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巯乙磺酸钠对铜绿假单胞菌生物被膜作用的实验研究
目的 研究巯乙磺酸钠(Mesna)对铜绿假单胞菌生物被膜(BF)形成的影响,以及对成熟铜绿假单胞菌BF的作用.方法 微量稀释法检测Mesna对铜绿假单胞菌PAO1的低抑菌浓度；建立铜绿假单胞菌BF体外模型,扫描电镜(SEM)观察Mesna对铜绿假单胞菌BF形成的作用；经Mesna作用成熟的铜绿假单胞菌BF后,平板计数法检测BF内活菌数,激光共聚焦显微镜(CLSM)观察Mesna对铜绿假单胞菌BF空间结构的影响并结合BF图像结构分析软件(ISA)定量分析BF结构参数.结果 Mesna对PAO1的MIC为10 mg/ml;铜绿假单胞菌BF形成过程中,Mesna能减少BF中基质样物质以及被膜的厚度；与生理盐水对照组(7.45±0.10)比较,Mesna能使成熟铜绿假单胞菌BF中的活菌数减少(P＜0.05),高浓度组(5.84±0.24)较低浓度组(4.06±0.12)更明显(P＜0.05)；CLSM图像显示,经Mesna作用后的BF厚度逐渐减少,密度逐渐稀疏；ISA软件定量分析显示,Mesna作用后,BF厚度、平均扩散距离(ADD)和结构熵(TE)均较生理盐水对照组减少(P＜0.05),区域孔率(AP)增加(P＜0.05),高浓度组较低浓度组更明显(P＜0.05).结论 Mesna能够抑制铜绿假单胞菌BF形成,破坏成熟铜绿假单胞菌BF形态结构.
关键词： 铜绿假单胞菌 生物膜 巯乙磺酸钠 激光扫描共聚焦显微镜 -
巯乙磺酸钠联合环丙沙星对铜绿假单胞菌生物膜的作用
目的:探讨巯乙磺酸钠(mesna)对成熟铜绿假单胞菌生物膜(BF)的影响及其联合环丙沙星(CIP)对铜绿假单胞菌BF的作用.方法:微量稀释法检测mesna和CIP对铜绿假单胞菌PAO1的低抑菌浓度(MIC)；建立铜绿假单胞菌BF体外模型后分为对照组、低浓度mesna组及高浓度mesna组,用激光共聚焦显微镜(CLSM)采集并结合BF图像结构分析软件(ISA)定量分析mesna对铜绿假单胞菌BF作用后的结构参数；铜绿假单胞菌BF再次分为mesna组、CIP组及CIP联合mesna组,用CLSM采集BF图像并结合Amira 5.2三维重建软件定性分析mesna单独及联合CIP对成熟铜绿假单胞菌BF的作用；以棋盘设计,将不同浓度的mesna(0、0.5、1.0、2.0、4.0g·L-1)和不同浓度的CIP(浓度依次为(0、1/2、1、2、4和8 MIC)两两组合,平板计数法检测mesna单独及与CIP联用后BF内活菌数.结果:mesna对PAO1的MIC为10 g·L-1,CIP对PAO1的MIC为0.125 mg·L-1；CLSM图像经ISA软件定量分析显示,与对照组比较,mesna能使BF厚度、平均扩散距离和结构熵均减少(P＜0.01),区域孔率增加(P＜0.01),高浓度组较低浓度组效应更明显(P＜0.01); CLSM图像经三维重建后可见,单用mesna(2 g·L-1),BF内细菌密集层叠,厚度较厚,可见大量活菌,未见明显死菌；单用CIP(2MIC),BF内仍可见大量活菌,死菌数少；mesna(2 g·L-1)联合CIP(2 MIC)组可见BF细菌稀疏、厚度薄,活菌数少,BF内可见大量死菌；单用2 g·L-1mesna能使BF中的活菌数减少(P＜0.05),单用2MICCIP可使BF中活菌数降低(P＜0.05),1 g·L-1 mesna与1 MIC的CIP联合应用可使BF上的活菌数明显减少(P＜0.05).结论:mesna能破坏铜绿假单胞菌BF形态结构,mesna与CIP存在协同作用,可增强其杀菌能力.
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沙利度胺联合MINE方案治疗难治性侵袭性非霍奇金淋巴瘤患者的护理
对25例难治性侵袭性非霍奇金淋巴瘤患者采用沙利度胺联合MINE方案(巯乙磺酸钠/异环磷酰胺、米托蒽醌、依托泊苷)治疗.结果 部分患者治疗中出现乏力、胃肠道反应等症状,经对症处理好转.治疗6个疗程获得完全缓解16例,部分缓解4例,稳定3例,无效2例.提出胃肠道反应、口腔黏膜炎、肝功能异常、感染、四肢末梢神经炎、乏力、血栓形成等为沙利度胺联合MINE方案化疗的常见不良反应,密切观察、及时采取防护措施可缓解上述症状,使化疗按计划完成.
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巯乙磺酸钠单独及联合环丙沙星抗大肠杆菌生物膜的作用
目的 研究巯乙磺酸钠(Mesna)对大肠杆菌生物膜(biofilm,BF)形成的影响,以及单独及联合环丙沙星(ciprofloxacin,CIP)对大肠杆菌BF的作用.方法 琼脂平板稀释法检测Mesna、CIP的低抑菌浓度,扫描电镜观察Mesna对大肠杆菌BF形成的作用,平板计数法检测Mesna单独及与CIP联用后BF内活菌数,用激光共聚焦显微镜(confocal laser scanning microscopy,CLSM)观察Mesna对已形成的大肠杆菌BF空间结构的影响并结合BF图像结构分析软件(image structure analyer,ISA)定量分析BF结构参数.结果 Mesna能减少BF中基质样物质以及被膜的厚度；单用Mesna (8 mg/ml)才能使BF中的活菌数减少(P＜0.05),单用CIP 1 MIC才可使BF中活菌数降低(P＜0.05),小剂量Mesna(1 mg/nl)与1/2 MIC的CIP联合应用就可使BF上的活菌数明显减少(P＜0.05)；CLSM图像显示经Mesna作用后的BF厚度逐渐减少,密度逐渐稀疏；ISA软件定量分析显示:5 mg/ml Mesna作用后,BF厚度、平均扩散距离(average diffusion distance,ADD)和结构熵(textual entropy,TE)均减少(P＜0.05),区域孔率(areal porosity,AP)增加(P＜0.05),2 mg/mlMesna干预后,效应不如高浓度明显.结论 Mesna能够抑制大肠杆菌BF形成,破坏成熟大肠杆菌BF形态结构；Mesra与环丙沙星存在协同作用,增强其杀菌能力.
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巯乙磺酸钠对家兔留置导尿管表面大肠杆菌生物膜的作用
目的 构建留置导尿管表面大肠杆菌生物膜(biofilm,BF)体内模型,研究巯乙磺酸钠对体内留置导尿管表面大肠杆菌BF的作用.方法 家兔行导尿术,经导尿管注入大肠杆菌4d,扫描电镜及平板计数法检测留置导尿管表面大肠杆菌BF动物模型构建；经导尿管灌注巯乙磺酸钠,扫描电镜观察巯乙磺酸钠对导尿管表面大肠杆菌BF的作用,平板计数法检测巯乙磺酸钠对导尿管表面细菌数的影响.结果 模型组可见大量细菌在导尿管上呈团状或膜状黏附生长,厚薄不均的黏液状物质连接成一大片,平均菌落计数模型组(4.76±0.29)较对照组(2.49 ±0.22)明显增多(t＝17.44,P＜0.01)；巯乙磺酸钠干预后,巯乙磺酸钠能减少留置导尿管表面大肠杆菌BF中基质样物质,仅见散在的细菌黏附于管壁上,有少数细菌的散在团状聚集；平均菌落计数与空白对照组(5.77±0.26)及生理盐水对照组(5.54±0.52)比较,巯乙磺酸钠组(2.85±0.36)能使BF中的细菌数明显减少(F＝ 136.44,P＜0.01).结论 留置导尿管表面大肠杆菌BF动物模型成功建立；巯乙磺酸钠对体内留置导尿管表面大肠杆菌BF有破坏作用.
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巯乙磺酸钠对大肠杆菌生物膜早期黏附及胞外聚合物的影响
目的 研究巯乙磺酸钠对大肠杆菌生物膜(biofilm,BF)早期黏附及胞外聚合物(extracellular polymeric substances,EPS)的影响.方法 采用了平板菌落计数法检测高浓度(2 mg/ml)、低浓度(0.5 mg/ml)巯乙磺酸钠在不同时间点对大肠杆菌黏附的影响；采用免疫荧光技术标记多糖和细菌,利用激光扫描共聚焦显微镜定性观察细菌黏附及胞外多糖变化；利用硫酸-苯酚法定量各组细菌胞外多糖的产量；利用考马斯亮蓝染料结合法(Bradford法)测定胞外蛋白含量.结果 巯乙磺酸钠干预2、4、6、8h后,与生理盐水对照组比较,各组黏附细菌数均有所减少(P＜0.05),高浓度组较低浓度组更明显(P＜0.05)；经巯乙磺酸钠干预8h,经FTTC-ConA和PI双染后,激光扫描共聚焦显微镜观察见菌落稀疏,散在分布,胞外多糖减少,稀薄,以高浓度为甚；胞外多糖定量实验中,高浓度组胞外多糖/细菌干质量( 13.57±0.59) μg/mg、低浓度组(27.77±0.77)μg/mg,分别与生理盐水对照组(35.73±0.44) μg/mg比较,均降低了胞外多糖的产生(P＜0.05),高浓度组较低浓度组更明显(P＜0.05)；胞外蛋白定量实验中,高浓度组胞外蛋白/细菌干质量(7.76±0.32)μg/mg、低浓度组(17.59±0.86) μg/mg分别与生理盐水对照组(23.31±1.36) μg/mg比较,均降低了胞外蛋白的产生(P＜0.05),高浓度组较低浓度组更明显(P＜0.05).结论 巯乙磺酸钠可显著减少大肠杆菌黏附及产EPS的能力.
