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免疫亲和层析法纯化新的骨肉瘤相关抗原
目的用自行制备的抗人骨肉瘤单克隆抗体mAb5D3纯化其相应的抗原5D3Ag.方法联合应用饱和硫酸铵沉淀法和蛋白A柱层析法,从小鼠腹水中纯化骨肉瘤单克隆抗体mAb5D3,将此单体共价交联到溴化氰活化的Sepharose-4B上,制备成免疫亲和层析柱;再将骨肉瘤细胞OS-9607的裂解液过此免疫亲和层析柱,纯化mAb5D3相应的抗原5D3Ag.结果从骨肉瘤细胞OS-9607的裂解液中纯化出一分子量为43KD的骨肉瘤相关分子5D3Ag,经SDS-PAGE分析5D3Ag达到了电泳纯.结论能够用免疫亲和层析的方法从骨肉瘤细胞裂解液中纯化出mAb5D3对应的抗原5D3Ag,其分子量与以往文献所报道的骨肉瘤相关抗原的分子量都不相同,是一种新的骨肉瘤相关抗原.
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骨肉瘤相关新分子5D3Ag的研究
目的:自建的抗人骨肉瘤单克隆抗体mAb5D3经鉴定有很好的骨肉瘤细胞特异性,并且已利用单抗纯化出相应的骨肉瘤相关抗原5D3Ag纯品,研究目的是测定5D3Ag氨基酸序列,鉴定5D3Ag是否为一新发现的骨肉瘤相关抗原.方法:用SDS-PAGE法分析5D3Ag纯度和分子量,并做免疫印迹分析,用半干式转移法将5D3Ag转移到氨基酸测序膜上,测定其氨基酸序列,在蛋白质序列中比较分析,初步推断此抗原的性质及是否为新发现的骨肉瘤相关抗原.结果:5D3Ag经SDS-PAGE分析达到了电泳纯,分子量为43 kD;Western Blot分析显示5D3Ag可以与mAb5D3结合;5D3Ag N端10个氨基酸序列为:门冬酰胺、谷氨酰胺、甘氨酸、丝氨酸、组氨酸、甘氨酸、丝氨酸、谷氨酸、丙氨酸、谷氨酰胺(NQGSHGSEAQ).结论:5D3Ag从其分子量来看与以往文献所报道的骨肉瘤相关抗原的分子量都不相同;氨基酸序列结果查询分析,与蛋白质库中已知的蛋白质同源性很低,由此推断5D3Ag可能是一种新的骨肉瘤相关抗原.
