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新生小鼠胰岛增殖及口袋蛋白家族、E2F转录因子表达变化
目的 观察新生小鼠胰岛细胞、细胞周期和视网膜母细胞瘤蛋白(Rb)、视网膜母细胞瘤样蛋白1(p107)、视网膜母细胞瘤样蛋白2(p130)及E2F转录因子的变化特点,探讨其与胰岛细胞增殖的关系.方法 采用免疫组化法检测出生第1、3和8周小鼠胰岛β/α细胞量、单个细胞面积和细胞数量的变化.采用胶原酶消化法分离纯化小鼠胰岛,以流式细胞术检测细胞周期,实时定量PCR及蛋白印迹技术检测Rb、p107、p130和E2F转录因子mRNA和蛋白表达.结果 (1)小鼠3周和8周胰岛β/α细胞量显著高于1周(P＜0.05);单个β/α细胞面积在3周时无明显差异,8周时扩大1.7倍(P＜0.01);而β/α细胞数量在3周增加约3.5/3.7倍(P＜0.01),8周与3周无明显差异.(2)1周和3周时G0/G1期细胞比8周明显减少(81.3±1.2、82.8±3.3比92.6±1.3,F=6.5,P＜0.05),而G2/M期显著增多(13.4±1.4、12.2±1.8比5.5±0.5,F=6.3,P＜0.05),细胞增殖指数明显增加(P＜0.05).(3)8周时Rb mRNA表达明显低于1周和3周(P＜0.01);3周和8周时p107 mRNA显著低于1周(P＜0.05),而p130 mRNA显著高于1周(P＜0.05),E2F-1、E2F-2 mRNA均显著低于1周(均P＜0.01);8周时E2F-3 mRNA显著低于1周(P＜0.05);而E2F-4、E2F-5 mRNA在3周和8周时表达增加.(4)8周时Rb和p107蛋白表达均比1周明显降低,p130表达显著增高,3周和8周时E2F1表达显著降低(均P＜0.05).结论 新生小鼠胰岛细胞量扩增明显,以细胞数量增加为主,细胞增殖显著.Rb、p107、p130及其相关E2F转录因子的表达存在动态变化,可能参与细胞增殖的调控.
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E2F转录因子家族的研究进展
肿瘤的发生发展常与细胞周期的调节失控以及RB抑癌基因的突变密切相关.E2F转录因子家族是参与细胞周期及细胞凋亡重要的调节因子.近年来,越来越多的研究表明,肿瘤的发生发展常伴有E2F转录因子家族的表达异常,其与肿瘤细胞的发生发展及细胞凋亡之间有着紧密的联系.现作者就E2F转录因子家族的研究进展作一综述.
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miR-363靶向调控E2F3表达影响HepG2细胞增殖和凋亡研究
目的 探讨微小RNA-363(miR-363)靶向调控E2F转录因子3(E2F3)的表达对HepG2细胞增殖和凋亡的影响.方法 体外培养HepG2细胞,采用Lipofectamine法将miR-363抑制剂或其阴性对照转染到HepG2细胞,继续培养48 h,收获细胞,采用四噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖率,使用流式细胞术法检测细胞凋亡率,采用实时荧光RT-PCR法检测HepG2细胞miR-363 mRNA水平,采用Western Blot法检测HepG2细胞E2F3、BAX和Caspase-3蛋白表达水平.结果 对照组HepG2细胞增殖率为(96.4±9.7)％,显著高于抑制剂处理组[(72.3±6.5)％,P<0.05],凋亡率为(8.2±1.4)％,显著低于抑制剂处理组[(9.7±0.8)％,P<0.05];对照组HepG2细胞miR-363 mRNA相对水平为(1.0±0.1),显著高于抑制剂处理组[(0.6±0.2),P<0.05],E2F3蛋白表达量为(1.0±0.1),显著高于抑制剂处理组[(0.6±0.1),P<0.05],而对照组HepG2细胞Bax和Caspase-3蛋白表达量分别为(0.4±0.0)和(0.5±0.1),均显著低于抑制剂处理组[(0.6±0.1)和(0.7±0.0),P均<0.05].结论 miR-363可靶向调控E2F3的表达,抑制HepG2细胞增殖,诱导其凋亡.本研究结果为肝癌靶向治疗提供了一定的理论依据.
