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β羟丁酸对阿尔茨海默病模型细胞神经营养因子受体p75表达的影响及机制探讨
目的 探讨β羟丁酸对阿尔茨海默病(AD)模型细胞神经营养因子受体p75(p75NTR)的调控及其机制. 方法 以终浓度为5 mmol/L β羟丁酸对体外培养SH-SY5Y细胞预处理,再加入Aβ(终浓度为10、20、40、80 μmol/L),同时设立对照组和单纯Aβ处理组,24 h后收集细胞,采用MTT法测定各组细胞活力.其次,将培养的细胞分为4组,单纯β羟丁酸组和β羟丁酸干预组细胞以终浓度为5 mmol/Lβ羟丁酸预处理,再向Aβ处理组和β羟丁酸干预组细胞加入终浓度为20μmol/L Aβ,对照组仅加入培养液,6h、24 h后收集细胞,以实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测各组细胞中神经营养因子受体p75(p75NTR)、组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)、HDAC2 mRNA及其蛋白表达水平以及p65蛋白表达水平.后,以小干扰RNA(siRNA)沉默HDAC1/2,分析细胞p75NTR mRNA及蛋白表达水平. 结果 40、80 μmmol/L Aβ处理组细胞活力低于对照组(均P＜0.01),β羟丁酸干预组细胞活力高于Aβ处理组(P＜0.01).与对照组相比,6h、24 h单纯β羟丁酸组细胞p75NTR mRNA及蛋白、p65蛋白表达水平升高(P＜0.05),Aβ处理组细胞p75NTR mRNA及蛋白、p65蛋白表达水平降低(P＜0.01),6h单纯β羟丁酸组细胞HDAC1/2 mRNA及蛋白表达水平降低(P＜0.05),6h、24 h Aβ处理组细胞HDAC1/2mRNA及蛋白表达水平升高(均P＜0.01);与Aβ处理组相比,6h、24 hβ羟丁酸干预组细胞p75NTR mRNA及蛋白表达水平、p65蛋白表达水平升高(P＜0.01),HDAC1/2 mRNA及蛋白表达水平降低(P＜0.05).沉默HDAC1的细胞p75NTR mRNA及其蛋白表达水平升高(P＜0.05),沉默HDAC2则差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 β羟丁酸可通过抑制HDAC1,影响p75NTR表达,进而激活p65蛋白,发挥保护神经的作用.
关键词： 阿尔茨海默病 淀粉样β蛋白 神经营养因子受体p75 β羟丁酸盐 -
嗅鞘细胞移植治疗大鼠脑损伤:可行性分析及效果验证
背景:脑损伤是中枢神经系统的一种严重刨伤,如何促进脑损伤后的神经再生和功能恢复尤为棘手.嗅鞘细胞有利于神经元存活,并促进轴突再生.目的:进一步探讨嗅鞘细胞移植治疗大鼠脑损伤的可行性及效果.方法:健康成年SD雄性大鼠90只,取10只用于制备嗅鞘细胞,剩余80只随机均分为2组,采用线栓法建立大脑中动脉闭塞模型,1周后细胞移植组经颈动脉将2×10~6个嗅鞘细胞注入脑缺血大鼠体内,模型对照组同法注入等体积无菌生理盐水.采用爬行记分法检测神经功能缺损情况,苏木精-伊红染色检测损伤脑组织病理变化,免疫组化染色法测定损伤脑组织中胶质原纤维酸性蛋白和神经营养因子受体p75的表达.结果与结论:与模型对照组比较,脑缺血再灌注后1,2,3,4周细胞移植组神经功能缺损评分均明显降低(P＜0.05);损伤脑组织病理变化减轻,神经细胞变性及坏死数量明显变少,间质水肿较轻.细胞移植组在梗死半球可见大量胶质原纤维酸性蛋白和神经营养因子受体p75阳性细胞,对侧半球及血管内皮细胞处也可见少量分布;模型对照组呈阴性表达.结果进一步验证了嗅鞘细胞移植治疗大鼠缺血性脑损伤是可行有效的.
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大鼠脑出血后血肿周围脑组织p75NTR的表达及其与细胞凋亡的关系
目的 研究大鼠脑出血后不同时期血肿周围组织中p75NTR的表达规律及与其细胞凋亡的相关性.方法 采用自体动脉血注入右侧尾状核制备大鼠脑出血动物模型,分别于脑出血后6h、24 h、72 h和10d处死大鼠获取血肿周围脑组织标本,通过流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫组化法及实时荧光定量PCR检测p75NTR蛋白及mRNA的表达.结果 脑出血后6 h p75NTR蛋白和nRNA表达水平即上升,24 h继续升高,72 h到达高峰,至10d仍维持在较高水平,与对照组相比均差异显著(P＜0.05).脑出血后细胞凋亡率的动态变化趋势与p75NTR蛋白及mRNA表达变化一致,两者之间呈显著正相关(P＜0.05).结论 脑出血后p75NTR可能参与介导脑细胞凋亡.
关键词： 脑出血 神经营养因子受体p75 细胞凋亡 大鼠 -
电针对脑缺血再灌注大鼠脑组织内NGF和p75NTR表达的影响及相关机制研究
目的:观察电针刺激特定穴位,对脑缺血再灌注(MCAO/R)模型大鼠脑组织内神经生长因子(NGF)和低亲和力神经营养因子受体p75(p75NTR)表达水平的影响,探讨电针特定穴位治疗缺血性脑血管病的相关作用机制.方法:将雄性SD大鼠30只随机分为两组:假手术组和模型复制组.模型复制组大鼠参照Longa的线栓法,对其改良后进行复制脑缺血再灌注大鼠模型.根据Longa的评分标准对大鼠神经功能进行评分.模型复制成功的大鼠再随机分为缺血组和电针治疗组,电针治疗组针刺“百会”“印堂”,双侧“足三里”穴并予以电针刺激,假手术组和缺血组则不予干预.连续电针干预2周后,在末次干预后24h再次进行神经功能评分,再断髓处死所有大鼠,剥离出大鼠的脑组织,并采用免疫印迹检测方法对所有大鼠脑组织内NGF及p75 NTR蛋白表达水平进行检测.结果:与假手术组比较,缺血组大鼠脑组织内NGF及p75NTR蛋白表达水平升高(P＜0.01,P＜0.05);与缺血组比较,电针治疗组大鼠,在其脑组织中NGF蛋白表达水平显著上调(P＜0.01,P＜0.05),p75NTR蛋白表达水平亦显著上调(P＜0.01,P＜0.05).结论:脑缺血再灌注损伤发生后,电针特定穴位可以有效促进NGF与其低亲和力受体p75NTR的表达,以促进神经再生.电针特定穴位可以上调NGF及p75NTR表达水平促进神经再生进而实现其脑保护作用.
关键词： 脑缺血再灌注 电针 神经生长因子 神经营养因子受体p75 大鼠 -
神经营养因子受体同源物2通过上调proNGF、sortilin、p75NTR表达诱导脑出血后血肿周围脑组织细胞凋亡
目的 探讨脑出血后不同时期血肿周围脑组织中神经营养因子受体同源物2(NRH2)、神经生长因子前体(proNGF)、sortilin、神经营养因子受体p75 (p75NTR)表达及与细胞凋亡的关系.方法 收集临床脑出血后实施血肿清除术的周围组织标本,根据脑出血距离标本取出时间,分为6h以内(包括6h)、6h以上至24h(包括24h)、24h以上至72 h(包括72 h)、72 h以上4组,同时取10例手术过程中血肿远隔部位掉落的组织块作为对照组,通过末端脱氧核糖核酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸缺口末端标记法(TUNEL)测定脑细胞的凋亡指数(AI),采用实时荧光定量PCR、Western blot法分别检测脑组织中NRH2、proNGF、sortilin、p75NTR mRNA和蛋白表达,Western blot法检测脑组织中Bcl-2、Bax的表达.体外培养大鼠皮层星形胶质细胞,经NRH2 siRNA或scramble siRNA转染后,Western blot法检测proNGF、sortilin、p75NTR蛋白表达.结果 与对照组以及6h以内的脑出血组相比,脑出血后6h以上各组AI升高,以24h以上至72 h内组为高,但6h以内的脑出血组AI与对照组无区别.随着脑出血时间的延长,proNGF、p75NTR mRNA和蛋白表达水平逐渐升高,24h以上至72 h达到高峰,72 h后仍处于较高水平.与对照组和6h以内的脑出血组比较,脑出血后6h以上至24h内(包括24h),脑组织NRH2、sortilin的mRNA与蛋白表达水平及Bax表达水平即增加,24h以上至72 h内达高峰,72 h后仍维持在较高水平.但与对照组比较,6h以内的脑出血组上述指标无显著性差异.与对照组相比,6h以内的脑出血组Bcl-2表达水平无明显变化,脑出血后6h以上的脑出血各组脑组织Bcl-2表达水平降低,以24h以上至72 h内处于低值.NRH2 siRNA组proNGF、sortilin、p75NTR蛋白表达水平明显低于空白对照组、scramble siRNA组.结论 NRH2在脑出血后血肿周围脑组织中表达增加,通过促进proNGF、sortilin、p75NTR表达增加Bax/Bcl-2比率,从而诱导脑细胞凋亡.
