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新生小鼠胰岛增殖及口袋蛋白家族、E2F转录因子表达变化
目的 观察新生小鼠胰岛细胞、细胞周期和视网膜母细胞瘤蛋白(Rb)、视网膜母细胞瘤样蛋白1(p107)、视网膜母细胞瘤样蛋白2(p130)及E2F转录因子的变化特点,探讨其与胰岛细胞增殖的关系.方法 采用免疫组化法检测出生第1、3和8周小鼠胰岛β/α细胞量、单个细胞面积和细胞数量的变化.采用胶原酶消化法分离纯化小鼠胰岛,以流式细胞术检测细胞周期,实时定量PCR及蛋白印迹技术检测Rb、p107、p130和E2F转录因子mRNA和蛋白表达.结果 (1)小鼠3周和8周胰岛β/α细胞量显著高于1周(P＜0.05);单个β/α细胞面积在3周时无明显差异,8周时扩大1.7倍(P＜0.01);而β/α细胞数量在3周增加约3.5/3.7倍(P＜0.01),8周与3周无明显差异.(2)1周和3周时G0/G1期细胞比8周明显减少(81.3±1.2、82.8±3.3比92.6±1.3,F=6.5,P＜0.05),而G2/M期显著增多(13.4±1.4、12.2±1.8比5.5±0.5,F=6.3,P＜0.05),细胞增殖指数明显增加(P＜0.05).(3)8周时Rb mRNA表达明显低于1周和3周(P＜0.01);3周和8周时p107 mRNA显著低于1周(P＜0.05),而p130 mRNA显著高于1周(P＜0.05),E2F-1、E2F-2 mRNA均显著低于1周(均P＜0.01);8周时E2F-3 mRNA显著低于1周(P＜0.05);而E2F-4、E2F-5 mRNA在3周和8周时表达增加.(4)8周时Rb和p107蛋白表达均比1周明显降低,p130表达显著增高,3周和8周时E2F1表达显著降低(均P＜0.05).结论 新生小鼠胰岛细胞量扩增明显,以细胞数量增加为主,细胞增殖显著.Rb、p107、p130及其相关E2F转录因子的表达存在动态变化,可能参与细胞增殖的调控.
