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替米沙坦在细胞周期依赖性蛋白激酶5介导的过氧化物酶体增殖物激活受体γ磷酸化调节脂联素表达中的作用
目的 研究替米沙坦在细胞周期依赖性蛋白激酶(CDK)5介导的过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ磷酸化水平上升、调节3T3-L1脂肪细胞脂联素表达的机制.方法 诱导至转化率达到80%的3T3-L1脂肪细胞以不同浓度肿瘤坏死因子(TNF)-α(10、50、100 ng/ml,分别为T10、T50、T100组)刺激1h,T100组以替米沙坦不同剂量(0.1、5、10 μmol/L,分别为Tel0.1、Tel5、Tel10组)干预24 h后利用Western blotting法检测CDK5、p35蛋白表达水平和PPARγ磷酸化水平;实时荧光定量聚合酶链反应检测CDK5、p35、PPARγ mRNA表达变化;酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测培养基上清脂联素释放变化.构建并包装携带p35基因的逆转录病毒感染3T3-L1细胞,以空载体病毒为对照,同时设置CDK5抑制剂组,检测CDK5、p35/p25、磷酸化PPARγ(pPPARγ)及脂联素表达.实验数据以xˉ± s表示,多组间比较采用单因素方差分析.结果 与未处理组相比,T10、T50、T100组CDK5 mRNA及蛋白相对表达量差异无统计学意义(均P>0.05);T50、T100组p35 mRNA(2.11±0.66、2.71±0.59比1.22±0.35;q=3.77、4.91)及蛋白(0.32±0.02、0.45±0.04比0.09±0.01;q=2.19、4.55)相对表达量显著上升(均P<0.05);各组PPARγ mRNA及蛋白相对表达量差异均无统计学意义(均P>0.05),T50、T100组pPPARγ/PPARγ显著上升(0.21±0.03、0.47±0.04比0.11±0.02;q=3.89、6.91),脂联素释放显著下降(1.56±0.34、1.07±0.12比2.36±0.55;q=6.32、6.99,均P<0.05);替米沙坦干预后,与T100组相比,各组CDK5、p35 mRNA及蛋白相对表达量差异均无统计学意义(均P>0.05);Tel5、Tel10组pPPARγ/PPARγ显著降低(0.11±0.03、0.05±0.01比0.38±0.02;q=4.91、5.22),脂联素释放显著上升(1.71±0.26、1.92±0.17比1.11±0.05;q=5.77、6.43,均P<0.05);过表达p35可检出p25表达,同时显著上调pPPARγ/PPARγ(0.87±0.12比0.07±0.02,q=9.13)并下调脂联素释放(1.39±0.12比2.21±0.33,q=5.67),抑制剂组pPPARγ/PPARγ下降(0.15±0.01比0.87±0.12, q=3.14),脂联素释放上升(1.95±0.24比1.39±0.12,q=4.99),差异均具有统计学意义(均P<0.05).结论 替米沙坦能够抑制CDK5过度激活导致的PPARγ磷酸化,调节3T3-L1脂肪细胞脂联素表达.
关键词： 过氧化物酶体增殖物激活受体 替米沙坦 周期素依赖蛋白激酶5 P35 3T3-L1
