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抑制TNFR/RIPK信号通路对大鼠急性脊髓损伤后神经功能的影响
目的:探讨应用坏死性凋亡抑制剂Necrostatin-1(Nec-1)抑制TNFR/RIPK介导的坏死性凋亡信号通路对大鼠急性脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)的作用.方法:72只雄性SPF级SD大鼠,体重0.25～0.30kg,随机分为4组:假手术组(Sham组,A组)、假手术+Necrostatin-1组(Sham+Nec-1组,B组)、SCI+二甲基亚砜(DMSO)(DMSO组,C组)、SCI+Nec-1组(Nec-1组,D组).C、D组采用钳夹法制作大鼠急性SCI模型.所有大鼠硬膜下置管,A组不给药,B组和D组造模后30min经导管注射1μl Nec-1(25μg/μl),C组注射等量DMSO,1次/d,至取材时间点.各组分别于造模后12h、24h和3d三个时间点每组取6只大鼠,先行Basso/Beattie/Bresnahan (BBB)评分,再处死动物取脊髓组织.12h时间点动物处死前1h腹腔注射碘化丙啶(propidine iodide,PI)1 mg/kg,取材检测脊髓组织PI红染细胞数;24h时取材采用苏木素-伊红(HE)染色观察脊髓损伤情况、尼氏(Nissl)染色观察神经元存活数目、Western Blot (WB)检测Bcl-2、坏死性凋亡蛋白RIPK1及RIPK3的表达水平;3d时取材行Tunel染色观察细胞凋亡情况.结果:造模后A组和B组各时间点的BBB评分均正常,C、D组各时间点均显著性低于A、B组,D组各时间点的BBB评分均显著高于同时间点C组(P＜0.05).造模后12h,D组PI红染细胞较C组明显减少,神经元崩解减轻(P＜0.05).造模后24h,A组和B组脊髓组织HE和Nissl染色正常,D组脊髓组织损伤程度和存活神经元数量均优于C组,差异有统计学意义(P＜0.05);A组和B组Bcl-2、RIPK1及RIPK3均低水平表达,C组RIPK1及RIPK3表达显著性升高,D组Bcl-2表达较C组上调,RIPK1及RIPK3表达显著性下降,C、D两组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).造模后3d,A组和B组可见少量凋亡小体,C组和D组明显增多,但D组凋亡小体数量较C组明显减少(P＜0.05).结论:抑制TNFR/RIPK信号通路可以减轻大鼠急性SCI后的病理变化,改善行为学评分,促进脊髓神经功能恢复.
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核受体GCNF对H9C2心肌细胞的影响及作用机制
目的:研究人孤儿核受体生殖细胞核因子(hGCNF)对H9C2心肌细胞的影响并初探其机制.方法:通过感染Ad-hGCNF腺病毒使H9C2中的GCNF基因表达上调,利用间接免疫荧光化学技术确定其亚细胞定位,通过MTT法研究GCNF表达对细胞活力的影响,DAPI染色检测细胞凋亡水平,实时定量PCR及Western blot技术检测受体结合蛋白激酶2(RIPK2)和受体结合蛋白激酶3(RIPK3)的表达水平.结果:Ad-hGCNF腺病毒感染后,H9C2心肌细胞GCNF表达上调,亚细胞定位位于细胞核,细胞活力降低,凋亡水平显著增加,RIPK2和RIPK3表达水平均升高.结论:感染Ad-hGCNF腺病毒表达载体降低H9C2细胞活力,增加其凋亡水平,机制与RIPK2和RIPK3的表达上调有关.
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坏死性凋亡调控机制及其在肿瘤病理机制中的作用
坏死性凋亡是非caspase依赖的程序性细胞死亡形式,由受体相互作用蛋白激酶1/3(receptorinteracting protein kinase 1/3,RIPK1/3)和混合连接激酶结构域样蛋白(mixed lineage kinase domain-like protein,MLKL)介导,具有与坏死相同的形态学特征.坏死性凋亡在肿瘤病理机制中具有双重作用,可以补偿性清除和杀灭凋亡耐受的肿瘤细胞,发挥抑制肿瘤效应;也可以通过激发肿瘤微环境炎症反应,促进肿瘤发生发展、侵袭转移.本文综述了坏死性凋亡的调控机制及其在肿瘤发生进展的生物学效应和病理学意义.
