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氯化锂毛果芸香碱癫(疒间)鼠模型B1与B2激肽受体表达研究
目的 检测B1与B2激肽受体在氯化锂毛果芸香碱致癫(疒间)鼠模型海马中的表达变化并探讨其作用机制. 方法 选择清洁雄性Wistar大鼠35只,随机分为空白对照组5只;实验组15只,将氯化锂毛果芸香碱腹腔注射法制作癫(疒间)模型,分为6 h,5、60天时间点,每时间点5只;生理盐水对照组15只,腹腔注射剂量相等的生理盐水,按实验组相应的时间点,每时间点5只.相应时间点处死大鼠取海马标本,应用RT-PCR方法检测海马齿状回、CA1、CA3区的B1与B2激肽受体的表达变化,并进行组间比较. 结果 6 h、5天时间点实验组较生理盐水对照组B1激肽受体mRNA表达均显著上调,差异有显著性意义(P＜0.05),60天时差异无显著性意义(P＞0.05);实验组各时间点均较60天生理盐水对照组B2激肽受体mRNA表达显著上调,差异有显著性意义(P＜0.05);生理盐水对照组与空白对照组比较,B1与B2激肽受体mRNA表达差异无显著性意义(P＞0.05). 结论 B1与B2激肽受体mRNA表达失衡在癫(疒间)的发生、发展过程中可能起着重要的作用.
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缓激肽B2受体对人绒毛外滋养细胞生长及生物学功能的影响及可能机制
目的 探讨缓激肽B2受体(bradykinin B2 receptor,B2R)对人绒毛外滋养细胞增殖和功能的影响及其可能机制. 方法 人绒毛外滋养细胞(HTR-8/SVneo细胞)分为4组:空载体质粒组转染pcDNA-3.1质粒;B2R表达质粒组转染pcDNA3.1-B2R质粒;小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)阴性对照组转染siRNA阴性对照序列;B2R特异性siRNA组转染B2R特异性siRNA序列.采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应技术和蛋白质印迹技术检测转染后细胞中B2R以及基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-9、细胞周期蛋白-1和血管内皮生长因子-A mRNA及蛋白的表达变化.采用细胞计数试剂盒-8及流式细胞术检测细胞活性以及细胞周期;细胞迁移实验和侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力;细胞成环实验检测细胞成血管能力.采用t检验进行统计学分析. 结果 (1)与空载体质粒组相比,B2R表达质粒组细胞中B2R mRNA(5.06±0.49与1.00±0.28,t=7.226,P=0.002)及蛋白表达水平升高(1.34±0.07与1.00±0.05,t=3.727,P=0.006);与siRNA阴性对照组相比,B2R特异性siRNA组细胞中B2R mRNA(0.34±0.05与1.00±0.17,t=3.667,P=0.021)及蛋白表达水平降低(0.74±0.03与1.00±0.05,t=4.097,P=0.006).(2)与空载体质粒组相比,B2R表达质粒组细胞增殖活性升高(1.50±0.03与1.34±0.04),使细胞周期由G0/G1期向S期转变;与siRNA阴性对照组相比,B2R特异性siRNA组细胞增殖活性降低(1.06±0.04与1.20±0.02),并使细胞周期停滞于G0/G1期;差异均有统计学意义(P值均＜ 0.05).(3)与空载体质粒组相比,B2R表达质粒组细胞迁移距离[(80.67±0.33)与(41.33±5.24)μm]、穿膜细胞数[(360.70±12.33)与(268.70±14.45)个]及细胞成环数增加[(28.20±2.47)与(14.00±1.67)个];与siRNA阴性对照组相比,B2R特异性siRNA组细胞迁移距离[(56.00±3.51)与(87.00±1.53)μm]、穿膜细胞数[(143.30±12.91)与(252.30±17.07)个]及细胞成环数减少[(6.25±1.49)与(15.75±2.02)个];差异均有统计学意义(P值均＜0.05).(4)基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9 mRNA,以及细胞周期蛋白-1和血管内皮生长因子-AmRNA及蛋白表达水平在B2R表达质粒组高于空载体质粒组,在B2R特异性siRNA组低于siRNA阴性对照组,差异均有统计学意义(P值均＜ 0.05). 结论 B2R可能通过促进基质金属蛋白酶-2、基质金属蛋白酶-9、细胞周期蛋白-1和血管内皮生长因子-A的表达,从而增强人绒毛外滋养细胞活性,以及迁移、侵袭及成环能力.
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子宫内膜异位症疼痛与缓激肽B1受体阻断剂的关系
子宫内膜异位症(EMs)是指有功能的子宫内膜异位在子宫腔外,疼痛是其常见的临床症状.目前,EMs疼痛的发病机制尚不明确.缓激肽是目前已知强的致痛剂,而缓激肽B1受体是维持炎症反应中渗出及疼痛持续发生的主要因素之一.近年对缓激肽B1受体阻断剂在炎症和疼痛等多个方面的研究发现,其不仅能抑制炎症反应,并且有明显缓解疼痛的效果.对EMs疼痛以及缓激肽B1受体阻断剂在疼痛方面的研究做一综述.
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人激肽释放酶基因对5/6肾切除大鼠肾间质纤维化的干预效应
目的 探讨人组织型激肽释放酶(HK)基因对5/6肾切除大鼠肾间质纤维化的干预效应及有关机制.方法 将HK基因克隆入重组腺相关病毒载体(rAAV)中,经三质粒共转染方法在293细胞(HEK293)中包装成rAAV-HK病毒.雄性Wistar大鼠(n=24)按随机数字表法分为假手术组和5/6肾切除组,1个月后5/6肾切除组再按随机数字表法分为单纯手术组(n=6,不给予病毒注射)、实验组[n=6,单次尾静脉注射1x1011蚀斑形成单位(pfu)的rAAV-HK病毒1和对照组(n=6,单次尾静脉注射1×1011pfu的rAAV-GFP病毒).于术前、术后1个月(基因转染前)及转染后1～3个月测大鼠尾动脉血压.转染3个月后处死动物,取其心、肾等脏器,提取总RNA及蛋白质,经RT-PCR、Western印迹及ELISA方法检测HK基因在大鼠体内表达.肾组织切片行Masson染色观察大鼠肾间质病理变化,并行免疫组化染色检测缓激肽B2受体(BKB2R)和血管紧张素Ⅱ1型受体(ATlR)在肾脏的分布.Western印迹检测肾组织BKB2R、AT1R及磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(p-MAPK)蛋白的表达水平.结果 HK基因转染3个月后,与对照组相比,实验组大鼠血压显著下降[(163±13)mmHg比(217±16)mm Hg,P<0.01)1(1mm=Hg0.133 kPa).与假手术组相比,单纯手术组和对照组肾间质有较多胶原沉积,呈现明显纤维化,而实验组胶原沉积较少,纤维化程度较轻,肾小管间质损伤指数显著小于对照组(1.33±0.73比3.01±0.62,P<0.01).免疫组化检测发现,BKB2R和AT1R主要分布于肾小管上皮细胞.基因转染后,肾组织BKB2R蛋白表达水平显著上调(P<0.05),而AT1R蛋白表达水平显著下调(P<0.05);信号传导分子p-MAPK蛋白表达水平显著下调(P<0.05).结论 HK基因导入明显减轻5/6肾切除大鼠肾间质纤维化程度,其机制可能与其调节BKB2R和AT1R蛋白在肾组织中的表达水平有关.上述作用可能与MAPK信号传导途径有关.
