglycerol,TAG)和游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)水平；腹主动脉采血,检测血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)活性；实时聚合酶链式反应法检测肝组织LXR-α和SREBP-1c mRNA表达；蛋白质印迹法检测肝组织LXRα和SREBP-1c的表达.结果:模型大鼠肝组织出现明显的大泡性脂肪变性,JZG可显著降低模型大鼠血清ALT和AST水平,JZG与PIO均可降低模型大鼠肝组织FFA、TAG含量及LXRα、SREBP-1c的表达水平.结论:JZG可调节模型大鼠脂肪酸代谢紊乱,其作用可能与下调肝组织LXRα和SREBP-1c的表达有关.
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子宫内膜癌SREBP1表达及SREBP1 shRNA对内膜癌细胞生物学行为的影响
目的:探讨胆固醇调节元件结合蛋白质1(SREBP1)在子宫内膜癌中的表达情况及SREBP1 shRNA对子宫内膜癌细胞AN3-CA生物学行为的影响.方法:采用免疫组织化学染色、实时定量逆转录聚合酶链反应、蛋白免疫印迹、Transwell体外细胞侵袭试验等方法分析SREBP1在子宫内膜组织中的表达及其对细胞生物学行为的影响.结果:SREBP1在正常子宫内膜组织中低表达,在子宫内膜癌组织中高表达,且免疫组织化学染色H -Score评分在子宫内膜癌高分化组和中、低分化组之间具有统计学差异(P＜0.001)；SREBPl shRNA可减慢子宫内膜癌细胞AN3-CA的增殖速度并降低AN3-CA细胞的侵袭能力,均具有统计学差异(P＜0.001).结论:SREBP1的表达与活化参与子宫内膜癌的进展；SREBP1 shRNA可降低子宫内膜癌细胞的增殖和侵袭能力,表明内源性SREBP1参与子宫内膜癌的进展与转移,为子宫内膜癌潜在的分子靶向治疗提供了一定的理论基础.
关键词： 子宫内膜肿瘤 胆固醇调节元件结合蛋白1 短发夹RNA 细胞侵袭力 -
泡沫细胞DNA甲基化及其对脂代谢基因SREBP1表达的影响
目的 探讨泡沫细胞DNA甲基化及其对脂代谢基因胆固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)表达的调控作用.方法 将体外培养的单核细胞系THP-1采用乙酸酯、氧化型低密度脂蛋白等处理后建立泡沫细胞模型,采用实时荧光定量PCR 法检测 THP-1 单核细胞和泡沫细胞中DNA 甲基转移酶1(DNMT1)、DNMT3A、DNMT3B mRNA表达,结果显示在THP-1泡沫细胞中DNMT1 mRNA相对表达量低于THP-1单核细胞(P＜0.05),两种细胞DNMT3A、DNMT3B mRNA相对表达量比较差异均无统计学意义(P均＞0.05),后续研究选择DNMT1基因进行转染.将THP-1泡沫细胞随机分为三组,对照组常规培养,空载体组转染空载对照质粒,DNMT1组转染DNMT1质粒,结果显示,DNMT1组DNMT1蛋白相对表达量高于其他两组,说明转染成功.收集三组细胞,采用质谱法检测SREBP1启动子甲基化状态,采用qRT-PCR和Western blotting法检测SREBP1 mRNA和蛋白表达.结果 与对照组及空载体组比较,DNMT1组SREBP1基因启动子区CpG岛22号CG位点启动子发生高甲基化,其他28个CG位点未发生甲基化. DNMT1 组 SREBP1 mRNA 和 SREBP1 蛋白相对表达量均低于其他两组( P 均 ＜0.05 ).结论 DNMT1表达降低参与泡沫细胞的形成;上调DNMT1可抑制脂代谢基因SREBP1表达;提示DNMT表达改变通过影响脂代谢基因SREBP1的甲基化水平可能在泡沫细胞形成中发挥重要作用.
关键词： 动脉粥样硬化 DNA甲基转移酶 泡沫细胞 胆固醇调节元件结合蛋白1
