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miR-202通过抑制PGC1β表达促进3T3-L1前脂肪细胞分化
目的 观察miR-202对3T3-L1前脂肪细胞分化的影响及可能的机制.方法 通过慢病毒感染构建稳定表达AMO-miR-202和乱序对照miRNA细胞系,随后诱导分化.至分化的第9天,油红O染色观察细胞内脂滴的情况;RT-PCR检测过氧化物酶体激活增殖受体γ2(PPARγ2)和aP2的基因表达;Western blot检测PPARγ2、aP2和miR-202靶基因PPARγ辅助活化因子1β(PGC1β)蛋白表达.结果 经293T细胞慢病毒包装AMO-miR-202、乱序对照miRNA,荧光显微镜下可见约80%~90%荧光细胞;将上述2组病毒液分别感染3T3-L1前脂肪细胞后,可见约70%~80%荧光细胞.AMO-miR-202组细胞内脂滴及PPARγ2和aP2的mRNA表达显著低于乱序对照组和对照组(P<0.05).与乱序对照组和对照组相比,AMO-miR-202组PGC1β蛋白表达显著增加(P<0.05),PPARγ2和aP2蛋白表达显著降低(P<0.01),而乱序对照组和脂肪细胞组上述指标无明显差异.结论 miR-202可能通过抑制PGC1β、提高PPARγ2和aP2的表达促进3T3-L1前脂肪细胞分化.
关键词： miR-202 3T3-L1前脂肪细胞 脂肪细胞分化 PGC1β -
miR-202调控GLI-2干预肺癌A549细胞的增殖和凋亡
目的 探讨miR-202对肺癌A549细胞增殖和凋亡的调控作用及其相关机制.方法 培养肺腺癌A549细胞和肺正常上皮BEAS-2B细胞,利用Real time-PCR检测miR-202在上述细胞中的表达水平;合成并将miR-202 minic和miR-NC转染进入A549细胞后,应用MTT检测12、24、48 h时细胞的抑制率,使用流式细胞术检测转染后48 h细胞的凋亡情况,利用western blot检测GLI-2蛋白的表达情况;构建野生型和突变型GLI-2 3'UTR插入pMIR-REPORTTM luciferase vector载体,并将其与pRL-TK质粒共转染进入A549细胞,之后分别将等量的pre-miR-202和miR-NC再转染进入A549细胞,利用双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测萤火虫和海肾荧光素酶活性.结果 miR-202在A549细胞中的相对表达量显著低于在BEAS-2B细胞中的表达量(P＜0.01);miR-202 minic组在12、24、48和72 h的细胞抑制率显著高于对照组和miR-NC组(P＜0.01);miR-NC组在72 h时细胞抑制率显著高于对照组(P＜0.01).此外,miR-202minic组细胞凋亡率显著高于miR-NC和对照组(P＜0.01),并且miR-NC组的细胞凋亡率显著高于对照组(P＜0.01).荧光素酶报告基因结果说明GLI-2是miR-202的靶基因.miR-202minc转染A549细胞后可显著降低GLI-2蛋白的表达,而miR-NC组与对照组相比较,GLI-2蛋白表达无显著差异.结论 miR-202通过下游靶基因GLI-2调控肺癌A549细胞的增殖和凋亡,其可作为治疗肺癌的潜在靶点.
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miR-202对多发性骨髓瘤细胞中B细胞活化因子表达的调节作用及其机制
目的 研究miR-202对多发性骨髓瘤U266细胞中B细胞活化因子(BAFF)的调节作用及其机制.方法 通过生物信息学软件预测miR-202与BAFF的潜在结合位点,构建荧光素酶报告基因载体.将人类miR-202-3P模拟物(has-miR-202-3 P-mimics)、人类miR-202-3P抑制物(has-miR-202-inhibitor)、siBAFF及各自阴性对照转染U266细胞,采用实时荧光定量PCR和Western blot法验证miR-202对BAFF的调控作用,采用细胞增殖实验和流式细胞仪检测转染后U266细胞的增殖能力和凋亡情况.结果 未转染组、has-miR-202-3 P-mimics转染组、has-miR-202-3 P-inhibitor转染组和siBAFF转染组U266细胞中BAFF mRNA的相对表达量分别为1.040±0.057、0.573±0.073、1.205±0.097和0.368±0.052.与未转染组比较,has-miR-202-3 P-mimics转染组和siBAFF转染组U266细胞中BAFF mRNA的表达明显下调(P＜0.05).Western blot法检测BAFF蛋白的表达结果与mRNA基本一致.未转染组、has-miR-202-3 P-mimics转染组、has-miR-202-3 P-inhibitor转染组和siBAFF转染组U266细胞的A450nm值分别为1.063±0.052、0.714 ±0.045、0.936±0.066和0.764±0.053.与未转染组比较,has-miR-202-3 P-mimics转染组和siBAFF转染组U266细胞的A450nm值明显降低(P＜0.05).未转染组、has-miR-202-3 P-mimics转染组、has-miR-202-3 P-inhibitor转染组和siBAFF转染组U266细胞的凋亡率分别为26.2％、49.6％、21.1％和30.7％.与未转染组比较,has-miR-202-3P-mimics转染组U266细胞的凋亡率明显增加(P＜0.05).has-miR-202DP-mimics转染组U266细胞中p-JNK蛋白的表达水平降低.结论 miR-202通过调节BAFF的表达对U266细胞发挥抑制增殖和诱导凋亡的作用.JNK/SAPK信号通路参与了miR-202对BAFF的调控作用.
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肝癌患者血清中miR-202表达量与肿瘤标志物含量、癌基因表达量的相关性研究
目的:研究肝癌患者血清中miR-202表达量与肿瘤标志物含量、癌基因表达量的相关性.方法:选择在湖北文理学院附属襄阳市中心医院接受手术切除治疗的58例肝癌患者作为研究的肝癌组,同期体检的42例健康志愿者作为研究的对照组.采集外周血并检测miR-202的表达量及肿瘤标志物的含量;采集肝癌组织和癌旁组织并检测增殖基因、侵袭基因的m RN A表达量.结果:肝癌组患者血清中miR-202的表达量显著低于对照组;肝癌组患者血清中GP73、GPC3、AFP、AFP-L3的含量显著高于对照组且与血清中miR-202的表达量呈负相关;肝癌组织中LETM1、PI3K、AKT、FOXQ1、cyclinD1、c-myc、IFITM3、MMP9、Snail、N-cadherin、Vimentin 的 mRNA 表达量显著高于癌旁组织且与血清中miR-202的表达量呈负相关.结论:肝癌患者血清中miR-202的低表达与癌细胞的异常增殖和侵袭密切相关.
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微小RNA-202对A549细胞增殖和周期的作用及机制
目的:探讨miRNA-202对肺癌细胞A549的调控作用和可能机制.方法:应用DIANA TOOLs及KEGG数据库对miR-202进行生物信息学分析,探讨其可能参与的信号通路和潜在靶基因.通过慢病毒转染,分别上调和下调A549细胞中miR-202的表达,应用MTT去和流式细胞技术检测miR-202对细胞增殖、周期和凋亡的影响.应用qPCR和Western blot技术分别检测miR-202对其预测靶基因PIK3R3的mRNA和蛋白表达水平的调控作用.结果:生物信息学分析显示,miR-202参与的信号通路可能通过对PIK3CA的靶向调控发挥作用.功能研究表明,与阴性对照组相比,上调miR-202表达可抑制A549细胞增殖(P＜0.05),引起细胞周期G1/S期阻滞(P＜0.05),对细胞凋亡无明显影响(P＞0.05).靶基因研究结果显示,与阴性对照组相比,上调miR-202表达可引起PIK3CA蛋白表达量下降(P＜0.05),但其mRNA的表达无显著改变(P＞0.05).结论:miR-202可能通过对PIK3CA的负向调控影响A549细胞的增殖和周期,本研究为深入了解miRNA在肺癌中的作用与机制提供了新的线索.
