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AcSDKP对大鼠心成纤维细胞MMP-2、MMP-9活性和MMP-1表达的影响
目的 探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对10%血清和血小板源性生长因子(PDGF)诱导的大鼠心成纤维细胞MMP-2、MMP-9活性和MMP-1表达的调节作用. 方法 明胶酶谱法检测心成纤维细胞MMP-2、MMP-9的活性.Western blot法检测心成纤维细胞MMP-1的表达. 结果 10%血清和PDGF使心成纤维细胞MMP-2、MMP-9活性增强,也促进MMP-1的表达;AcSDKP能够进一步增加由10%血清和PDGF诱导的心成纤维细胞MMP-2、MMP-9的活性,并促进MMP-1的表达. 结论 AcSDKP上调了由PDGF介导的心成纤维细胞MMPs活性或表达,这可能与AcSDKP抗心肌纤维化的作用相关.
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AcSDKP对TGF-β1诱导的大鼠心脏成纤维细胞胶原蛋白合成及表达的调节作用
目的 探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠心脏成纤维细胞胶原合成的调节作用.方法 差速贴壁法获取大鼠心脏成纤维细胞;采用3H-脯氨酸掺入法检测心脏成纤维细胞胶原蛋白的合成.采用免疫细胞化学染色和Western blotting法检测心脏成纤维细胞Ⅰ型与Ⅲ型胶原蛋白的表达.结果 随着TGF-β1浓度的增加(1μg/L, 2.5μg/L,5μg/L,7.5μg/L),细胞脯氨酸含量(CPM值)逐渐增加(分别为147.6±10.2,229.2±16.4,427.0±40.6,454.8±26.1),分别是对照组(CPM值为91.6±9.8)的1.61倍、2.50倍、4.66倍、4.97倍,差异均有显著性(P<0.05).当加入不同浓度的AcSDKP(10-10mol/L,5×10-10mol/L, 10-9mol/L, 10-8mol/L)时,细胞脯氨酸含量逐渐下降(CPM值为378.8±6.4,292.8±14.4,130.6±17.6,230.6±19.4),分别是TGF-β1组(5μg/L)的88.7%,68.6%,30.6%,54.0%.差异均具有显著性(P<0.05).免疫细胞化学结果显示,TGF-β1组(5μg/L)细胞内Ⅰ型与Ⅲ型胶原蛋白平均吸度值分别是对照组的1.36倍和2.12倍,差异具有显著性(P<0.05); Western blotting法结果显示,TGF-β1组的Ⅰ型与Ⅲ型胶原蛋白表达条带吸光度值分别是对照组的1.09倍和1.29倍,差异具有显著性(P<0.05).当给予AcSDKP(10-9mol/L)进行干预时,免疫细胞化学结果显示,细胞内Ⅰ型与Ⅲ型胶原蛋白表达强度较TGF-β1组减弱,其平均吸光度值分别是TGF-β1组的61.3%和68.5%,差异具有显著性(P<0.05).Western blotting法结果显示,Ⅰ型与Ⅲ型胶原蛋白表达条带吸光度值分别是TGF-β1组的83%和54%,差异具有显著性(P<0.05).结论 AcSDKP对TGF-β1介导的心脏成纤维细胞胶原合成与Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达有明显抑制作用,这可能与其抗心脏纤维化的作用相关.
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N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对转化生长因子β1介导的心肌成纤维细胞增殖的抑制作用
目的:探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对转化生长因子β1(TGF-β1)介导的大鼠心肌成纤维细胞增殖的调节作用.方法:采用差速贴壁法获取新生大鼠心肌成纤维细胞;采用MTT法(以OD值反映细胞活性)和3H-TdR掺入法(以CPM值反映DNA合成)检测心肌成纤维细胞的增殖,采用免疫细胞化学染色法检测心肌成纤维细胞的增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.结果:TGF-β1在1～10 ng/ml浓度范围内刺激心肌成纤维细胞增殖较0.4%胎牛血清培养的心肌成纤维细胞有显著性差异(P＜0.05).当加入AcSDKP时,AcSDKP(在10-10～10-8mol/L浓度范围内)随着其浓度的增加,OD值(MTT法)、CPM值(3H-TdR掺入法)逐渐下降,其相应抑制率逐渐增高,差异均有显著性(P＜0.05).并在10-9 mol/L浓度时其抑制作用佳.结论:AcSDKP对TGF-β1介导的心肌成纤维细胞增殖有明显抑制作用,这可能与其抗心肌纤维化的作用相关.
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N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对转化生长因子β1介导的心脏成纤维细胞胶原代谢的调节作用
目的 探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对转化生长因子-β1(TGF-β1)介导的大鼠心脏成纤维细胞增殖与胶原代谢的调节作用.方法 采用差速贴壁法获取新生大鼠心脏成纤维细胞;3H-TdR掺入法检测心脏成纤维细胞的增殖,免疫细胞化学染色法检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.3H-脯氨酸掺入法检测心脏成纤维细胞胶原蛋白的合成,Western blot法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白与MMP-1、TIMP-1蛋白的表达.结果 AcSDKP抑制了TGF-β1对心脏成纤维细胞MMP-1蛋白表达的下调作用,使MMP-1蛋白表达增加,而对TGF-β1介导的TIMP-1蛋白表达无明显影响,使MMP-1/ TIMP-1比值增加.结论 AcSDKP抑制TGF-β1介导的心脏成纤维细胞的增殖、胶原合成,上调MMP-1蛋白表达,使MMP-1/TIMP-1比值增加,这可能与AcSDKP抗心脏纤维化的作用相关.
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N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对大鼠肝纤维化模型跨膜信号转导的影响
目的 观察N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对胆总管结扎(BDL)所致大鼠肝纤维化的作用,探讨该作用与TGF-β1-Smad2/3及BMP-7-Smad 1/5/8信号通路的关系.方法 选取30只SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、治疗组(AcSDKP),构建胆总管结扎肝纤维化模型,治疗组在造模的同时植入皮下微泵,给予AcSDKP治疗;第14天处死大鼠,采用ELISA酶联免疫法检测透明质酸(HA)和Ⅲ型胶原(PCⅢ)水平,采用羟脯氨酸(Hyp)测量法定量分析肝组织中总胶原蛋白的含量,采用Western印迹法检测肝组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)、骨形成发生蛋白-7(BMP-7)、磷酸化Smad2/3、磷酸化Smad1/5/8蛋白的表达.结果 与假手术组相比,模型组的血清HA、PCⅢ水平以及肝组织Hyp含量均明显升高(P＜0.05).治疗组的血清HA、PC Ⅲ水平以及肝组织Hyp含量均较模型组显著下降,差异有统计学意义(P＜0.01).模型组的肝组织内TGF-β1、磷酸化Smad2/3表达均高于假手术组,差异有统计学意义(P＜0.05).治疗组的TGF-β1、磷酸化Smad2/3表达低于模型组,BMP-7、磷酸化Smad1/5/8表达高于模型组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 AcSDKP具有抑制大鼠BDL肝纤维化的作用,该作用可能与抑制TGF-β1通路,并激活BMP-7通路有关.
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AcSDKP对大鼠矽肺c-jun氨基末端激酶通路活化的调节作用
目的 探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对c-jun氨基末端激酶(JNK)信号转导通路活化的调节在矽肺纤维化中的作用.方法 选用非暴露式气管灌注法制作大鼠矽肺模型.60只大鼠随机分为对照4周组、对照8周组、矽肺模型4周组、矽肺模型8周组、AcSDKP治疗组、AcSDKP预防组,每组10只.采用对二甲氨基苯甲醛显色法检测肺组织中羟脯氨酸含量,免疫印迹法检测肺组织内转化生长因子(TGF)-β1、磷酸化-JNK、JNK、c-jun蛋白的表达.培养新生大鼠肺成纤维细胞,第4代细胞用于实验,分为对照组、TGF-β1刺激组、SP600125干预组、AcSDKP干预组.免疫细胞化学法检测磷酸化-JNK和c-jun蛋白的分布,免疫印迹法检测Ⅰ型、Ⅲ型胶原表达.结果 AcSDKP治疗组大鼠肺组织中TGF-β1、磷酸化-JNK、c-jun蛋白表达和羟脯氨酸含量分别是矽肺模型4周组的70.60％、78.03％、79.85％和71.28％,分别是矽肺模型8周组的77.99％、66.73％、69.94％和64.82％；AcSDKP预防组大鼠肺组织中TGF-β1、磷酸化-JNK、c-jun蛋白表达和羟脯氨酸含量分别为矽肺模型8周组的84.56％、61.18％、64.73％和74.96％,差异均有统计学意义(P＜0.05).AcSDKP干预组大鼠肺成纤维细胞磷酸化-JNK和c-jun蛋白的表达分别是TGF-β1刺激组的54.59％和55.56％,AcSDKP干预组大鼠肺成纤维细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的表达分别是TGF-β1刺激组的79.9％和84.4％,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 AcSDKP可能通过阻制TGF-β1介导的JNK信号转导通路的活化,抑制间质胶原的沉积,进而发挥其抗矽肺纤维化的作用.
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Ac-SDKP对ROCK通路介导的肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化的调节作用
目的 研究N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)是否能够通过对转化生长因子-β1(TGF-β1)介导的ROCK通路的调节,抑制肺成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化.方法 胰酶消化法原代培养肺成纤维细胞,取4代肺成纤维细胞分为对照组、TGF-β1诱导分化组、Y-27632干预组和Ac-SDKP干预组.激光共聚焦扫描显微镜观察ROCK、SRF以及d-SMA在细胞内的定位与分布情况;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测ROCK、SFR、α-SMA、Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白在肺成纤维细胞的表达;实时定量荧光聚合酶链反应法(Real time PCR)检测ROCK、SFR、α-SMA mRNA的表达.结果 与对照组相比较,给予TGF-β1诱导刺激后,激光共聚焦扫描显微镜显示胞体内出现大量平行或交叉排列的α-SMA抗体标记的肌丝,诱导刺激6、12、24 h后,ROCK、SRF、α-SMA蛋白和mRNA以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达均增强,差异均有统计学意义(P＜0.05).与TGF-β1诱导分化组比较,给予Y-27632干预后,在相应时间点ROCK、SRF、d-SMA蛋白和mRNA以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达均明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).给予Ac-SDKP干预后,在相应时间点ROCK、SRF、α-SMA蛋白和mRNA以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达也较TGF-β1诱导分化组明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 Ac-SDKP能够通过对TGF-β1介导的ROCK信号转导通路的调控,阻抑大鼠成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化和抑制胶原蛋白的合成,可能是Ac-SDKP发挥其抗(矽)肺纤维化的作用机制之一.
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AcSDKP对矽肺大鼠TGF-β受体介导的P38MAPK信号转导途径调节与作用
目的 观察转化生长因子-β (TGF-β)Ⅰ型、Ⅱ型受体、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)和Ⅰ型、Ⅲ型胶原在矽肺大鼠和肺成纤维细胞的分布与表达,探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对TGF-β受体介导的P38MAPK信号转导通路调节与其抗矽肺纤维化作用的关系.方法 非暴露式支气管内灌注法制作大鼠矽肺模型,分为对照组,矽肺模型组和AcSDKP治疗组(每组10只).培养新生大鼠肺成纤维细胞,分为对照组、TGF-β1刺激组、受体阻断剂组、P38MAPK特异性抑制剂干预组和AcSDKP干预组.免疫组化法、免疫印迹法(Western-blot)检测TGF-βⅠ型和Ⅱ型受体、P38 MAPK蛋白以及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达.用实时定量荧光聚合酶链式反应(real-time PCR)法检测TGF-β Ⅰ型和Ⅱ型受体mRNA的表达.用激光扫描共聚焦显微镜法检测磷酸化P38在肺成纤维细胞内分布与核转位的情况.结果 在动物模型中,AcSDKP治疗组大鼠肺组织内TGF-β Ⅰ型受体、Ⅱ型受体和磷酸化P38 MAPK蛋白的表达分别是矽肺模型组的86.12％、41.01％和42.63％;AcSDKP治疗组Ⅰ型、Ⅲ型胶原的表达,分别是矽肺模型组的89.05％和52.71％,差异均有统计学意义(P＜0.05).在培养的肺成纤维细胞实验中,AcSDKP干预组TGF-β1诱导刺激的TGF-β Ⅰ型受体、Ⅱ型受体mRNA的表达分别是TGF-β1刺激组的42.26％和54.33％;TGF-β Ⅰ型受体、Ⅱ型受体和磷酸化P38 MAPK蛋白的表达分别是TGF-β1刺激组的58.14％、51.40％和45.6％;AcSDKP干预组磷酸化P38MAPK蛋白由胞质向胞核的转位,核浆比值减少,为TGF-[β1刺激组的68.60％;Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达降低,分别是TGF-β刺激组的58.04％和44.74％,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 AcSDKP能够抑制TGF-β受体介导的P38 MAPK信号转导途径,从而抑制胶原蛋白的表达,进而发挥其抗矽肺纤维化的作用.
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抗纤维化短肽对血清诱导的心脏成纤维细胞增殖和胶原合成与Ⅰ、Ⅲ型胶原表达抑制作用的实验研究
①目的 探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对不同浓度血清(FBS)诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖和胶原合成的调节作用.②方法 选用新生大鼠心脏成纤维细胞;采用3H-TdR掺入法检测心脏成纤维细胞的增殖;采用3H-脯氨酸掺入法检测心脏成纤维细胞胶原的合成,采用westernblot法检测心脏成纤维细胞Ⅰ型与Ⅲ型胶原的表达.③结果 在0.4%、2%和10%几种血清浓度的条件下,随着血清农度的增加,反映心脏成纤维细胞增殖3H-TdR掺入量和胶原合成的3H-脯氨酸掺入量增加.表明一定浓度的血清能诱导心脏成纤维细胞增殖和胶原合成.与0.4%血清的基础培养条件相比较,10%高浓度血清能刺激心脏成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达.在10-10～10-8mol/L浓度范围内.AcSDKP对10%诱导的心脏成纤维细胞增殖和胶原合成有抑制作用.并且在10-9mol/L时,AcSDKP对心脏成纤维细胞增殖、胶原合成抑制作用强.同时10-9mol/L的AcSDKP对心脏成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达也有明显的抑制作用.④结论 AcSDKP对血清介导的心脏成纤维细胞增殖、胶原合成以及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达有明显抑制作用.
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N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对血清诱导的心脏成纤维细胞MMP-2、MMP-9活性表达的调节作用
①目的 探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对不同浓度血清(FBS)诱导的大鼠心脏成纤维细胞MMP-2、MMP-9酶活性表达的调节作用.②方法 选用新生大鼠心脏成纤维细胞;采用明胶酶谱法检测心脏成纤维细胞MMP-2、MMP-9酶活性的表达.③结果 在0.4%、2%和10%几种血清浓度的条件下,随着血清浓度的增加,MMP-2、MMP-9酶活性表达增强.AcSDKP能够进一步增加由10%血清诱导的心脏成纤维细胞MMP-2、MMP-9酶活性的表达.④结论 AcSDKP上调了由血清介导的心成纤维细胞MMP-2,MMP-9酶活性表达,这可能与AcSDKP抗心脏纤维化的作用相关.
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老年心房颤动病人AcSDKP与心脏重构的关系及相关指标研究
目的 探讨老年心房颤动病人N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)、N端B型利钠肽前体(NT-proBNP)在血液中的变化及与心脏重构之间的相关性.方法 选取年龄大于60岁心房颤动病人69例,其中阵发性房颤病人(A组)23例,持续性房颤病人(B组)23例,永久性房颤病人(C组)23例.同时收集性别、年龄相匹配的23名正常体检人员为对照组(N组).运用超声仪计算左房内径(LAD)、左室质量指数(LVMI).采集住院病人第1天的外周血标本,同时采集对照组的外周血标本,测量血浆AcSDKP、NT-proBNP含量;测量丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)的含量.结果 4组间性别、年龄等一般资料比较差异均无统计学意义(P＞0.05).心房颤动组(A组、B组、C组)的AcSDKP浓度显著低于正常对照组(N组),B组、C组低于A组,C组低于B组.A组、B组、C组的NT-proBNP、LAD、LVMI高于N组,B组、C组高于A组,C组高于B组(P＜0.05).心房颤动病人AcSDKP与NT-proBNP、LVMI呈现负相关的关系.A组、B组、C组MDA高于N组,B组、C组高于A组,C组高于B组;但是T-SOD、GSH-PX低于N组,B组、C组低于A组,C组低于B组(P＜0.05).结论 心房颤动病人AcSDKP水平降低,可能与房颤的发生、发展密切相关,监测AcSDKP对于老年房颤病人具有潜在的临床价值.
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N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对肾间质纤维化大鼠MCP-1及NF-κB表达的影响
目的:观察N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对单侧输尿管梗阻(UUO)所致大鼠肾间质纤维化的的保护作用并初探其机制.方法:雄性Wistar大鼠18只,随机分为假手术组、UUO组、治疗组(AcSDKP+UUO),每组各6只.于造模第14天处死大鼠,取其梗阻侧肾脏组织行HE、Masson染色,光镜下观察肾组织病理改变,评价肾小管变性程度及肾间质纤维化指数,免疫组织化学检测各组肾脏组织MCP-1、ED-1及NF-κB蛋白表达,RT-PCR检测MCP-1 mRNA的表达,Western blot检测NF-κB的蛋白质表达.结果:与假手术组相比,UUO组大鼠肾脏肾小管变性及肾间质纤维化程度严重,AcSDKP治疗后可明显改善UUO组大鼠肾小管变性和间质纤维化(P<0.05);免疫组化染色显示:MCP-1、ED-1及NF-κB的蛋白表达UUO组和治疗组明显多于假手术组,但治疗组较UUO组明显减少(P<0.05);AcSDKP治疗组MCP-1 mRNA及NF-κB蛋白质的表达均显著弱于UUO组,二者相比差异有统计学意义(P<0.05).结论:AcSDKP通过抑制NF-κB激活并进一步减少下游炎症细胞因子的表达以达到治疗肾间质纤维化的作用.
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PDGF/ROCK通路在AcSDKP抑制大鼠矽肺纤维化形成中的作用
目的:探讨血小板源性生长因子/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(PDGF/ROCK)通路在肺纤维化发病机制中的作用以及N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)能否通过对PDGF/ROCK的调节而发挥抗矽肺纤维化作用.方法:采用非暴露式气管二氧化硅混悬液灌注法制备大鼠矽肺模型.60只SPF级健康成年Wistar大鼠随机分为模型对照4周组、模型对照8周组、矽肺模型4周组、矽肺模型8周组、AcSDKP治疗组和AcSDKP预防治疗组,每组10只.免疫组织化学染色法检测各组大鼠肺组织中phospho-PDGFR-β的表达与分布,Western blotting法检测各组大鼠肺组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、PDGFR-β、phospho-PDGR-β、ROCK、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白的表达.结果:与相应模型对照组比较,矽肺模型组大鼠肺组织中α-SMA、PDGFR-β、phospho-PDGFR-β、ROCK以及Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达水平均明显升高(P＜0.05);形态学检测可见较多的phospho-PDGFR-β阳性表达细胞分布在矽结节与间质纤维化区域.与矽肺模型4周组和模型8周组比较,AcSDKP治疗组和预防治疗组大鼠肺组织中α-SMA、PDGF-β、phospho-PDGFR-β、ROCK、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达水平均明显降低(P＜0.05);免疫组织化学染色,phospho-PDGFR-β蛋白表达明显减少.结论:PDGF介导的ROCK信号转导通路可能通过促进大鼠肌成纤维细胞转化而促进矽肺大鼠肺组织中的胶原合成,进而促进矽肺纤维化的形成.AcSDKP可能通过PDGF/ROCK通路抑制矽肺大鼠肺内肌成纤维细胞的分化,减少其胶原的合成与分泌,进而发挥抗矽肺纤维化的作用.
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N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对肺成纤维细胞P38分裂原活化蛋白酶蛋白核转位及其通路活化的调节
目的:观察P38分裂原活化蛋白酶和Ⅰ型、Ⅲ型胶原在肺成纤维细胞的分布与表达,探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对P38MAPK信号转导通路活化的调节与其抗矽肺纤维化作用的关系.方法:培养新生大鼠肺成纤维细胞,分为对照组、转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激组、通路抑制剂组和AcSDKP干预组.采用激光扫描共聚焦显微镜检测磷酸化P38在肺成纤维细胞的分布与核转位的情况;免疫印迹检测P38MAPK蛋白以及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达;MTT法检测细胞增殖情况.结果:与对照组比较,TGF-β1诱导刺激了肺成纤维细胞的磷酸化P38MAPK蛋白由胞质向胞核的转位,使胞核中磷酸化P38MAPK蛋白荧光强度增加,核浆比值升高,同时肺成纤维细胞增殖以及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达上调.而AcSDKP减少了由TGF-β1诱导刺激的磷酸化P38MAPK蛋白由胞质向胞核的转位,使磷酸化P38MAPK蛋白在胞核的表达减少,核浆比值下降.同时也使细胞增殖下降以及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达下调.这些结果与P38MAPK通路抑制剂具有相同的作用.结论:AcSDKP通过抑制P38MAPK蛋白的核转位阻抑了P38信号转导通路的活化,进而抑制了肺成纤维细胞增殖与胶原蛋白的表达,这可能与AcSDKP抗矽肺纤维化的作用密切相关.
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N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对P38分裂原活化蛋白酶通路调节在肺成纤维细胞胶原合成中的作用
目的:探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)是否通过阻断转化生长因子-β1（TGF-β1）介导的P38分裂原活化蛋白酶(MAPK)途径,进而抑制大鼠肺成纤维细胞增殖与Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达.方法:培养新生大鼠肺成纤维细胞,分为对照组、TGF-β1刺激组、TGF-β受体阻滞剂组、P38MAPK特异性抑制剂组、AcSDKP干预组.采用MTT法检测细胞增殖,免疫细胞化学法检测磷酸化P38蛋白的定位及表达,免疫印迹法检测TGF-β受体、磷酸化P38MAPK、P38MAPK、c-myc及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达.结果:与对照组比较,TGF-β1能够促进细胞增殖,而分别给予LY364947、SB203580和AcSDKP干预后,细胞增殖均受到抑制.与对照组比较,TGF-β1刺激组的TGF-β1受体、磷酸化P38MAPK、c-myc以及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达上调,当分别给予LY364947、SB203580和AcSDKP干预后,肺成纤维细胞TGF-β1受体、磷酸化P38 MAPK、c-myc以及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达均降低.而各组间比较P38MAPK蛋白表达无明显改变.结论:AcSDKP能够通过阻断TGF-β1介导的P38MAPK信号转导途径,进而抑制肺成纤维细胞增殖和Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达.
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N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对大鼠矽肺的结缔组织生长因子和ERK1/2表达的调节作用
CTGF、phospho-ERK1/2蛋白表达均增加;与相应矽肺模型组相比,给予AcSDKP后,大鼠肺组织内CTGF、phospho-ERK1/2蛋白表达均明显降低.而各组间比较ERK1/2蛋白表达无明显改变.结论:AcSDKP可能通过阻断ERK1/2途径抑制了CTGF的表达,从而发挥抗矽肺纤维化的作用.
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N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对转化生长因子β1和Smad7表达调节在大鼠硅肺纤维化形成过程中的作用
目的:探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对大鼠硅肺纤维化模型肺组织中胶原含量、转化生长因子β1(TGF-131)和Smad 7表达的影响.方法:选用非暴露式气管灌注法制作大鼠硅肺模型,并给予AcSDKP.采用H-E染色进行形态学观察,胶原Van Gison染色观察硅肺结节与间质纤维化的形成及改变,羟脯氨酸法检测肺内总胶原含量,免疫组织化学法、免疫印迹法检测肺组织内TGF-β1、Smad7蛋门的表达.结果:染尘大鼠肺内硅结节形成明显,硅肺模型制作成功.AcSDKP治疗组肺组织胶原含量低于硅肺模型组.与对照组相比,模型组大鼠肺组织内TGF-β1蛋白表达增加,Smad7蛋白表达降低;与模型组相比.给予AcSDKP后,人鼠肺组织内TGF-β1蛋白表达明显降低,Smad7蛋白表达增高.结论:AcSDKP可能通过增加大鼠肺组织中Smad7蛋白的表达米抑制TGF-β1信号转导,从而发挥抗硅肺纤维化的作用.
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N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对转化生长因子β1介导的心成纤维细胞MMP-1/TIMP-1表达的调节作用
目的:探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对转化生长因子β1(TGF-β1)介导的大鼠心成纤维细胞MMP-1/TIMP-1的调节作用.方法:差速贴壁法分离与获取新生大鼠心成纤维细胞.分别采用免疫细胞化学法和Western印迹法检测心成纤维细胞MMP-1、TIMP-1蛋白表达.结果:TGF-β1可使心成纤维细胞MMP-1蛋白表达水平下降,而促进TIMP-1蛋白表达,MMP-1/TIMP-1比值下降.AcSDKP可以抑制TGF-β1对心成纤维细胞MMP-1表达的下调作用,使MMP-1蛋白表达增加,而对TGF-β1介导的TIMP-1蛋白表达无明显影响,MMP-1/TIMP-1比值增加.结论: AcSDKP可以通过上调TGF-β1介导的心成纤维细胞MMP-1蛋白表达并增加MMP-1/TIMP-1比值,以加速细胞外基质降解,这可能与AcSDKP抗心纤维化的作用有关.
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N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对大鼠心脏成纤维细胞胶原蛋白合成及表达的调节作用
目的:探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对血小板衍生生长因子(PDGF)诱导的大鼠心脏成纤维细胞胶原合成的调节作用.方法:建立新生大鼠心脏成纤维细胞系;采用3H-脯氨酸掺入法检测心脏成纤维细胞胶原蛋白的合成.采用Western印迹法检测心脏成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达.结果:PDGF对心脏成纤维细胞胶原蛋白合成的促进作用与浓度相关,并以10 ng/ml时强.AcSDKP对PDGF介导的心脏成纤维细胞胶原合成有抑制作用,并且在10-9mol/L时作用强.结论:AcSDKP对PDGF介导的心脏成纤维细胞胶原合成有明显抑制作用,可能与其抗心脏纤维化的作用相关.
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N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸对血小板洐生生长因子介导的NIH3T3细胞增殖的抑制调节作用
目的:探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(AcSDKP)对血小板洐生生长因子(PDGF)介导的NIH3T3细胞增殖的抑制调节作用.方法:采用MTT法和免疫组化法检测NIH3T3细胞增殖和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达.结果:在10-10～10-8 mol/L浓度范围内,AcSDKP对PDGF介导的NIH3T3细胞增殖均有抑制作用,并在10-9 mol/L浓度时其抑制作用佳.PDGF对NIH3T3细胞PCNA的表达具有增强作用,而AcSDKP对PDGF介导的NIH3T3细胞PCNA的表达有显著抑制作用.结论:AcSDKP对PDGF介导的NIH3T3细胞增殖有明显抑制作用.
