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血管紧张素Ⅱ对RIN-m细胞PDX-1mRNA及蛋白表达的影响
目的 探讨血管紧张素Ⅱ(ATⅡ) 对胰十二指肠同源盒1(PDX-1)表达的影响及其与胰岛素(Ins) 分泌的关系.方法 测定RIN-m细胞在基础、ATⅡ及氯沙坦作用下Ins 分泌量、细胞内Ins 含量及细胞内PDX-1 mRNA 和蛋白的表达水平.结果 在100nmol/L ATⅡ作用下, 葡萄糖刺激后Ins 分泌量、细胞内Ins 含量及PDX-1表达水平均明显降低(P均<0.05).上述作用可被ATⅡ受体阻滞剂氯沙坦部分逆转.结论 抑制PDX-1表达水平可能是ATⅡ影响胰岛β细胞Ins合成及分泌的机制之一.
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胰十二指肠同源盒1诱导不同代别干细胞分化为胰岛样细胞移植对1型糖尿病大鼠的疗效观察
目的：通过胰十二指肠同源盒1(PDX?1)转染不同代别大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)诱导分化为胰岛样细胞，进而移植治疗1型糖尿病SD大鼠，观察干细胞移植对1型糖尿病的疗效。方法采用PDX?1转染第3代和第5代BMSCs诱导为胰岛样细胞，双硫腙染色鉴定并测定其胰岛素分泌水平。链脲佐菌素(STZ)制备1型糖尿病SD大鼠模型，将45只成模SD大鼠按随机数字表法分为3组：移植组A、移植组B、模型对照组，每组均为15只，分别经尾静脉注入第3代BMSCs+PDX?1、第5代BMSCs+PDX?1、等量生理盐水干预28 d；另取15只健康SD大鼠作为正常对照组，经尾静脉注入等量生理盐水。监测各组大鼠移植第0、7、14、21和28天血糖、空腹胰岛素和C肽水平；第21天4组大鼠均行糖耐量实验；第28天取各组大鼠胰腺组织进行免疫组化观察细胞存活及胰岛细胞状况。采用单因素方差分析进行组间数据比较。结果自移植第14天，移植组A和B血糖开始下降，胰岛素和C肽量开始升高，其中第21和28天移植B组的血糖均显著低于A组[(21.90±0.26)比(23.60±1.49) mmol/L、(21.80±1.32)比(24.20±2.06) mmol/L，t=9.65、12.73，均P<0.05]，而同时点胰岛素和C肽显著高于A组(t=8.73、12.51、18.36、25.12，均P<0.05)。糖耐量实验显示移植组B血糖曲线下面积显著小于移植组A [(1809.0±2.6)比(2301.0±6.8) mmol·L?1·min，t=5.241，P<0.05]。免疫荧光检测显示移植组A和移植组B大鼠胰腺组织中均有胰岛素阳性细胞存活，移植组B中胰岛素阳性细胞比例显著高于移植组A （48.0%±1.3%比32.8%±3.2%，t=8.38，P<0.05）。结论 PDX?1转染的第5代BMSCs对1型糖尿病大鼠的疗效优于PDX?1转染的第3代BMSCs。
关键词： 糖尿病 1型 胰十二指肠同源盒1 大鼠骨髓间充质干细胞 胰岛素样细胞 -
PDX-1与胰岛B细胞功能
胰岛B细胞分泌胰岛素,而胰岛素是体内惟一的降血糖激素,对于维持机体血耱的动态平衡起着决定性的作用.胰岛B细胞分泌的调节机制十分复杂,至今仍未完全阐明.胰十二指肠同源盒1(PDX-1)参与胰腺早期发育和较晚期B细胞的分化,在成年机体内通过调节一系列基因的表达来维持B细胞的形态和正常功能,尤其是通过调控胰岛素及胰岛素相关基因如葡萄糖激酶、葡萄糖转运蛋白2等基因的表达,促进胰岛素分泌和维持胰岛B细胞的正常功能,其在胚胎期胰岛细胞发育、增殖、分化和成熟以及胰岛B细胞分泌功能的调节中扮演着重要角色.PDX-1还可以诱导非胰岛素分泌细胞如肝细胞等转化为胰岛素分泌细胞,在糖尿病的治疗方面也表现出了巨大的潜力.
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Pdx-1、Ngn3联合MafA诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为胰岛样细胞
目的 探讨胰十二指肠同源盒1(pancreatic and duodenal homeobox 1,Pdx-1)、神经元素3(neurogenin 3,Ngn3)联合V型肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源基因A(v-maf muscu-loaponeurotic fibrosarcoma oncogene homologA,MafA)诱导大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC)分化为胰岛样细胞(insulin-producing cells,IPC)的机制.方法 通过贴壁培养法纯化BMSC,分为4组(A:未感染组;B:MafA感染组;C:Pdx-1-Ngn3感染组;D:联合感染组),高糖条件下培养7d,荧光显微镜观察其感染效率.Western印迹检测各组细胞Pdx-1、Ngn3和MafA表达情况,RT-PCR检测各组胰岛素2、葡萄糖激酶、巢蛋白、胰升糖素及Pdx-1表达水平,ELISA法检测各组胰岛素分泌情况.结果 分离的细胞表面高表达CD44、CD105,而低表达CD34.诱导过程中各感染组BMSC逐渐聚集并形成细胞团块,双硫棕染色呈红棕色;各组在感染第0、3、5、7、9天胰岛素分泌水平逐渐提高,且联合感染组升高为明显(P＜0.05);与A组相比,B、C和D组Pdx-1、胰岛素2、胰升糖素及葡萄糖激酶基因表达明显上调(P＜0.05);与B组相比,C组Pdx-1表达上调,D组Pdx-1和胰岛素2表达上调,胰升糖素表达下调(P＜0.05);与C组相比,D组胰升糖素表达上调(P＜0.05).结论 Pdx-1、Ngn3联合MafA共同感染BMSC可分化为IPC.
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脐血干细胞对1型糖尿病小鼠的治疗效应及作用机制
目的研究脐血干细胞对1型糖尿病小鼠的治疗效应,并探讨其作用机制。方法用四氧嘧啶建立1型糖尿病小鼠模型,造模成功后第5天给予脐血干细胞(0.1 ml/100 g体重)尾静脉注射,采用放射免疫法检测正常组、模型组及治疗组小鼠血清胰岛素、C肽水平,并以OGTT实验评价小鼠胰岛功能,HE染色法观察各组小鼠肾脏及胰腺形态学特点,用Western blot和PCR法检测胰腺组织胰十二指肠同源盒1(PDX-1)以及肌腱膜纤维肉瘤癌基因同源物A基因(MafA)的表达。结果模型组小鼠血糖明显升高,血清胰岛素、C肽水平下降,胰腺组织PDX-1及MafA蛋白表达下降,与正常组比较差异有统计学意义( P<0.05)；治疗组与模型组相比,小鼠血糖水平下降,血清胰岛素、C 肽水平升高(P <0.01),胰岛素敏感性增加。 HE染色提示小鼠肾脏及胰腺形态学变化得到改善,胰腺组织PDX-1及MafA蛋白表达升高(P<0.05)。结论脐血干细胞改善1型糖尿病小鼠的症状,降低血糖,改善小鼠胰岛功能及靶器官形态结构,并且具有上调PDX-1及MafA蛋白水平的作用,脐血干细胞对1型糖尿病小鼠具有一定的治疗效应。
