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不同月龄大鼠心脏α1受体对血管紧张素Ⅱ1型受体和2型受体信号转导的影响
目的 研究不同月龄组Wistar大鼠心脏激动α1肾上腺素受体(α1-AR)对血管紧张素Ⅱ 1型受体(AT1R)和2型受体(AT2R)信号转导的影响.方法 在3.5月龄、12.0月龄、18.0月龄和24.0月龄Wistar大鼠,取部分心肌组织激动AT1R,测定酪氨酸激酶活性,激动AT2R,测定胞浆型磷脂酶A2(cPLA2)活性与环磷酸鸟苷(cGMP)水平.分别与α1-AR共同激动时的相应指标比较. 结果 在3.5月龄和12.0月龄大鼠心肌,激动α1-AR可升高AT1R介导的酪氨酸激酶活性,而对18及24月龄大鼠AT1R介导的酪氨酸激酶活性则没有明显影响.激动α1-AR使3.5、12.0、18.0、24.0月龄组大鼠心肌AT2R介导的cPLA2活性及cGMP水平[分别为(102.7±12.7)fmol/mg心肌和(78.3±12.0)fmol/mg心肌、(81.0±9.4)fmol/mg心肌和(58.5±10.0)fmol/mg心肌、(69.8±5.6)fmol/mg心肌和(53.3±9.7)fmol/mg心肌、(57.7±8.0)fmol/mg心肌和(40.5±6.0)fmol/mg心肌]均降低(分别为P＜0.05,P＜0.01).结论 α1-AR对青年大鼠心肌AT1R的信号转导途径有增强作用,这种作用在衰老心脏减弱.α1-AR对各年龄组大鼠AT2R的信号转导途径均有抑制效应.
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大鼠心脏α1-肾上腺素受体和血管紧张素Ⅱ受体亚型mRNA水平的增龄改变
目的 从受体信使RNA(messenger RNA,mRNA)水平研究了心脏α1-肾上腺素受体(α1-AR)亚型和血管紧张素Ⅱ受体(ATR)亚型在大鼠增龄过程中表达水平的变化. 方法 采用半定量逆转录聚合酶链反应(semiquantitative reverse transcription polymerase chain reaction,RTPCR)分别对3月龄(青年)、12月龄(中年)、18月龄(老年前期)和24月龄(老年)Wistar大鼠左心室的mRNA水平进行测定. 结果 α1A-AR随增龄逐渐F调,各年龄组的表达水平分别为0.71±0.06、0.29±0.06、0.23±0.03、0.12±0.04.α1D-AR在中年和老年前期下凋,各年龄组的表达水平分别为0.52±0.05、0.41±0.03、0.24±0.11、0.27±0.08.α1B-AR的表达未随增龄而变化.AT1 R在老年组出现明显上调,各年龄组的表达水平分别为0.60±0.14、0.58±0.12、0.68±0.10、1.09±0.14.AT2R的表达水平在增龄过程中无明显变化. 结论 α1-AR哑型和ATR亚型的表达水平随年龄增长出现了明显改变,这可能是心脏在衰老过程中产生的适应性反应,并且对维持衰老心脏的生理功能具有重要意义.
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HEK293细胞中细丝蛋白-C对α1A-肾上腺素受体介导细胞外信号调节激酶磷酸化作用的影响
目的寻找与α1A-肾上腺素受体(α1A-AR)相互作用的胞浆内非G蛋白,研究蛋白对受体信号转导的影响.方法应用酵母双杂交技术,以人α1A-AR胞浆内C末端(α1A-AR-CT)为诱饵,筛选人脑cDNA文库,用5-溴-4-氯-3-吲哚半乳糖苷(X-Gal)定性分析及邻硝基苯基β-D-半乳糖苷(ONPG)定量分析对筛选出的阳性克隆细丝蛋白-C(FLN C)进行确证.采用脂质体转染及蛋白免疫印迹技术探讨人胚胎肾293(HEK293)细胞中FLN C对α1A-AR信号转导通路的影响.结果①缺陷培养基筛选出FLN C的C末端部分片段可以与α1A-AR-CT在酵母中结合.②X-Gal定性分析中,FLN C与α1A-AR-CT的共转子菌落6 h即呈现蓝色,而对照菌落颜色无变化;经ONPG定量分析发现,FLN C与α1A-AR-CT的共转子中β-半乳糖苷酶的活性大约是对照的2～3倍(P<0.01).③编码FLN C的C末端片段的质粒瞬时转染于稳定表达全长α1A-AR的HEK293细胞中,可以明显增强去氧肾上腺素(10 μmol*L-1,30 min)激动α1A-AR介导的细胞外信号调节激酶(ERK1/2)磷酸化作用.结论 FLN C的C末端部分片段可以与α1A-AR-CT在酵母中结合,并且增强HEK293细胞中α1A-AR介导ERK1/2磷酸化的作用.
