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微小RNA差异表达谱在原发性干燥综合征的应用
目的 探索原发性干燥综合征(primary Sj(o)gren's syndrome,pSS)患者血清中相关的差异表达微小RNA(microRNA,miRNA).方法 健康对照组和pSS组各选1例进行芯片分析,筛选出pSS患者与健康对照组表达差异有统计学意义的miRNA;选取6例健康对照和6例pSS患者治疗前后的血清,采用荧光定量法对差异表达的miRNA进行验证;通过TargetScan、miRanda以PicTar预测miRNA作用的靶基因并分析相关信号通路的生物学信息.结果 共发现53条miRNA表达差异有统计学意义,选取22条差异倍数＞1.5倍的miRNA,pSS治疗前组与对照组比较miR-146a-Sp、miR-4484和miR-4687-5p表达均上调(P＜0.05),miR-146a-5p和miR-4687-5p验证结果与芯片一致.治疗前组和治疗后组比较,miR-146a-Sp和miR-4484表达均下调(P＜0.05),而miR-4687-5p表达依然上调.靶基因预测结果显示pSS中miRNA可能通过Notch信号通路和花生四烯酸以及溶酶体等代谢发挥信号转导作用.结论 pSS患者与健康人群存在差异表达的miRNA,这些miRNA表达可能参与pSS疾病的发生和发展,对pSS诊断有一定价值.
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SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测肾移植患者CsA效用
目的:检测肾移植患者外周血淋巴细胞(PBL)有关细胞因子基因表达,判定环孢素A(CsA)效用,进一步验证CsA服用后2 h浓度(C2)测定的必要性.方法:采用SYBR GreenⅠ荧光定量PCR对20例肾移植患者术后第7天PBL的IL-2和IFN-γmRNA表达进行检测,判定CsA的免疫抑制效用,对比CsA空腹浓度(C0)和C2与细胞因子抑制关系.结果:C2对应IL-2和IFN-γmRNA/β-actin mRNA相对模板数分别为0.038±0.006和0.018±0.004,C2对IL-2和IFN-γmRNA表达抑制率分别为(72.42±3.95)%和(69.52±6.97)%;C2与IL-2和IFN-γmRNA表达的抑制率有良好的线性关系(P＜0.01);C0与IL-2和IFN-γmRNA表达的抑制率无良好的线性关系(P＞0.05).结论:SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR技术检测肾移植患者术后PBL的IL-2和IFN-γ mRNA的表达,是判定CsA效用和研究免疫耐受的有效方法;C2仍为判定CsA生物利用度的重要指标.
关键词： 荧光定量反转录聚合酶链反应 肾移植 环孢素 -
产AmpC酶铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药机制的研究
目的 研究产AmpC酶的铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的分子机制.方法 2003-2007年从临床标本中分离到铜绿假单胞菌220株,采用三维试验筛选产β内酰胺酶(包括AmpC酶)的铜绿假单胞菌,应用多重PCR检测产AmpC酶的铜绿假单胞菌质粒携带的AmpC耐药基因,应用荧光定量RT-PCR的方法 检测染色体AmpC酶基因和oprD2基因的表达情况.结果 共检出40株产β内酰胺酶的菌株.其中产AmpC酶、ESBLs、金属酶(MBL)和未知酶型铜绿假单胞菌的构成比分别是62.5%(25/40)、20%(8/40)、7.5%(3/40)和10%(4/40).25株产AmpC酶菌株均有不同程度AmpC酶基因表达量升高,其中,仅1株细菌携带DHA质粒型AmpC酶基因,12株菌oprD2基因表达量减低,这些菌株均对亚胺培南耐药,13株菌oprD2基因表达量正常,其中仅5株菌对亚胺培南耐药;7株菌(占产AmpC酶菌株的28%,不产金属酶)的酶粗提物能微弱水解IPM,这7株菌AmpC酶基因的表达量均有明显升高,其中5株菌同时伴有oprD2基因表达量降低.结论 铜绿假单胞菌产生的AmpC酶可微弱水解亚胺培南,且其水解亚胺培南可能与AmpC酶产生量有一定关系;产AmpC酶铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的原因可能是细菌AmpC酶表达量增加和oprD2表达量减低两者共同作用的结果 .
关键词： 铜绿假单胞菌 AmpC酶 OprD2蛋白 荧光定量反转录聚合酶链反应 -
荧光定量反转录-聚合酶链反应检测鼻咽癌患者外周血肿瘤细胞微转移的研究
目的 探讨荧光定量反转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)检测外周血CK14 mRNA、表皮生长因子受体(EGFR)mRNA的表达在鼻咽癌患者外周血肿瘤细胞微转移诊断中的价值.方法 采用FQ-RT-PCR方法检测87例入组鼻咽癌患者外周血CK14 mRNA、EGFR mRNA的表达,并分析其与肿瘤TNM分期、临床分期、组织分化程度的关系.结果 87例鼻咽癌患者外周血中,CK14 mRNA、EGFR mRNA阳性表达率分别为64.4%( 56/87)、58.6% (51/87),两者联合检测的阳性表达率为71.3% (62/87)；CK14 mRNA、EGFR mRNA的表达水平与T分期、N分期、临床分期、组织分化程度有关(P＜0.05),分期越晚,外周血中CK14 mRNA、EGFR mRNA 的表达水平越高,低分化鳞癌患者外周血中CK14 mRNA、EGFR mRNA的表达水平高于高中分化鳞癌患者.结论 FQ-RT-PCR方法检测鼻咽癌患者外周血CK14 mRNA、EGFR mRNA的表达,能够较准确反映外周血肿瘤细胞微转移的情况,在诊断鼻咽癌患者外周血肿瘤细胞微转移方面有一定的可行性；鼻咽癌患者外周血肿瘤细胞微转移与肿瘤的恶性程度和病情进展有关.(中国眼耳鼻喉科杂志,2011,11:219-223)
关键词： 鼻咽癌 微转移 荧光定量反转录聚合酶链反应 -
GSTP1基因在急性低压低氧大鼠模型肺组织中的定量检测
通过模拟低压低氧(7000±50 m)考察谷胱苷肽转移酶p1基因 (Glutathione S-transferase p1, GSTP1)对低压低氧的敏感性,以探讨GSTP1在机体适应急性低压低氧环境中的分子机制.30只雄性SD大鼠随机分为5组:0、1、3、5、7 d组,每天在模拟7000±50 m高度的低压低氧舱内暴露12 h,连续暴露6 h后,休息1 h,再继续暴露6 h.采用荧光定量-反转录-聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)技术对急性低压低氧大鼠模型肺组织中GSTP1基因表达进行定量分析,同时用分光光度法测定了肺组织中谷胱苷肽转移酶(glutathione S-transferases, GSTs) 的活性和丙二醛(Maleic dialdehyde, MDA)的变化.结果显示,与未暴露组相比,GSTP1基因从第1 d到第7 d的表达有显著性差异(P＜0.05);GSTs活性从第1 d到第7 d呈下降趋势,MDA呈上升趋势,与未暴露组相比,均有显著性差异(P＜0.05).结果表明:GSTP1基因对低压低氧敏感,并可考虑作为机体适应特殊环境进行基因选材的一个新指标.
关键词： 胱苷肽转移酶p1基因 低压低氧 荧光定量反转录聚合酶链反应
