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上调微RNA-3178表达对肝癌血管内皮细胞侵袭、迁移的影响
目的 通过合成及转染微RNA(miRNA)-3178模拟物(mimics),研究上调miR-3178表达对肝癌血管内皮细胞(HCC TECs)侵袭、迁移的影响.方法 实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)验证肝窦内皮细胞(HSECs)和HCC TECs中miR-3178的差异表达.实验分为三组:空白对照组(CON组)、miR-3178上调组(Mimics组,miRNA-3178 mimic转染HCC TECs)、阴性对照组(NC组,miR-3178 mimic阴性对照序列转染HCC TECs).RT-PCR验证转染前后HCC TECs中miR-3178表达.荧光显微镜观察转染效率.Transewell法检测HCC TECs侵袭及迁移.生物信息学软件预测miR-3178靶基因,蛋白印迹(Western blot)及RT-PCR验证靶基因.结果 RT-PCR结果显示HCCTECs中miR-3178表达明显低于HSECs(P＜0.05).转染后HCC TECs中miR-3178表达明显高于转染前(P＜0.05),细胞转染效率达到90％以上.细胞侵袭及迁移试验结果显示,Mimic组侵袭及迁移细胞数明显减少(P＜0.05).生物信息学软件预测EGR3可能是miR-3178的靶基因之一.Western blot及RT-PCR结果显示,上调miR-3178表达,可明显抑制HCC TECs中EGR3 mRNA及蛋白表达(P＜0.05).结论 HCC TECs中miR-3178明显低表达,上调miR-3178表达可通过抑制EGR3表达而抑制HCC TECs侵袭及迁移,靶向抑制HCC TECs中miR-3178表达可能为肝癌重要的治疗方法.
