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巴斯德毕赤酵母菌株分泌表达的重组骨保护素融合蛋白生物学活性的研究
目的 探讨巴斯德毕赤酵母菌株分泌表达的重组骨保护素融合蛋白(recombiant human osteoprogerin-human serum album,rhOPG-HSA)对破骨细胞的抑制效应.方法 利用巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)以及破骨细胞分化因子(receptor activator of nuclear factor-kβ ligand,RANKL)诱导骨髓单核细胞Raw264.7分化为破骨细胞,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色和甲苯胺蓝染色法鉴定rhOPG-HSA抑制破骨细胞及其骨吸收能力.结果 rhOPG-HSA组与阴性对照组相比,Raw264.7细胞诱导3d,4d,5d后,TRAP阳性染色的破骨细胞明显减少；Raw264.7细胞与骨薄片共培养诱导10d后,骨吸收陷窝明显减少.结论 rhOPG-HSA能够抑制破骨细胞的分化及骨吸收.
关键词： 重组骨保护素融合蛋白 破骨细胞 生物学活性 -
模拟微重力条件下重组骨保护素融合蛋白 (rhOPG-HSA)对破骨前体细胞Raw264.7抑制效应的研究
目的 探讨在模拟微重力(Simulated microgravity,SMG)条件下重组骨保护素融合蛋白(rhOPG-HAS)对破骨前体细胞Raw264.7的抑制效应.方法 在SMG条件下,分别培养破骨前体细胞Raw264.7与成骨细胞MC3T3-E1,利用ELISA法检测MC3T3-E1细胞培养液中骨保护素活性,用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)以及可溶性破骨细胞分化因子(sRANKL)诱导Raw264.7分化为破骨细胞,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法鉴定rhOPG-HAS抑制破骨细胞能力,利用半定量RTPCR测定破骨细胞中TRAP的表达.结果 SMG条件下,骨保护素活性在72 h后显著降低(P<0.01);Raw264.7细胞经M-CSF及sRANKL诱导3、4、5 d后,与阴性对照组相比,TRAP阳性染色的破骨细胞用rhOPG-HAS处理后明显减少(P<0.05),RT-PCR测定结果表明破骨细胞TRAP的表达降低(P<0.05).结论 SMG条件下,rhOPG-HAS能够抑制破骨前体细胞Raw264.7的分化.
关键词： 模拟微重力 重组骨保护素融合蛋白 破骨前体细胞 抑制效应
