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Corin基因通过NF-κB信号通路对心肌细胞增殖凋亡的机制研究
目的 探讨Corin基因通过核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对心肌细胞增殖凋亡的影响.方法 通过脂质体LipofectamineTM2000将过表达Corin转染H9c2细胞及H2O2刺激细胞,细胞分为Control组、pcDNA3.1组、H2O2组(150μmol/L的H2O2处理细胞6 h)和pcDNA3.1-Corin组(转染pcDNA3.1-Corin后再用H2O2处理细胞6 h),BAY 11-7082作为NF-κB信号通路抑制剂,各组细胞活力通过CCK8法检测,凋亡率通过流式细胞仪检测,通过Western blotting检测各组细胞中增殖相关蛋白ki67、凋亡相关蛋白p53及NF-κB信号通路NF-κB和IκBα的蛋白表达.结果 H2O2刺激的H9c2细胞中Corin的表达明显降低,过表达Corin后Corin的表达显著升高;与pcDNA3.1组比较,H2O2组细胞活力及ki67和IκBα的表达均显著降低,凋亡率及p53和NF-κB的表达均显著升高(P<0.05);与H2O2组比较,pcDNA3.1-Corin组细胞活力及ki67和IκBα的表达均显著升高,凋亡率及p53和NF-κB的表达均显著降低(P<0.05);与pcDNA3.1-Corin组比较,pcDNA3.1-Corin+BAY 11-7082组细胞活力及ki67和IκBα的表达均显著升高,凋亡率及p53和NF-κB的表达均显著降低(P<0.05).结论 过表达Corin可通过抑制NF-κB信号通路提高心肌细胞活力及降低细胞凋亡.
关键词： Corin基因 心肌细胞 核转录因子-κB信号通路 增殖 凋亡 -
基于免疫调控的六味五灵片对何首乌致大鼠特异质肝损伤的防治作用
目的 基于内毒素脂多糖(LPS)模型,探讨六味五灵片对何首乌致大鼠特异质肝损伤的防治作用.方法 将80只SD大鼠随机分为对照组,LPS(2.8 mg/kg)组,单独何首乌(生药2.16 g/kg)组,LPS (2.8mg/kg)+何首乌(生药2.16 g/kg)组,LPS (2.8mg/kg)+何首乌(生药2.16 g/kg)+六味五灵片低、中、高剂量(0.4、0.8、1.6 g/kg)组及LPS (2.8mg/kg)+何首乌(生药2.16 g/kg)+阳性药联苯双酯(2mg/kg)组.按组别分别ig给予相应剂量的六味五灵片和联苯双酯,每日1次,连续给药2d,第3天除对照组和LPS组ig等量蒸馏水外,按组别分别ig给予何首乌醇提物,3h后按组别尾iv LPS,给予LPS7h后戊巴比妥钠麻醉大鼠,下腔静脉取血并采集肝组织标本.比色法检测血浆中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST),HE染色观察肝组织病理学变化,TUNEL检测分析肝细胞凋亡,ELISA法检测血浆中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β (IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、γ干扰素(IFN-γ)水平,免疫组化染色观察肝组织核转录因子-κB(NF-κB)p65的表达.结果 六味五灵片能明显降低何首乌诱导的特异质肝损伤大鼠血浆中ALT和AST水平(P＜0.05),减轻肝组织病理损伤和肝细胞凋亡,明显抑制NF-κB p65的表达(P＜0.05),同时明显降低血浆中TNF-α等炎症因子水平(P＜0.05、0.01).结论 六味五灵片可通过抑制NF-κB信号通路,减轻炎症反应,防治何首乌诱发的特异质肝损伤.
关键词： 六味五灵片 何首乌 特异质肝损伤 脂多糖 核转录因子-κB信号通路 -
沙利度胺对百草枯中毒ALI大鼠的保护作用及机制
目的 探讨沙利度胺对百草枯(PQ)中毒急性肺损伤(ALI)大鼠的保护作用及其可能机制.方法 将60 只SPF级Wistar大鼠按随机数字表法分为6组,每组10只.采用腹腔注射PQ溶液20 mg/kg建立大鼠PQ中毒模型(PQ模型组),30 min后腹腔注射梯度沙利度胺进行干预(50、100、200 mg/kg干预组),连续3 d;并设立生理盐水(NS)对照组和沙利度胺对照组(给予200 mg/kg).分别于3 d后取大鼠腹主动脉血,采用羟胺测定法检测血清超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用硫代巴比妥酸测定法检测血清丙二醛(MDA)含量.处死大鼠取肺组织,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)含量;采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测核转录因子-κB(NF-κB)信号通路蛋白p65和NF-κB抑制蛋白-α(IκB-α)的磷酸化水平;经苏木素-伊红(HE)染色后,光镜下观察肺组织病理学改变.结果 PQ染毒3 d后可见大鼠肺间质及肺泡间隔明显充血,有大量炎性细胞浸润,肺泡壁增厚;而给予50、100、200 mg/kg沙利度胺干预后,大鼠肺间质和肺泡间隔充血、水肿及炎性细胞浸润明显减轻,但仍可见少量水肿液、炎性细胞及红细胞.与NS对照组比较,PQ染毒后血清MDA含量以及肺组织TNF-α、IL-6水平和p65、IκB-α蛋白磷酸化水平均明显升高,血清SOD活性明显降低;而给予50、100、200 mg/kg沙利度胺干预后,可呈剂量依赖性地抑制PQ染毒诱导的MDA、TNF-α、IL-6含量及p65、IκB-α蛋白磷酸化水平升高,并提高SOD活性,与PQ模型组比较差异有统计学意义〔MDA(mmol/L):8.26±1.20、6.72±1.18、5.51±1.44比9.02±1.03,TNF-α (ng/mg)为3.00±0.14、1.84±0.18、1.58±0.11比3.30±0.14,IL-6(ng/mg):1.26±0.04、1.06±0.04、0.97±0.08比1.97±0.07, p-p65/p65:6.01±0.35、3.64±0.15、2.89±0.18比6.34±0.23,p-IκB-α/IκB-α:2.27±0.13、2.14±0.22、1.52±0.14比2.96±0.20,SOD(kU/L):195.7±19.3、207.1±25.6、225.8±23.1比188.2±26.6,均P<0.05〕.单纯给予200 mg/kg沙利度胺对肺脏则无明显影响.结论 沙利度胺对PQ中毒ALI大鼠具有保护作用,并呈一定剂量依赖性,其机制可能与降低氧自由基和炎性因子水平,以及抑制IκB-α/NF-κB信号通路活化有关.
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肾上腺素联合针刺疗法可通过NF-κB信号通路治疗过敏性休克:小鼠的实验结果
目的 探讨肾上腺素联合针刺疗法治疗过敏性休克的疗效和机制.方法 将60只昆明种雄性小鼠按随机数字表法分为生理盐水(NS)对照组、过敏性休克模型组和中西医结合治疗组,每组20只.腹腔注射0.01?mmol/L卵蛋白0.25?mL,1周后重复注射1次,第3周经尾静脉注射卵蛋白0.5?mL,诱发过敏性休克;NS对照组均注射等量NS;治疗组于制模后立即皮下注射0.1%肾上腺素0.2?μg,同时腹腔注射氨茶碱注射液0.2?mg,?并配合针刺水沟、内关、合谷穴治疗.分别于制模后1、6、12?h观察各组小鼠死亡率.于12?h处死小鼠取血标本,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清类胰蛋白酶、免疫球蛋白E(IgE)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL-1、IL-6)水平;取肺标本,用蛋白质免疫印迹试验(Western?Blot)检测肺组织p65、磷酸化p65(p-p65)、磷酸化核转录因子-κB抑制因子α(p-IκBα)的蛋白表达.结果 NS对照组12?h内无小鼠死亡;治疗组小鼠12?h内死亡率明显低于模型组(10%比80%,P＜0.01).模型组小鼠类胰蛋白酶和IgE较NS对照组明显升高〔类胰蛋白酶(μg/L):1.53±0.28比0.91±0.23,IgE(μg/L):33.3±3.1比21.3±1.9,均P＜0.01〕,治疗组小鼠两者水平明显低于模型组〔类胰蛋白酶(μg/L):1.31±0.26比1.53±0.28,IgE(μg/L):25.6±2.2比33.3±3.1,均P＜0.05〕.模型组小鼠血清TNF-α、IL-1、IL-6水平明显高于NS对照组〔TNF-α(ng/L):35.3±4.7比16.4±3.5, IL-1(ng/L):13.8±3.3比4.2±1.8,IL-6(ng/L):15.3±4.8比5.5±2.1,均P＜0.01〕;治疗组小鼠血清各炎性因子水平明显低于模型组〔TNF-α(ng/L):26.1±4.3比35.3±4.7,IL-1(ng/L):7.2±2.7比13.8±3.3,IL-6(ng/L):8.8±3.8比15.3±4.8,均P＜0.05〕.Western?Blot检测结果显示,3组肺组织p65蛋白表达无明显差异;NS对照组肺组织细胞核内p-p65蛋白表达量极低,模型组显著增加,治疗组明显低于模型组;p-IκBα蛋白表达趋势与p-p65结果一致.结论 肾上腺素联合针刺疗法可能通过抑制NF-κB?信号通路的活化,对过敏性休克小鼠起到治疗作用.
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BC02复合佐剂成分协同增强巨噬细胞固有免疫应答的分析
目的 初步分析BC02(BCG CpG DNA combination adjuvants system 02)复合佐剂构成成分在巨噬细胞激活过程中的协同加强作用.方法 采用夹心ELISA和RT-PCR法分别检测BC02复合佐剂及其构成成分[Al(OH)3佐剂及BC01 (BCG CpG DNA compound adjuvants system 01)佐剂]对小鼠巨噬细胞RAW264.7分泌的TNF-α及单核细胞趋化蛋白-l(monocyte chemotactie protein 1,MCP-1)细胞因子水平和mRNA转录水平的影响.信号通路蛋白磷酸化芯片检测经BC01和BC02刺激45 min后,RAW264.7细胞中核转录因子-κB (nuclear factor-κB,NF-κB)和促分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路的变化情况.结果 BC02对巨噬细胞的刺激存在剂量和时间依赖性,佳浓度和培养时间分别为1/10人用剂量[(7.5μg/mL BC01+20 μg/mL Al(OH)3]和24 h.Al(OH)3无机盐佐剂能协同增强BC01生物佐剂对RAW264.7细胞的刺激活性,同时,TLR-9抑制剂ODN 2088与NLRP3抑制剂MCC 950单独或联合处理RAW264.7细胞,均能显著降低BC02刺激RAW264.7细胞分泌TNF-α和MCP-1细胞因子的能力.信号通路蛋白磷酸化芯片结果表明,BC02复合佐剂显著上调NF-κB信号通路中NF-KB-p105/p50、NF-κB-p65及NF-κB-p 100/p52等关键蛋白分子的磷酸化水平;同时,也能显著上调MAPK信号通路中p38 MAPK、c-Jun、SPAK/JNK及EIK-1等关键蛋白分子的磷酸化水平.结论BC02复合佐剂中BC01生物佐剂与Al(OH)3无机盐佐剂成分在激活小鼠巨噬细胞参与固有免疫应答中具有协同加强作用.
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TNF-α通过NF-κB信号通路对人牙周膜干细胞成骨分化调控作用的研究
目的:探讨肿瘤坏死因子-α( tumor necrosis factor -α,TNF-α)通过激活核转录因子-κB( nuciear factor-κB,NF-κB)信号通路调控其对人牙周膜干细胞( periodontai iigament stem ceiis ,PDLSCs)成骨分化的影响. 方法:通过组织块法体外分离培养健康牙周膜来源的PDLSCs;在hPDLSCs的正常培养液、成骨诱导培养液中分别加入10 ng/mL的TNF-α,通过碱性磷酸酶( aiha-iine phosphatase ,ALP)和茜素红染色定量检测其成骨分化功能的改变,采用实时定量RT-PCR和Western boit 检测成骨相关基因的表达和NF-κB信号通路相关因子表达差异. 将NF-κB信号通路抑制剂BAY 11-7082加入含有TNF-α的hPDLSCs成骨诱导培养液中,检测hPDLSCs生物学特性改变. 结果:在一定浓度TNF-α刺激下,hPDLSCs的成骨分化能力减弱;同时,TNF-α能激活NF-κB信号通路,从而抑制hPDLSCs的成骨分化作用,而BAY 11-7082能逆转其抑制成骨作用. 结论:炎症因子TNF-α能通过调控NF-κB信号通路调节hPDLSCs的成骨分化作用.
关键词： 牙周膜干细胞 肿瘤坏死因子-α 核转录因子-κB信号通路 成骨分化 -
DHA 逆转卵巢癌细胞 A2780／T 紫杉醇耐药的机制研究
目的：探讨二十二碳六烯酸（ DHA）对卵巢癌耐药细胞的耐药逆转作用及其机制。方法：利用MTT评估细胞对紫杉醇耐药性的改变，罗单明实验验证细胞的药物外排能力，流式细胞仪检测细胞周期的分布，实时定量PCR及蛋白质印迹检测多药耐药蛋白1（ MDR1）的mRNA水平、耐药相关蛋白及通路蛋白的蛋白水平。结果：DHA作用48 h后A2780／T对紫杉醇的半数抑制率（ IC50）下降（ P＜0.05），且罗丹明在胞内的含量增加，呈剂量依赖性（ P＜0.05）。同时紫杉醇与DHA联合使用可以改变细胞周期的分布，GO／G1期的细胞百分比上升（P＜0.05），P-糖蛋白（P-gp）及其他MDR相关蛋白的表达下降，NF-κB及磷酸化p38 MAPK表达下降，而p38 MAPK未见明显变化。结论：DHA可以通过改变细胞周期分布，抑制P-gp及MDR相关蛋白的功能和表达，逆转卵巢癌耐药细胞的耐药性，同时该机制还可能与抑制NF-κB通路、抑制p38 MAPK的磷酸化有关。
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核转录因子-κB信号通路对甲状腺乳头状癌细胞生物学行为的影响
目的 观察核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对甲状腺乳头状癌(PTC)细胞株CGTHW3生物学行为的影响.方法 培养PTC细胞株CGTH W3,将细胞随机分为3组:NF-κB信号通路激活剂组、NF-κB信号通路抑制剂组及空白对照组.用细胞计数试剂盒(CCK-8)法观察细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞凋亡率及周期分布,Transwell小室实验评价迁移能力.结果 (1)NF-κB信号通路的激活可显著促进CGTH W3细胞的增殖;(2)与NF-κB信号通路抑制剂组[(59.17±2.32)％]和空白对照组[(28.50±1.71)％]比较,NF-κB信号通路激活剂组的细胞凋亡比例[(19.85±0.93)％]明显下降(P＜0.05);(3)与NF-κB信号通路抑制剂组和空白对照组比较,NF-κB信号通路激活剂组G1期细胞显著降低,而S期细胞显著升高(P＜0.05);(4) NF-κB信号通路激活组细胞迁移数为(157±8)个,与NF-κB信号通路抑制剂组[(30±2)个]和空白对照组[(52±4)个]比较,细胞迁移能力明显增强(P＜0.05).结论 NF-κB在PTC细胞增殖、凋亡及迁移等过程中起重要作用.
关键词： 甲状腺乳头状癌 核转录因子-κB信号通路 增殖 凋亡 迁移 -
NF-κB信号通路介导人脱落乳牙牙髓干细胞促进破骨细胞形成的体外实验研究
目的:探讨核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路在人脱落乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED)促进破骨细胞形成中的作用.方法:通过酶消化法体外分离培养SHED;建立破骨前体细胞外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)与SHED的间接共培养模型,在破骨诱导液中加入核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路抑制剂BAY11-7082,通过实时定量PCR和West-ern Blot检测破骨相关基因及NF-κB信号通路相关因子表达的差异.结果:SHED共培养组的破骨相关基因CTSK、TRAP的表达水平较PBMCs单独培养组显著上调,而加入BAY11-7082刺激的SHED共培养组中破骨相关基因CTSK、TRAP和RANKL/OPG比值的表达水平显著低于SHED共培养组.结论:NF-κB信号通路通过调控RANK/RANKL/OPG受体配体系统介导SHED促进破骨细胞形成.
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右美托咪啶减轻LPS诱导的巨噬细胞炎症反应及其对NF-κB信号通路的影响
目的 探讨右美托咪啶(DEX)对脂多糖(LPS)诱导的单核巨噬细胞RAW264.7炎性因子释放和核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响.方法 将体外常规培养的小鼠巨噬细胞株RAW264.7分为正常对照组、DEX组、LPS组、LPS+DEX组,DEX、LPS的终浓度分别为10 ng/mL、1μg/mL,正常对照组加入等量PBS.继续培养3、6、12、24 h时,ELISA检测各组细胞炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素(IL)-1β、高迁移率族蛋白1(HMGB-1)的释放;培养12 h时,Western blotting检测各组细胞NF-κB信号通路相关蛋白磷酸化(p)-P65、p-P50的表达.结果 (1)细胞培养3、6、12、24 h时,与正常对照组比较,LPS组细胞培养上清液TNF-α、IL-6、HMGB-1浓度升高,差异有统计学意义(P<0.05);与LPS组比较,DEX+LPS组细胞培养上清液TNF-α、IL-1β、HMGB-1浓度降低,差异均有统计学意义(P<0.05).(2)Western blotting检测显示细胞培养12 h时,与正常对照组比较,LPS组细胞p-P65、p-P50蛋白表达量升高,差异均有统计学意义(P<0.05).与LPS组比较,DEX+LPS组细胞p-P65、p-P50蛋白表达量降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 DEX可以抑制LPS诱导的单核巨噬细胞炎症因子的释放,降低NF-κB信号通路相关蛋白p-P65和p-P50的表达.
关键词： 右美托咪啶 脓毒症 炎症因子 核转录因子-κB信号通路
