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Ac-SDKP对ROCK通路介导的肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化的调节作用
目的 研究N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)是否能够通过对转化生长因子-β1(TGF-β1)介导的ROCK通路的调节,抑制肺成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化.方法 胰酶消化法原代培养肺成纤维细胞,取4代肺成纤维细胞分为对照组、TGF-β1诱导分化组、Y-27632干预组和Ac-SDKP干预组.激光共聚焦扫描显微镜观察ROCK、SRF以及d-SMA在细胞内的定位与分布情况;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测ROCK、SFR、α-SMA、Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白在肺成纤维细胞的表达;实时定量荧光聚合酶链反应法(Real time PCR)检测ROCK、SFR、α-SMA mRNA的表达.结果 与对照组相比较,给予TGF-β1诱导刺激后,激光共聚焦扫描显微镜显示胞体内出现大量平行或交叉排列的α-SMA抗体标记的肌丝,诱导刺激6、12、24 h后,ROCK、SRF、α-SMA蛋白和mRNA以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达均增强,差异均有统计学意义(P＜0.05).与TGF-β1诱导分化组比较,给予Y-27632干预后,在相应时间点ROCK、SRF、d-SMA蛋白和mRNA以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达均明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).给予Ac-SDKP干预后,在相应时间点ROCK、SRF、α-SMA蛋白和mRNA以及Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达也较TGF-β1诱导分化组明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 Ac-SDKP能够通过对TGF-β1介导的ROCK信号转导通路的调控,阻抑大鼠成纤维细胞向肌成纤维细胞的分化和抑制胶原蛋白的合成,可能是Ac-SDKP发挥其抗(矽)肺纤维化的作用机制之一.
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ROCK1及其相关信号分子参与张应变调控的血管平滑肌细胞增殖
目的 探讨Rho相关卷曲蛋白激酶1(Rho-associated coiled-coil containing protein kinase 1,ROCK1)及其相关信号分子在感受张应变机械刺激、调控血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖功能中的作用.方法 应用张应变加载系统对体外培养VSMCs施加牵张幅度10％、频率1.25 Hz生理性周向张应变;Brdu检测VSMCs增殖水平;Western blotting检测力学加载后VSMCs的ROCK1表达水平以及蛋白激酶C(protein kinase C,PKC) α/β Ⅱ、蛋白激酶D(protein kinase D,PKD)、胞外信号调节激酶(extracellular regulated protein kinase,ERK)磷酸化水平;采用RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)检测ROCK1对VSMC增殖和PKCα/βⅡ、PKD、ERK磷酸化的调控作用.结果 10％生理性张应变加载12、24 h显著抑制VSMCs的ROCK1表达,并显著抑制PKD和ERK的磷酸化;10％生理性张应变加载12h显著抑制PKCα/βⅡ的磷酸化,但加载24 h PKCα/βⅡ的磷酸化与静止对照组相比无显著差异.RNAi抑制VSMCs的ROCK1表达后,VSMCs增殖水平显著降低,同时PKCα/βⅡ和PKD磷酸化水平显著降低,但ERK磷酸化无明显变化.结论 10％生理性张应变可能通过抑制ROCK1表达调控PKC∥BⅡ和PKD的磷酸化水平,从而影响VSMCs增殖,维持血管稳定性.探讨张应变力学刺激调控血管细胞功能的细胞内信号转导网络,对心血管生理和疾病病理机制研究具有一定意义.
关键词： 血管平滑肌细胞 张应变 Rho相关卷曲蛋白激酶 蛋白激酶 -
虎杖苷对小鼠急性心肌梗死后心肌细胞损伤的保护作用
目的 探讨虎杖苷对小鼠急性心肌梗死后心肌细胞损伤的保护作用机制.方法 结扎小鼠心脏左前降支,建立急性心肌梗死(AMI)模型,分为缺血组和虎杖苷治疗组,另设正常组和假手术组.术后第8天分别检测在体心电图和心脏功能;术后第9天处死各组小鼠行血清肌钙蛋白-T(Troponin-T)检测;行TTC染色、Masson's Trichrome染色等病理组织学检测;Western blot检测小鼠左心室心肌细胞Rho相关卷曲蛋白激酶(ROCK)活性表达.结果 术后第8天在体心电图和超声心动图检测显示虎杖苷治疗组心律失常发生率和心功能较缺血组有明显改善;术后第9天Troponin-T检测表明虎杖苷治疗组血清肌钙蛋白-T水平明显低于缺血组;病理组织学检测显示虎杖苷治疗组心肌纤维化和凋亡程度较缺血组明显降低;Western blot检测提示虎杖苷治疗组ROCK活性较缺血组低.结论 虎杖苷可显著抑制心肌细胞缺血后纤维化和细胞凋亡的病理进程,并且对急性心肌梗死后的心脏功能有显著的改善,这种保护机制很可能与虎杖苷抑制急性心肌梗死时升高的ROCK活性相关.
关键词： 虎杖苷 急性心肌梗死 Rho相关卷曲蛋白激酶
