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糖尿病孕妇胎盘胰岛素生长因子2和其交互印迹基因H19表达及印迹状态变化
目的 了解胰岛素生长因子2(IGF2)和H19基因在糖尿病与非糖尿病孕妇胎盘中表达水平以及印迹状态的变化.方法 选取2009年2月至9月在北京大学第一医院分娩的糖尿病孕妇33例为病例组,其中妊娠期糖尿病(GDM)患者23例,糖尿病合并妊娠患者10例,同期分娩的无妊娠合并症的非糖尿病孕妇31名为对照组.提取胎盘组织中的RNA和DNA,采用实时定量聚合酶链反应( real-time PCR)方法比较病例组和对照组中IGF2和H19基因表达量的变化,采用限制性片段长度多态性( RELP)方法比较2者印迹状态的变化.统计学方法采用非配对样本t检验.结果 (1) IGF2基因在病例组胎盘中表达量高于对照组,差异具有统计学意义(分别为2.4±1.2、1.9±0.8,t=-2.2,P＜0.05)；H19基因在病例组胎盘中表达量高于对照组,但差异无统计学意义(分别为7.2±3.6、6.1±2.7,t=-1.5,p ＞0.05)；(2)IGF2基因Apa1位点的杂合率为60.9％( 39/64),H19基因Rsa1位点的杂合率为34.4％ (22/64)；(3)IGF2基因Apa1位点和H19基因Rsa1位点在病例组和对照组杂合子胎盘中均无印迹丢失.结论 (1)IGF2基因在糖尿病孕妇胎盘中表达量增加；(2)IGF2基因和H19基因在糖尿病孕妇胎盘中无印迹丢失发生,是否发生其他位点或DMR区的甲基化变化仍有待于进一步研究.
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H19在骨肉瘤中的表达及其与预后的关系
目的：本实验旨在研究骨肉瘤组织中 H19基因的特异性表达模式，探讨其在骨肉瘤发生发展、浸润转移中的作用及其与预后的关系。方法收集并筛选出2009年至2010年就诊的骨肉瘤患者手术切除标本30例，采集临床指标包括患者性别、年龄、发病部位、大小、Enneking分期、组织病理学分型、有无肺转移及术后随访患者生存情况。应用PCR、RT-PCR及限制性内切酶( AluI )酶切等方法，检测30例骨肉瘤组织中H19基因的印迹状态，分析H19基因印迹丢失及其与骨肉瘤各临床病理因素参数之间的关系。结果(1) H19基因印迹丢失率在骨肉瘤组织中为41.67%，瘤近旁组织中为16.67%，瘤远旁组织中为8.33%。Kappa相关分析结果表明，上述不同组织中 H19基因印迹丢失的发生频率间存在显著相关性( P＜0.05)。(2)单因素方差分析结果表明，H19基因的印迹丢失与骨肉瘤患者 Ennecking 分期、肺转移灶的存在与否有关( P＜0.05)，而与患者的性别、年龄、部位、大小和病理分型无关( P＞0.05)。(3) Log-rank单因素生存分析表明， H19基因印迹丢失、肿瘤分期、病理学分类及转移灶的存在与否和骨肉瘤患者预后相关( P＜0.05)，而性别、年龄、发病部位与患者预后无关( P＞0.05)。H19基因印迹丢失骨肉瘤患者的生存率明显降低，其差异具有统计学意义( P＜0.05)。结论骨肉瘤组织中H19基因印迹状态的改变，对骨肉瘤的发生发展、浸润转移起重要作用并与患者的不良预后相关，可能成为预测患者预后情况的新靶点。
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印迹基因H19对人绒毛膜上皮癌细胞JEG-3侵袭能力的影响
目的 探讨印迹基因H19对滋养细胞侵袭能力的影响,以期从分子遗传学角度来阐明滋养细胞侵袭行为的调控机制.方法 含人全长H19 cDNA重组真核表达质粒pRc/CMV经测序鉴定正确后,转染滋养细胞株JEG-3,观察其H19 mRNA表达和细胞侵袭力的变化.结果 质粒转染JEG-3细胞的转染效率＞50%,转染目的 基因H19后mRNA表达较对照组显著升高;转染目的 基因后JEG-3细胞穿膜细胞数明显少于未转染组和空载体转染组.结论 H19基因过表达可抑制JEG-3的侵袭能力,为H19调控滋养细胞侵袭行为提供了直接的实验证据.
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米非司酮通过调控H19基因甲基化抑制子宫内膜癌细胞的迁移
目的探讨米非司酮对子宫内膜癌Ishikawa细胞迁移的影响及其作用机制。方法体外培养人子宫内膜癌Ishikawa细胞，以不同浓度的米非司酮处理Ishikawa细胞，采用细胞划痕实验观察米非司酮对Ishikawa细胞迁移的影响，采用逆转录聚合酶链反应和甲基化特异性聚合酶链反应检测Ishikawa细胞中H19 mRNA的表达及其甲基化变化，采用Western blot法检测Ishikawa细胞中H19的下游基因高迁移率族蛋白A2（ HMGA2）的表达情况以及相关的上皮?间质转化蛋白的表达。结果米非司酮处理48 h时，对照组、5 mg／L米非司酮处理组、10 mg／L米非司酮处理组Ishikawa细胞的划痕宽度分别为（4．18±0．07）mm、（4．68±0．07）mm和（4．99±0．07）mm；与对照组比较，各药物处理组差异均有统计学意义（均P＜0．05）。处理72 h时，对照组、5 mg／L米非司酮处理组、10 mg／L米非司酮处理组Ishikawa细胞的划痕宽度分别为（3．46±0．07）mm、（4．29±0．07）mm和（4．78±0．04）mm；与对照组比较，各药物处理组差异均有统计学意义（均 P＜0．05）。随着处理时间和浓度的增加，米非司酮对Ishikawa细胞中H19 mRNA表达的抑制作用增加，对 H19基因启动子甲基化的促进作用增强，对HMGA 2蛋白表达的抑制作用增强，从而使E?cadherin蛋白表达增加， Vimentin蛋白表达减少。结论米非司酮能通过上调H19基因甲基化下调H19 mRNA表达，进而下调HMGA2和Vimentin蛋白表达，上调E?cadherin表达，抑制子宫内膜癌细胞迁移。
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H19基因研究进展
H19基因编码一个2.3 kb的非编码RNA分子,其母系等位基因表达,父系印迹,在哺乳动物中呈现进化上的保守性,是早被鉴定的印迹基因之一.近年发现H19外显子还生成一个小分子非编码RNA--miR-675.H19在胚胎发育、肿瘤发生等过程中发挥重要作用.本文就其印迹调节、功能以及与microRNA的关系等予以综述.
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宫颈癌中H19基因的特异表达模式及印记缺失分析
目的 探讨H19等位基因在宫颈癌中特异性表达的模式,H19基因的基因组印记缺失与宫颈癌两者之间的关系.方法 结合PCR和限制性片段长度多态性分析(RFLP)技术以及DNA甲基化检测技术分析我院收集的宫颈癌标本H19等位基因进行杂合子筛选,并进一步研究基因组印记缺失与官颈癌两者之间的关系.结果 在36例宫颈癌中筛选出16例杂合子现象的标本,在这16例杂合子标本中,有7例发生了基因组印记缺失;H19基因发生基因组缺失现象与其启动子区域的高度去甲基化正相关.结论 H19基因的基因组印记缺失可能和宫预癌的发生有着高度的相关性.
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H19基因在辅助生殖技术领域中的研究进展
辅助生殖技术(ART)虽然已成为人们解决不孕不育的主要手段,但该项技术仍存在一定安全隐患,如经卵胞浆内单精子注射(ICSI)和体外受精-胚胎移植(IVF-ET)获得的胎儿有表观遗传学改变的可能,这些表观遗传学的改变是否对后代造成不利影响,有待进一步深入研究和探讨.H19基因为母源性基因,是早被鉴定的印迹基因之一.研究显示H19基因变异与胎儿表观遗传学性状改变相关.综述H19基因与ART的关系.
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自然流产绒毛组织中H19启动子区域DNA甲基化差异分析
目的：研究不明原因自然流产患者绒毛组织中H19启动子区域甲基化水平与正常早孕绒毛的差异，并分析其可能的发生机制。方法收集不明原因自然流产及正常早孕的绒毛组织各30例，对组织中H19基因启动区域甲基化水平进行检测及对照分析，并对两组绒毛组织中的三种甲基转移酶的表达水平进行对照分析。结果H19上游DMR中甲基化水平检测结果提示两组间绒毛组织中H19启动子区域甲基化水平存在差异，自然流产组中甲基化水平明显低于对照组，差异有显著性（P<0.01），自然流产组绒毛组织DNMT1mRNA及蛋白的表达量与正常早孕组无明显统计学差异（P>0.05），而自然流产组绒毛组织DNMT3a及DNMT3b的mRNA及蛋白的表达量明显低于正常早孕组，差异有显著性（P<0.01）。结论自然流产患者绒毛组织中H19DNA甲基化水平的明显下降，下调DNA甲基转移酶中DNMT3a与DNMT3b的表达可能是甲基化水平差异的重要机制之一。
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印记基因H19和IGF-Ⅱ mRNA在新生儿胎盘中的表达与出生体质量的关系
目的 研究新生儿胎盘中印记基因H19和胰岛素样生长因子Ⅱ基因(W,F-Ⅱ gene)mRNA的表达,探讨印记基因H19和IGF-Ⅱ与出生体质量的关系.方法 收集无妊娠期并发症及无胎盘脐带异常的足月儿新鲜胎盘共30例,其中正常出生体质量儿12例、巨大儿10例,足月小样儿8例,采用实时荧光定量PCR方法检测以上标本中H19和IGF-Ⅱ mRNA表达.结果 H19基因在胎盘中表达与出生体质量呈负相关(r=-0.403,P=0.027),IGF-Ⅱ基因在胎盘中表达与出生体质量呈正相关(r=0.444,P=0.014);巨大儿组胎盘中H19 mRNA表达(0.21±0.31)较足月小样儿组(1.51±2.04)明显减少(P=013);巨大儿组胎盘中IGF-Ⅱ mRNA表达(2.67±3.41)较足月小样儿组(0.39±0.33)明显增加(P=0.013).结论 印记基因H19与IGF-Ⅱ的表达在不同出生体质量儿胎盘中差别明显,两基因与出生体质量的影响机制相关,且两基因之间存在一定相互关系.
关键词： 印记基因 胎盘 出生体质量 H19基因 胰岛素样生长因子Ⅱ基因 -
5-氮脱氧胞苷及曲古抑菌素A影响供核细胞H19基因表达的时间依赖性及浓度依赖性
目的:探讨甲基转移酶抑制剂--5-氮脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-aza-dC)和组蛋白去乙酰基酶抑制剂--曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)影响供核细胞H19基因表达的时间依赖性和浓度依赖性.方法:用不同浓度5-aza-dC及TSA按不同作用时间处理供核细胞(鼠尾尖成纤维样细胞),利用实时定量PCR法检测处理后H19基因的表达.结果:不同浓度的5-aza-dC处理组之间H19的表达无明显差异,但延长作用时间可使H19表达增强;TSA使H19的表达下降,但无时间依赖性.结论:长时间低浓度的5-aza-dC能增强供核细胞中H19基因的表达,而TSA则使H19的表达减弱,为体细胞克隆中表观遗传修饰抑制剂的选择及后续基因印迹研究提供了依据.
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印记基因H19甲基化在辅助生殖领域中的研究进展
印记基因H19作为发现较早的母系印记之一,于胚胎发育早期高度表达,并主要集中于内胚层和中胚层,在调节胚胎的生长发育和子代行为方面发挥着重要作.越来越多的研究表明,印记基因H19的印记控制区中CpG岛甲基化状态的改变会导致男性精液质量和女性卵母细胞质量的下降,从而影响人类的生育力,而且印记基因H19本身便与胚胎的生长发育有关.文章对印记基因H19甲基化情况在辅助生殖技术中的研究进展进行综述.
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葡萄胎组织中印迹基因H19mRNA表达及意义
目的:探讨葡萄胎(HM)组织中印迹基因H19 mRNA表达情况,了解其与HM的关系.方法:实时荧光定量PCR检测36例完全性葡萄胎、25例部分性葡萄胎、21例早孕绒毛组织中H19 mRNA表达.结果:完全性葡萄胎和部分性葡萄胎组织中H19 mRNA表达水平[(0.16±0.14)和(0.19±0.18)]均明显低于早孕绒毛中H19 mR-NA表达水平(1.28±95)(P=0.017,P=0.021).结论:印迹基因H19与葡萄胎发生具有一定的相关性.
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直接测序与克隆测序检测不育男性H19基因甲基化印记的比较
目的 建立亚硫酸氢盐修饰后测序技术,比较直接测序与克隆测序在不育男性精子印记基因DNA甲基化状态检测中的差别.方法 对样本进行精液分析和精子形态学分析,密度梯度离心法制备精液.提取精液基因组DNA并行亚硫酸氢盐处理,行半巢式PCR,将纯化后PCR产物与pCR 2.1-TOPO 载体连接及转化,分别对PCR产物及阳性克隆菌液进行测序.结果 PCR产物直接测序,前半部分序列丢失约40bp,1号CpG位点甲基化状态信息丢失.每例标本只有-个测序结果,会出现CpG位点的部分甲基化状态.挑取15个克隆进行测序,序列无丢失,18个CpG位点甲基化状态信息均完整.15个克隆CpG位点甲基化状态有所不同,显示出此样本的平均甲基化状态.结论 克隆测序不会造成序列丢失,CpG位点甲基化状态信息完整,克隆测序能较好地反应样本的平均甲基化状态.
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H19基因rs3741219多态性与口腔鳞状细胞癌的相关性
目的 分析H19基因rs3741219位点单核苷酸多态性与中国汉族人群口腔鳞状细胞癌(OSCC)的相关性,并分析吸烟和饮酒与OSCC发病风险的关系.方法 收集2016年7月至2017年11月期间在十堰市太和医院住院的119例OSCC患者(病例组),以114例无癌症病史且年龄和性别均匹配者为对照组.运用直接法分别对吸烟率和饮酒率进行性别校正后比较两组间差异.采用PCR-RFLP方法对两组受检者的rs3741219位点进行基因型检测,运用χ2检验和单因素、多因素Logistic回归等分析其与OSCC发生的相关性.结果 病例组与对照组人群在年龄和性别构成方面均衡可比(P>0.05),但病例组患者的吸烟率(62.2％)和饮酒率(48.7％)较对照组的吸烟率(33.3％)和饮酒率(29.8％)显著增高,且通过性别进行率的标准化后的结果仍显示病例组高,差异均有统计学意义(P<0.01);关联研究结果显示,病例组患者的TT、TC和CC基因型频率为47.1％、45.4％和7.6％,对照组分别为41.2％、51.8％和7.0％,频率分布的组间比较差异均无统计学意义(P>0.05);多因素Logistic分析结果显示,病例组和对照组的TC和CC基因型的分布频率比较差异均无统计学意义(P>0.05),但分层分析结果显示,在年龄≥60岁和吸烟人群中,rs3741219位点TC基因型携带者较TT+CC基因型携带者会显著增加OSCC发病风险,差异有统计学意义(P<0.05).结论 (1)Rs3741219位点多态性改变可能与中国汉族人群OSCC的发病有关;(2)长期吸烟和饮酒可能会增加OSCC的发病风险.
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长链非编码RNA H19与恶性肿瘤预后及进展相关性的系统评价
目的:系统评价长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)H19与恶性肿瘤预后及进展相关性.方法:计算机检索知网,维普,万方,Cochrane Library,Embase,PubMed等数据库中从建库到2017年4月1日前关于lncRNA H19表达与恶性肿瘤患者总生存期及其他相关指标的文献.按照纳入与排除标准,2名研究者独立进行质量评价,对存在的意见和分歧通过讨论或由第3名研究者评价解决.采用STATA 12.0软件进行Meta分析.结果:终纳入23篇文献,其中预后16项研究,共3003例患者;癌症进展相关研究纳入13项,共779名患者.Meta分析结果显示lncRNA H19的高表达与肿瘤患者的生存情况有密切相关,与H19低表达患者的OS相比,在消化系统、呼吸系统及其他系统中分别HR=1.24(95%CI:0.99~1.55,P=0.094);HR=1.17(95%CI:0.97~1.42,P=0.067);HR=4.54(95%CI:1.80~11.42,P=0.001).此外H19的表达情况还可对癌症进展提供相应的参考.结论:LncRNA H19或可作为一种判断恶性肿瘤进展和预后的新型标志物.
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广东汉族人群H19基因上游差异甲基化区SNP
目的 调查广东汉族人群中H19基因上游差异甲基化区(differentially methylated region,DMR)的单核苷酸多态性(SNP)及单倍型.方法 应用PIA分型法,以限制性内切酶McrBC、HpaⅡ消化基因组DNA分别获得个体单亲源DNA模板链,经测序,分别获得个体H19基因上游DMR单亲源SNP等位基因、基因型及单倍型数据.结果 共检出13个SNP(rs10840167、rs2525883、rs12417375、rs4930101、rs2525882、rs2735970、rs2735971、rs11042170、rs2735972、rs10732516、rs2071094、rs2107425、rs4930098)及1个突变点(g7351c).所有位点经统计学分析均符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05).除rs12417375位点DP值为0.279,其余12个SNP DP值在0.446~0.614;g7351c突变点DP值为0.013,提示为南方汉族民族特异性位点.共检出8种单倍型(命名为单倍型1~8),其中有3种为新发现的单倍型,其DP、PIC、PE及H分别为0.891、0.714、0.524和0.758.结论 PIA分型法获得的H19基因上游DMR SNP位点及其单倍型遗传标记系统具有较高的鉴别能力,在法医学鉴定中具有较好的实用价值.
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中国朝鲜族H19基因上游差异甲基化区SNP分布
目的：调查中国朝鲜族群体中H19基因上游差异甲基化区（differentially methylated region，DMR） SNP及单倍型分布，为法医学应用及群体遗传学研究提供基础数据。方法收集中国朝鲜族101份无关个体血样和14份来自5个亲缘关系已知的两代家系血样，用PCR-循环测序、McrBC消化DNA后PCR方法检测H19基因上游DMR的SNP，并用亲源印记等位基因（parentally imprinted allele，PIA）分型法进行单倍型检测，再计算相关遗传学参数。结果在H19基因上游DMR 1174 bp的目的基因扩增产物中，共检出13个 SNP （rs10840167、rs2525883、rs12417375、rs4930101、rs2525882、rs2735970、rs2735971、rs11042170、rs2735972、rs10732516、rs2071094、rs2107425、rs4930098）和5种单倍型，有9个SNP 属于高鉴别能力的遗传标记，其单倍型具有较高的个人识别率，单倍型平均基因多样性（GD）为0.714。应用McrBC酶消化基因组DNA的PIA分型法确定了家系子代样本的母源单倍型。结论 H19基因上游DMR在中国朝鲜族群体中具有很高的遗传多态性，母源单倍型的确定进一步提高了印记基因的法医学鉴定效能。
