首页 > 文献资料
-
携带小鼠CD40Ig基因重组腺病毒的构建及鉴定
目的构建携带小鼠CD40Ig基因的重组腺病毒载体,为研究供体特异性移植耐受诱导做准备.方法分别克隆小鼠CD40胞外区cDNA和IgG2a-Fc段cDNA,以PCR方法将二者连接为CD40Ig.再将后者装入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV,与骨架质粒在大肠杆菌BJ5183中同源重组,经293细胞包装、扩增后得到携带CD40Ig的重组腺病毒AdCD40Ig.结果成功构建携带CD40Ig的重组腺病毒载体系统,病毒滴度为5×109efu/ml.结论构建的AdCD40Ig可用于供体特异性移植耐受的实验研究.
-
腺病毒介导CD40Ig基因在大鼠肝脏移植中的作用
目的 探讨腺病毒介导CD40Ig基因(AdCD40Ig)在大鼠肝脏移植中的作用.方法 随机将供受体大鼠分4组,A:同基因移植组,B:免疫排斥组,C:AdLacZ对照组,D:基因治疗组.观察大鼠存活时间,CD40Ig、细胞因子水平和移植肝病理情况.结果 D组存活时间长于B、C组(P ＜0.05);CD40Ig浓度于术后7天达高峰;D、A组IL-2、IFN-γ水平较B、C组明显降低(P＜0.05),D组IL-10较其他组明显增加(P＜0.05);B、C两组术后出现中、重度排斥反应,汇管区淋巴细胞浸润明显,D组汇管区轻度炎症,无明显血管损伤证据,病理评级较B、C组有统计学意义(P＜0.05).结论 CD40Ig通过阻断CD40/CD40L通路,可延长移植肝存活时间,在受体内长期表达,减少汇管区淋巴细胞浸润,影响相关细胞因子的表达,对大鼠肝脏急性排斥反应有抑制作用.
-
腺病毒介导的CD40Ig基因治疗诱导异基因大鼠心脏移植物的长期存活
目的:通过腺病毒介导的CD40Ig基因治疗,阻断受体体内CD40/CD154共刺激途径,诱导异基因大鼠之间的心脏移植耐受,并探讨相关机制.在将异基因DA大鼠的心脏移植给受体LEW大鼠后,即经门静脉输注携带CD40Ig基因的腺病毒(AdCD40Ig, 5×109 pfu).观察、记录心脏移植物的存活时间.ELISA检测受体大鼠体内CD40Ig蛋白的表达.通过MLR,IL-2逆转实验及Th1/Th2型细胞因子表达的检测,研究耐受的机制.结果:与未处理对照组相比,携带绿色荧光蛋白基因的腺病毒(AdEGFP)给予组,移植物的存活时间未见明显延长;AdCD40Ig腺病毒给予组,异基因大鼠心脏移植物平均存活时间延长至(142.8±26.8)天.ELISA检测表明,CD40Ig蛋白在受体体内表达时间较长,但随时间的推移表达水平逐渐下降.Th1和Th2型细胞因子的检测结果显示,耐受大鼠体内未发现这两类细胞因子偏移的现象.MLR证明耐受大鼠对供体抗原表现为特异性低应答.IL-2逆转实验表明,该耐受形成的早期与克隆无能有关.结论:经AdCD40Ig腺病毒基因治疗的受体大鼠可以产生特异性的移植耐受,使异基因大鼠心脏移植物长期存活.
-
小鼠CD40Ig基因真核表达质粒的构建及鉴定
目的:构建含小鼠CD401g基因的真核表达载体,为诱导供体特异性移植物的免疫耐受的基因治疗作准备.方法:以小鼠脾脏总RNA为模板,以RT-PCR法克隆小鼠CD40胞外段cDNA及IgG2a Fc段cDNA,另以pEGFP-Nl质粒为模板获得绿色荧光蛋白(GFP)基因.将所得基因片段插入真核表达载体pDC516中得到重组质粒pDC516-CD40-IgG-GFP,测序鉴定正确后,用脂质体2000将其转染人胚肾上皮细胞(HEK293细胞),荧光显微镜下观察融合蛋白的表达.结果:成功构建了小鼠CD40Ig基因真核表达质粒pDC516-CD40-IgC-GFP,并在HEK293细胞中实现表达.结论:小鼠CD4019基因真核表达质粒pDC516-CD40-IgG-GFP构建成功,为诱导供体特异性移植物免疫耐受的研究奠定了基础.
-
CTLA4Ig与CD40Ig双基因局部共转染对异种大鼠移植肾Bcl-2/Bax的影响
目的:探讨CTLA4Ig与CD40Ig双基因局部转染对异种移植肾Bcl-2/Bax的影响,探讨其诱导免疫耐受的机制.方法:以PcDNA3.1(+) CTLA4Ig和PcDNA3.1(+)-CD40Ig为载体,通过脂质体lip02000将CT-LA4Ig与CD40Ig双基因转入豚鼠肾脏,以豚鼠为供者,SD大鼠为受者,行异种肾移植手术.将豚鼠到SD大鼠的异种肾移植模型分为pcDNA3.1空载体组(第1组)、CD40Ig基因局部转染组(第2组)、CTLA4Ig基因局部转染组(第3组)和CD40Ig、CTLA4Ig双基因局部转染组(第4组).Western blot检测移植肾HA-CTLA4Ig、HA-CD40Ig蛋白表达和移植肾Bcl-2、Bax的表达情况,观察移植肾病理改变.结果:术后第5天,第4组移植肾淋巴细胞浸润明显少于第2组和第3组,第4组移植肾Bcl-2蛋白表达明显升高(P＜0.05),而Bax蛋白表达则显著降低(P＜0.05).结论:CTLA4Ig与CD40Ig双基因局部转染供肾可降低Bax表达,上调Bcl-2表达,诱导移植肾免疫耐受.
