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渗透压负荷对兔椎间盘器官培养模型的影响
目的:建立一种可用于体外研究椎间盘退变的椎间盘器官培养模型,探讨渗透压负荷对模型椎间盘细胞活力和代谢的影响.方法:4～6月龄新西兰大白兔10只,均分为两组,处死后立即手术切取胸腰段椎间盘,每只9个,分别在等渗(300mOsm/kg,等渗组)或高渗(410mOsm/kg,高渗组)培养基中进行整体器官培养,在培养前和培养后第7、14、21、28天,利用Mitotracker Green荧光探针、组织化学和生物化学方法评估两组椎间盘髓核细胞的活力、结构的完整性以及蛋白多糖含量的变化.结果:取材后培养前椎间盘髓核细胞的荧光强度为11503±402,在体外培养过程中,高渗组第14天荧光强度为9202±907,与培养前比较差异有显著性意义(P＜0.05),第7、21和28天分别为10504±710、10860±711、10713±953,与培养前相比较无显著性差异(P＞0.05);等渗组第7、14、21、28天分别为11350±351、11207±385、10914±300、10862±229,与培养前比较无显著性差异(P＞0.05);两组在第7、21和28天时无显著性意义(P＞0.05).在培养过程中,两组椎间盘髓核和纤维环的组织结构能够基本保持完整,髓核蛋白多糖含量在培养第7天高渗组和等渗组分别为3.33±0.28m/100mg和2.83±0.25m/100mg,均较培养前(5.03±0.37m/100mg)明显降低(P＜0.01),第14、21、28天时与第7天相比下降不明显(P＞0.05).两组相同时间点的差异无显著性意义(P＞0.05).结论:椎间盘器官培养模型可以在等渗或高渗环境中有效维持兔椎间盘结构的完整性和髓核细胞的活力至少4周.
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软骨终板通透性对体外培养大鼠髓核细胞生物学特性的影响
目的:观察软骨终板营养通路通透性对外培养大鼠髓核细胞生物学特性的影响.方法:4周龄雄性SD大鼠20只,处死后立即手术切取腰段椎间盘(包括邻近的软骨终板),每只6个,随机分为A、B、C 3组,其中A组为正常对照组,B组用骨蜡封闭上软骨终板,C组用骨蜡封闭上、下软骨终板,3组椎间盘在体外进行整体器官培养.于培养前和培养7d、14d时,分别用Mitotracker Green荧光探针和RT-PCR方法评估椎间盘髓核细胞的活力和髓核Ⅱ型胶原及蛋白多糖mRNA的表达;于培养前和培养14d时用免疫组化方法观察髓核蛋白多糖、Ⅱ型胶原和基质金属蛋白酶3(MMP-3)的表达.结果:取材后培养前髓核细胞的荧光强度高;在体外培养7d,3组髓核细胞的荧光强度较培养前变化均不明显,3组之间无显著性差异(P＞0.05);培养14d时A、B、C组荧光强度较培养前分别降低约19%、22%和30%,与培养前比较差异均有显著性(P＞0.05),其中C组与A、B两组比较有显著性差异(P＜0.05),A、B两组比较差异无显著性(P＞0.05).免疫组织化学观察显示在培养14d时3组髓核蛋白多糖和Ⅱ型胶原的染色强度与培养前比较均有所降低,MMP-3阳性染色增加,蛋白多糖、Ⅱ型胶原和MMP-3染色强度的变化以C组为明显.3组髓核细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖mRNA的表达在培养7d和14d时均较培养前显著降低(P＜0.05),其中7d时3组之间无显著性差异(P＞0.05),14d时A、B两组间无显著性差异(P＞0.05),C组与A、B组比较有显著性差异(P＜0.05).结论:降低体外培养大鼠椎间盘上下软骨终板的通透性,可在短期内影响髓核细胞的生物学特性,加速椎间盘的退变.
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他克莫司对阿糖胞苷引起的离体毛囊损伤的保护作用
近年发现免疫抑制剂环孢素和他克莫司(FK506)能抑制环磷酰胺对小鼠毛囊的损伤作用[1].我们用游离的毛囊器官培养模型研究了FK506对阿糖胞苷(Ara-c)引起的毛囊损伤的保护作用.
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碱性成纤维细胞生长因子对毛发生长作用的研究
毛囊是控制毛发周期性生长的皮肤附属器官,由上皮和真皮两部分组成.真表皮间的相互作用在毛囊的生长发育中起重要作用[1].碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是一种具有多向生物学活性的多肽,它对成纤维细胞等多种细胞具有刺激生长作用.我们的研究发现bFGF在毛囊器官培养模型中能显著刺激毛发生长,报道如下.
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成年猪半月板体外器官培养模型的建立
[目的]观察成年猪半月板在体外器官培养条件下的组织变化特点,为在体外器官培养下进行半月板研究提供实验依据.[方法]成年猪8头,取双膝内、外侧半月板,从每个半月板体部横行切取宽约8 mm标本1份,共32份标本,进行体外器官培养.分别于培养0、2、4、6周后随机取出8个标本行组织学检查,HE染色:观察半月板内侧1/3区域,计数每个视野的细胞数,比较各时间点间的差异；番红O染色:观察半月板内侧1/3区域,记录染色程度,半定量评分,比较各时间点间的差异.[结果]培养0、2、4、6周后,各时间点间每高倍视野的细胞数有显著性差异(P＜0.05),两两比较均有统计学差异(P＜0.05).培养0、2、4、6周后,各时间点间番红O染色半定量评分有统计学差异(P＜0.05),两两比较均有统计学差异(P＜0.05).[结论]在体外器官培养模型中进行半月板的短期研究是可行的,随培养时间延长,半月板软骨细胞密度及活性逐渐下降.
