首页 > 文献资料
-
miR-202调控GLI-2干预肺癌A549细胞的增殖和凋亡
目的 探讨miR-202对肺癌A549细胞增殖和凋亡的调控作用及其相关机制.方法 培养肺腺癌A549细胞和肺正常上皮BEAS-2B细胞,利用Real time-PCR检测miR-202在上述细胞中的表达水平;合成并将miR-202 minic和miR-NC转染进入A549细胞后,应用MTT检测12、24、48 h时细胞的抑制率,使用流式细胞术检测转染后48 h细胞的凋亡情况,利用western blot检测GLI-2蛋白的表达情况;构建野生型和突变型GLI-2 3'UTR插入pMIR-REPORTTM luciferase vector载体,并将其与pRL-TK质粒共转染进入A549细胞,之后分别将等量的pre-miR-202和miR-NC再转染进入A549细胞,利用双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测萤火虫和海肾荧光素酶活性.结果 miR-202在A549细胞中的相对表达量显著低于在BEAS-2B细胞中的表达量(P＜0.01);miR-202 minic组在12、24、48和72 h的细胞抑制率显著高于对照组和miR-NC组(P＜0.01);miR-NC组在72 h时细胞抑制率显著高于对照组(P＜0.01).此外,miR-202minic组细胞凋亡率显著高于miR-NC和对照组(P＜0.01),并且miR-NC组的细胞凋亡率显著高于对照组(P＜0.01).荧光素酶报告基因结果说明GLI-2是miR-202的靶基因.miR-202minc转染A549细胞后可显著降低GLI-2蛋白的表达,而miR-NC组与对照组相比较,GLI-2蛋白表达无显著差异.结论 miR-202通过下游靶基因GLI-2调控肺癌A549细胞的增殖和凋亡,其可作为治疗肺癌的潜在靶点.
-
原发性肝细胞癌组织Shh和Ptch-1与Gli-2表达及生物学意义的研究
目的:探讨原发性肝细胞癌(HCC)Sonic hedgehog信号通路信号肽Shh、膜受体Ptch-1和核转录因子Gli-2的表达及其生物学意义.方法:将44例HCC组织及其相应的癌旁肝组织制成含88个微组织的组织芯片,采用免疫组织化学方法分别检测了Shh、Ptch-1和Gli-2在两种组织中的表达情况.结果:在HCC组织中,Shh与Ptch-1阳性率(63.6%和45.5%)均显著高于癌旁肝组织(36.4%和25.0%),P均<0.05.Gli-2在HCC中表达阳性率(68.2%)显著高于癌旁肝组织(38.6%),P<0.01;且与HCC的组织学分级以及侵袭性相关,P均<0.05;与肿瘤大小和HBV感染无关.结论:增强的Gli-2活性导致细胞异常增殖,其所引起的Shh信号通路的过度激活可能促进HCC的发生和发展.
-
GLI-2和SFRP-1在髓母细胞瘤中的表达及其意义
目的 探讨GLI-2(GLI family zinc finger 2)和SFRP-1(Secreled frizzled-related protein 1)在髓母细胞瘤(Medulloblastoma,MB)组织中的表达及其意义.方法 采用SP免疫组化法检测32份MB组织中GLI-2和SFRP-1的表达,分析两种蛋白之间及其与MB临床病理特征之间的相关性.结果 32例MB中,GLI-2和SFRP-1的阳性表达率分别为50％(16/32)和68.75％(22/32);MB中GLI-2和SFRP-1的表达在不同年龄、性别、肿瘤大小及部位中,差异均无统计学意义(P＞0.05)；SFRP-1在SHH-MB与NON-SHH-MB中的表达差异有统计学意义(P＜0.001)；GLI-2与SFRP-1在MB中的表达呈显著正相关(P＜0.001).结论 GLI-2和SFRP-1的异常表达可能对MB的发生、发展起一定的作用.GLI-2和SFRP-1可作为MB重要的生物学指标,有助于对MB患者危险度评估及患者术后放化疗方案的选择.
-
Hedgehog信号通路与Snail在肝癌细胞系中的表达及意义
目的 探讨Hedgehog(Hh)信号通路在各种肝癌细胞系中的表达及其与Snail蛋白的关系.方法 用RT-PCR检测了Hh信号通路分子Shh、Ihh、Ptch-1、Smo、Gli-1、Gli-2、Gli-3 mRNA在4种肝癌细胞系HepG2、Hep3B、SMMC-7721、Huh-7和永生化肝细胞系L02中的表达情况,应用Western blot检测了Snail蛋白在SMMC-7721和L02细胞中的表达差异.结果 RT-PCR结果显示Hedgehog信号通路分子mRNA在肝癌细胞株中呈高表达,并以Shh信号为主;Gli-2在SMMC-7721细胞中表达显著,而在正常肝细胞株L02中表达弱,两者差异显著(P<0.01).Snail蛋白在SMMC-7721细胞中的表达显著高于L02细胞(P<0.05),且与Gli-2的表达呈正相关(P<0.05).结论 Hh信号通路可能通过Gli-2上调Snail的表达,增强肝癌细胞增殖力和侵袭力,促进肝细胞癌的发生和发展.
关键词： 癌 肝细胞 Hedgehog信号通路 GLI-2 Snail -
Gli抑制剂诱导胃癌细胞凋亡作用的研究
目的 研究Gli抑制剂GANT61对人胃癌细胞AZ521和AGS凋亡的作用.方法 应用不同浓度(0、10、20μmol/L)的GANT61处理AZ521和AGS细胞24 h后,蛋白免疫印迹法(Western blot)观察GANT61作用于AZ521和AGS细胞后对Gli-1、Gli-2、Bcl-2和Caspase-3蛋白表达的影响.流式细胞术观察细胞凋亡及Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达.结果 Western blot结果显示GANT61可以剂量依赖性显著下调AZ521和AGS细胞Gli-1、Gli-2和Bcl-2蛋白表达和增加Caspase-3蛋白表达.流式细胞术检测显示10 μmol/L GANT61作用AZ521,AGS细胞后凋亡率为(19.37±0.81)％和(16.1±0.26)％,显著高于0 μmol/L GANT61凋亡率(4.23±0.35)％和(6.00±0.87)％(P＜0.05);10 μmol/L和20 μmol/L GAN761的AZ521细胞中Bcl-2蛋白表达水平分别为355.33±10.12、312.67±7.37,与0μmol/L GANT61 423.33±11.37相比显著降低(P＜0.05);10μmol/L和20 μmol/L GAN761的AGS细胞中Bcl-2蛋白表达水平分别为306.67±4.16、273.33±8.02,与0 μmol/L GANT61388.33±11.06相比显著降低(P＜0.05);10 μmol/L和20 μmol/L GANT61的AZ521细胞中Caspase-3蛋白表达水平分别为305±9.64、360.24±8.54,与0 μmol/L GANT61 261.12±11.53相比显著增高(P＜0.05);10 μmol/L和20 μmol/L GANT61的AGS细胞中Caspase-3蛋白表达水平分别为255.00±6.56、310.67±8.50,与0μmol/L GANT61 198.33±2.50相比显著增高(P＜0.05).结论 GANT61通过特异性抑制Gli-1,Gli-2蛋白表达从而调节AZ521和AGS细胞中Bcl-2和Caspase-3蛋白表达水平,诱导细胞凋亡.
