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甲状旁腺激素相关蛋白对去卵巢大鼠骨组织中OPG、RANKL基因表达的影响
目的 观察不同剂量间歇性注射甲状旁腺激素相关蛋白氨基端片段1-34(PTHrP1-34)对去卵巢大鼠骨密度及股骨RANKL、OPG基因表达的影响.方法 4月龄健康雌性未孕Wistar大鼠60只,随机分为6组,假手术组(Sham组)和卵巢切除+安慰剂组(Placebo组)给予生理盐水;卵巢切除+雌激素治疗组(E2组)给予苯甲酸雌二醇注射液;卵巢切除+PTHrP治疗组分别用20、40、80μg/kg剂量,每日1次注射PTHrP1-34.给药12周后,测定腰椎L3～6及股骨BMD,利用实时荧光定量RT-PCR方法检测大鼠股骨RANKL、OPG基因表达的水平.结果 ①BMD结果:PTHrP40组和PTHrP80组大鼠股骨、腰椎BMD明显高于Placebo组.②与Sham组相比,Placebo组OPG mRNA明显下降(P＜0.01),RANKL mRNA水平则显著升高(P＜0.01).E2组OPG mRNA水平较Placebo组明显升高(P＜0.01),RANKL mRNA水平显著下降(P＜0.01).与Placebo组相比,不同剂量PTHrP(1-34)治疗组OPG、RANKL mRNA水平无明显变化(P＞0.05).结论 PTHrP1-34 40或80 μg/kg每天皮下注射能提高去卵巢大鼠股骨、腰椎BMD,间歇性注射唧PTHrP(1-34)对去卵巢大鼠骨组织RANKL、OPG mRNA水平无明显影响.
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咬合创伤大鼠牙槽骨中RANKL和OPG mRNA的表达
目的研究NF-κB受体活化因子配体(RANKL)和骨保护蛋白(OPG)) mRNA在咬合创伤大鼠牙槽骨组织中的相对表达水平,探讨RANKL和OPG在咬合创伤牙槽骨改建中的意义.方法将30只大鼠随机分为对照组和实验组组.实验组大鼠左侧上颌第1磨牙咬合面上粘结厚度为1mm的方丝,用Super-bond复合树脂堆积法粘结,形成同侧下颌第1磨牙的咬合创伤模型;对照组未作粘结处理.在1、3、7、14、28天处死大鼠后,提取其左下颌第1磨牙区牙槽骨组织总RNA.用RT-PCR检测RANKL和OPG mRNA表达水平.结果持续性咬合创伤导致牙槽骨内RANKL mRNA表达增强,与对照组在第1、7天比较,差异有统计学意义(P<0.05);OPG mRNA表达减弱,与对照组在第14、28天比较差异有统计学意义(P<0.05).实验组RANKL/OPG mRNA值偏高,但与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论咬合创伤后RANKL mRNA表达增强、OPG mRNA表达减弱,可能与牙周组织适应性改建有关.
关键词： NF-κB受体活化因子配体 骨保护蛋白 咬合创伤 -
脂多糖对牙周膜成纤维细胞IL-8和RANKL基因表达的调节作用
目的:研究牙龈卟啉单胞菌(P.g.)脂多糖(LPS)列人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)中白细胞介素8(IL-8)和NF-κB受体活化因子配体(RANKL)基因表达的调节.方法:取第4代hPDLFs细胞在含有10％胎牛血清(FCS)的DMEM培养基中培养至完全融合后,分别用0.01、0.1、1、10、100 mg/L P.g.LPS作用hPDLFs 10h,实时荧光定量PCR检测IL-8和RANKL mRNA的表达水平.结果:P.g.LPS浓度依赖性地刺激hPDLFs中IL-8和RANKL mRNA的表达水平升高,10 mg/L P.g.LPS上调IL-8 mRNA水平,达到峰值(P＜0.01);100 mg/L P.g.LPS显著增强RANKL mRNA水平(P＜0.01).结论:高浓度的P.g.LPS明显刺激hPDLFs中IL-8和RANKL的基因表达增强.
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蛇床子素对新生大鼠颅骨成骨细胞中OPG、 RANKL mRNA表达的影响
目的:研究蛇床子素对新生大鼠颅骨成骨细胞中OPG、 RANKL mRNA表达的影响.方法:新生大鼠颅骨成骨细胞分离培养后,取第4代细胞,以5×104/mL接种于100cm2培养瓶中,常规培养3d后,更换为无血清DMEM培养液,细胞饥饿过夜.然后每瓶分别加入含不同浓度蛇床子素的培养液,每浓度4瓶,连续给药48h和72h.每日通过相差显微镜观察细胞的形态、生长状况及治疗组和对照组之间的差别.提取和鉴定成骨细胞总RNA.结果:在培养液中加入不同浓度的蛇床子素培养48h后,1×10-7mol/L组OPG、 OPG/RANKL与对照组比较差异有统计学意义;培养72h后,1×10-6mol/L组OPG/RANKL、 1×10-7mol/L组OPG mRNA的相对表达量以及OPG/RANKL与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01, p<0.05).结论:蛇床子素能通过OPG-RANKL-RANK系统影响骨重建.
关键词： 蛇床子素 成骨细胞 骨保护素 NF-κB受体活化因子配体 -
桂枝芍药知母汤对免疫性关节炎大鼠TNF-α与RANKL表达的影响
目的:观察桂枝芍药知母汤对免疫性关节炎大鼠血清中TNF-α与关节滑膜组织RANKL表达的影响,并初步探讨其治疗机制.方法:以弗氏完全佐剂诱导产生免疫性关节炎模型,用不同剂量桂枝芍药知母汤(GSZ汤20.6 g/kg、10.3 g/kg)给模型动物灌胃用药,观察用药后动物血清TNF-α水平与致炎对侧膝关节滑膜组织RANKL表达.结果:桂枝芍药知母汤用药4周后,可明显增加模型大鼠体重增长速度,减轻关节肿胀程度(P<0.05 or P<0.01);使模型大鼠血清TNF-α水平降低(P<0.01)以及滑膜组织RANKL表达下降(P<0.01).本实验条件下,GSZ汤20.6g/kg剂量时的疗效与MTX相当.结论:桂枝芍药知母汤对免疫性关节炎大鼠有治疗作用,其机制可能与抑制TNt-α分泌,降低RANKL表达有关.
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NF-κB信号通路介导人脱落乳牙牙髓干细胞促进破骨细胞形成的体外实验研究
目的:探讨核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路在人脱落乳牙牙髓干细胞(stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED)促进破骨细胞形成中的作用.方法:通过酶消化法体外分离培养SHED;建立破骨前体细胞外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)与SHED的间接共培养模型,在破骨诱导液中加入核转录因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路抑制剂BAY11-7082,通过实时定量PCR和West-ern Blot检测破骨相关基因及NF-κB信号通路相关因子表达的差异.结果:SHED共培养组的破骨相关基因CTSK、TRAP的表达水平较PBMCs单独培养组显著上调,而加入BAY11-7082刺激的SHED共培养组中破骨相关基因CTSK、TRAP和RANKL/OPG比值的表达水平显著低于SHED共培养组.结论:NF-κB信号通路通过调控RANK/RANKL/OPG受体配体系统介导SHED促进破骨细胞形成.
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种植体周围炎中IL-1β、TNF-α、NF-κB信号通路研究进展
目前,患者普遍接受种植义齿修复口内缺失牙.种植义齿修复后出现的种植体周围炎,是导致种植修复失败的主要原因.大部分理论支持种植体周围炎诱导白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)等炎症性细胞因子分泌增多,同时又上调RANKL基因表达,下调OPG基因表达,促使破骨细胞活性增强,间接促进骨吸收,使骨代谢趋向负平衡.为了更深入地了解种植体周围炎与核转录因子κB(nuclear transcription factor kappaB,NF-κB)信号通路之间的关系,本文综述了国内外关于种植体周围炎中NF-κB信号通路的调控作用研究报道,旨在探讨种植体周围炎对骨代谢和NF-κB信号通路的调节机制以及炎症刺激下免疫细胞因子对NF-κB信号通路的影响,为种植体周围炎的研究及预防提供理论基础.
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RANKL/OPG体系与骨髓瘤骨病
骨髓瘤骨病(MBD)是多发性骨髓瘤(MM)的重要病理改变之一,也是MM的主要死亡原因之一,研究其发病机理具有重要的临床意义.RANKL即NF-κB受体活化因子配体,是近发现的一个破骨细胞刺激因子,骨保护素即OPG,是其天然抑制剂.本文就此体系的结构、分布、基本功能及在MBD中的作用进行综述.
关键词： NF-κB受体活化因子配体 骨保护素 骨髓瘤骨病 -
NF-κB受体活化因子配体在假体无菌性松动患者外周血中的表达
目的 通过与正常髋关节患者比较,探讨人工全髋关节置换术(total hip arthroplasty,THA)后假体无菌性松动患者外周血中NF-κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)的表达变化,分析其与假体无菌性松动间的关系. 方法 以2008年1月-2013年1月58例THA术后假体无菌性松动患者作为试验组,63例股骨颈骨折患者作为对照组.两组患者年龄及性别比较,差异无统计学意义(P＞0.05).取两组患者清晨空腹抗凝外周血,采用荧光定量PCR、Western blot及ELISA法检测RANKL基因、蛋白表达水平及其浓度. 结果 试验组RANKL基因、蛋白相对表达量及其浓度分别为18.30±1.09、0.856±0.254、(3.553 5±0.129 7)ng/mL,显著高于对照组的1.00±0.05、0.404±0.102、(1.912 3±0.126 2)ng/mL,比较差异均有统计学意义(t=125.390,P=0.000;t=13.032,P=0.000; t=18.124,P=0.000). 结论 外周血中RANKL可能是THA术后假体无菌性松动的预测因子.
关键词： 人工全髋关节置换术 无菌性松动 NF-κB受体活化因子配体 -
金属离子刺激小鼠成骨细胞骨保护素及其配体表达的实验研究
目的 在人工全髋关节翻修术中发现假体周围大量金属离子聚集和NF-κB受体活化因子配体(receptoractivator of NF-κB ligand,RANKL)表达的增加,通过观察Co~(2+)、Cr~(3+)对小鼠成骨细胞RANKL、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)表达的影响,探讨金属离子与假体无菌性松动关系. 方法 取浓度为1×10~5个/mL体外培养的小鼠成骨细胞,根据培养基不同分两组:实验组采用含10 mg/L CoCl_2及150 mg/L CrCl_3溶液的培养基;对照组采用不含金属离子的培养基.培养24、48 h,采用RT-PCR和ELISA法检测RANKL、OPG mRNA及蛋白表达. 结果 RT-PCR检测示培养24、48 h两组均见RANKL、OPG mRNA的表达,实验组表达量较对照组高,以RANKL增加显著,差异有统计学意义(P<0.05);培养24、48 h,实验组RANKL/OPG mRNA的比值分别为0.860、1.232,较对照组0.695、0.688明显增加,差异有统计学意义(P<0.05).ELISA检测显示,实验组RANKL、OPG蛋白表达量较对照组明显增多,差异有统计学意义(P<0.05). 结论 Co~(2+)、Cr~(3+)可刺激小鼠成骨细胞RANKL、OPGmRNA的表达并促进其蛋白的分泌,以RANKL增加显著,从而促进破骨细胞的形成与活化以及假体无菌性松动的发生.
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周期性张、压应力作用下人牙周膜干细胞RANKL/OPG的变化
目的:对周期性张、压应力作用下人牙周膜干细胞(hPDLSCs)RANKL、OPG及RANKL/OPG比值的变化进行初步探讨.方法:用3000μstrain,0.5 Hz的周期性张、压应力对hPDLSCs分别加载0(对照组)、3、6、12、24 h.Western blotting检测RANKL和OPG的变化,计算RANKL/OPG比值的变化.结果:周期性张应力作用3 h,RANKL/OPG比值达到低点(0.902±0.196),显著低于对照组水平(P=0.000),此后开始上升,但直到24 h,仍低于对照组水平.周期性压应力作用3 h,RANKL/OPG比值达到高点(1.058±0.147),显著高于对照组水平(P=0.000),6 h(0.996±0.103)回落到对照组水平(P=0.152),此后直到24 h(0.8449±0.041),显著低于对照组水平(P=0.000).结论:周期性张、压应力都可以上调hPDLSCs的RANKL和OPG表达.在周期性张应力加载的初24 h,hPDLSCs不能促进破骨细胞分化;而周期性压应力加载的初6 h,hPDLSCs可以促进破骨细胞分化,此后转而抑制破骨细胞分化.
