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不同诱导方法对人外周血树突状细胞体外成熟的影响
目的 探讨不同诱导方式对于体外培养的树突状细胞(dendritic cells,DC)免疫刺激活性的影响.方法 通过rhGM-CSF 和IL-4 体外诱导的人外周血单核细胞来源的DC,分别用肿瘤坏死因子α(TNF-α)、脂多糖(LPS)、细胞因子鸡尾酒法诱导成熟,再以流式细胞仪、FITC-Dxtran内吞检测、MLR、ELISA 法检测DC 的表面标志、内吞能力、刺激淋巴细胞增殖能力和IL-12 分泌的变化.结果 在不同方法促进DC 成熟中,细胞因子鸡尾酒法诱导下的DC 成熟状态佳,CD83 指数表达高达84.87%,IL-12 的分泌量[(656.18 ± 38.52 ng/L)]高于其他各组,且刺激淋巴细胞增殖能力强(P < 0.05).结论 细胞因子鸡尾酒法是体外诱导DC 成熟的佳方法.
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Toll样受体信号通路在调控树突状细胞成熟中的作用研究
目的 探讨TLR信号通路在调控树突状细胞(DC)熟过程中的作用.方法 用密度梯度离心法从人外周富集血中分离单个核细胞(PBMC),以GM-CSF和IL-4体外诱导成未成熟DC(imDC),用电穿孔法把A549的总RNA转染入imDC,分别用传统细胞因子鸡尾酒(IL-1β、IL-6、TNF-α、PGE2)和改良细胞因子鸡尾酒(IL-1β、IL-6、TNF-α、PGE2、poly Ⅰ∶C、CpG ODN)刺激DC的成熟.实验分为4组,对照组:GM-CSF、IL-4;传统组:传统细胞因子鸡尾酒;改良1组:IL-1β、IL-6、TNF-α、poly Ⅰ∶C、CpG ODN);改良2组:IL-1β、IL-6、TNF-α、PGE2、poly Ⅰ∶C、CpG ODN.用RT-PCR法检测RNA的转染效率,流式细胞术检测DC和DC致敏T细胞的表面标志,ELISA法检测IL-12的分泌水平,MTT法检测T细胞的增殖.结果 1)RT-PCR检测:电穿孔法能使A549的总RNA成功转入DC,并使DC表达组织多肽特异性抗原(TPS)、癌胚抗原(CEA)和细胞角蛋白19片段(Cyfra21-1)等肿瘤抗原.2)流式检测:CD83各组表达率分别为(15.17±1.61)％、(64.33±7.58)％、(60.26±4.18)％和(82.89±3.06)％,CD1a表达率分别为(25.74±6.06)％、(69.37±8.16)％、(61.66±5.82)％和(86.07±5.63)％(P＜0.05),各组CD8+T细胞比例分别为(36.43±3.15)％、(61.91±2.33)％、(54.81±2.55)％和(66.78±2.74)％(P＜0.05).3)各组IL-12的分泌水平分别为(55.86±14.07)、(1 243.49±57.57)、(744±49.51)和(2 385±128.98) pg/mL(P＜0.05).4)各组刺激指数分别为11.85±2.61、54.14±3.81、47.57±3.14和64.43±5.88,阳性对照组为135.29±5.06(P＜0.05).结论 TLR配体polyⅠ∶C和CpG ODN可以促进DC的分化成熟.
