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伴肌动蛋白相关锚定蛋白(N-RAP)在颈椎后纵韧带骨化中的表达及意义
目的:从蛋白质及核酸水平研究伴肌动蛋白相关锚定蛋白(N-RAP)在颈椎后纵韧带骨化中的表达,探讨其存在的临床意义.方法:选择2006～2010年间行手术治疗的20例颈椎后纵韧带骨化症患者(OPLL组)及10例因外伤行颈椎手术患者(对照组)的颈椎后纵韧带标本.所有标本福尔马林固定、石蜡包埋,以N-RAP兔抗人多克隆抗体作为Ⅰ抗免疫组化SP法制片,DAB显色.选择染色满意的标本切片,观察表达N-RAP的细胞(棕黄染色)在两组样本中的数量及分布特点.5例骨化样本及5例对照样本冰浴匀浆、提取总RNA,行实时定量PCR检测.观测后纵韧带骨化症患者及对照病例后纵韧带组织中N-RAP mRNA的表达情况.结果:20例骨化韧带标本中,16例染色满意；10例对照组后纵韧带标本中,6例染色满意.免疫组化结果显示N-RAP表达于韧带组织中细胞的胞浆中,呈棕黄色染色.在OPLL组的后纵韧带组织中,可见多个黄染细胞及少量蓝色无N-RAP表达的细胞.而在对照组后纵韧带中,仅可见蓝色无N-RAP表达的细胞.实时定量PCR检测发现N-RAP在对照组标本中平均表达量为14.29±4.70,在OPLL组标本中为161.29±60.14,两组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论:颈椎OPLL韧带组织中存在较高水平的N-RAP,其可能参与了韧带骨化的发生、发展过程.
关键词： 后纵韧带骨化症 伴肌动蛋白相关锚定蛋白 实时定量PCR -
伴肌动蛋白相关锚定蛋白特异性siRNA筛选及效能评价
目的 设计、合成人伴肌动蛋白相关锚定蛋白(Nebulin related anchoring protein,NRAP)的特异性siRNA,转染人成纤维细胞筛选佳干扰序列.方法 设计并合成4条针对NRAP的siRNA,以不同浓度转染人成纤维细胞.通过Western blot、RT-PCR法检测其对NRAP mRNA及蛋白表达的抑制效果.结果 siRNA 50mol/L及Lipofectamine2000 1μl有较高的转染效率.4种siRNA干扰成纤维细胞24小时后,NRAP的mRNA及蛋白表达量均有显著下降,其中siRNA47抑制效果为显著.结论 成功筛选出可有效抑制成纤维细胞NRAP表达的siRNA,为观察阻断NRAP表达后应力诱导OPLL细胞成骨的变化奠定了基础.
关键词： 后纵韧带骨化症 伴肌动蛋白相关锚定蛋白 小干扰核糖核酸
