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质粒介导细菌对喹诺酮类抗菌药物的耐药机制
喹诺酮类抗菌药物是临床为常用的抗菌药物之一,但其耐药的问题也日益严重[1].细菌对喹诺酮类抗菌药物的耐药机制有[2]:(1)染色体介导的耐药,包括药物作用靶位的改变(特别是喹诺酮耐药决定区(QRDR)的基因突变]、外膜通透性的下降、主动外排作用.
关键词： 质粒介导 耐药 喹诺酮类药物 qnr aac-(6')-Ⅰb-cr qepA -
阴沟肠杆菌的耐药性及对喹诺酮类耐药基因的检测
目的 研究临床分离的阴沟肠杆菌的耐药性和其对喹诺酮类抗生素耐药的分子机制.方法 采用VITEK 2型全自动微生物检测系统鉴定临床分离的细菌,用K-B法测定阴沟肠杆菌对25种抗生素的敏感性,用聚合酶链反应检测耐环丙沙星的阴沟肠杆菌质粒介导的喹诺酮类耐药基因,包括qnrS、qnrA、qnrB、qepA和aac(6')-Ib,并对阳性的aac(6')-Ib结果进行测序分析.结果 71株阴沟肠杆菌对环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率分别为46.5%和40.8%,对第一、二、三代头孢菌素类药物的耐药率在50%以上,对青霉素类药物的耐药率在70%以上,对含β-内酰胺酶抑制剂复合物的耐药率在50%以上,对氨基糖苷类药物(庆大霉素、妥布霉素)的耐药率在46.5%以上,对碳青霉烯类药物的敏感性好,对亚胺培南、美罗培南的耐药率为0.37株耐环丙沙星的阴沟肠杆菌中1株检出qnrA基因(2.7%),4株检出qnrS基因(10.8%),qnrB基因全阴性,qnr基因的总阳性率为13.5%.2株检出qepA基因(5.4%).25株检出aac(6′)-Ib基因(67.6%),经测序证实其中5株为aac(6′)-Ib-cr(13.5%).1株菌同时携带qnrS和aac(6′)-Ib-cr基因.质粒介导的喹诺酮类耐药基因的总携带率为29.7%.结论 临床分离的耐喹诺酮类药物的阴沟肠杆菌携带qnrA、qnrS、qepA和aac(6′)-Ib-cr基因,未检出qnrB.qnr、qepA和aac(6′)-Ib-cr基因引起质粒介导的阴沟肠杆菌对喹诺酮类抗生素的耐药.
关键词： 阴沟肠杆菌 喹诺酮类抗生素 qnr qepA aac(6)-Ib-cr -
质粒介导的喹诺酮类耐药机制研究进展
质粒介导的喹诺酮类抗菌药物的耐药是近十几年来新发现的一类细菌耐药机制,可在肠杆菌科细菌中水平传播,引起的感染不易控制,导致院内感染大范围流行.本文对质粒介导喹诺酮耐药基因的发现及种类、遗传背景、对喹诺酮类的作用机制及其临床意义等方面进行综述,为研究新型喹诺酮类抗菌药物及抗感染治疗中合理使用氟喹诺酮类抗菌药物提供依据.
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多重耐药大肠埃希菌喹诺酮类外排基因qepA的研究
目的 对临床分离的多重耐药大肠埃希菌(E.coli)喹诺酮外排泵基因qepA的携带率、接合传递、基因功能等进行研究.方法 临床分离的多重耐药E.coli 136株,经PCR筛选qepA基因,阳性菌株作16S rRNA甲基化酶基因rmtB的检测,PCR产物均经测序确认；阳性菌株进行质粒接合实验；扩增qepA基因全长,与pET-12a质粒连接,构建重组质粒,以研究qepA功能.结果 136株多重耐药E.coli qepA基因的检出率为14.0％(19/136),其中16株携带rmtB基因,二者的共存率高达84.2％(16/19).接合实验的耐药质粒传递率为63.2％(12/19),9株接合子中检出rmtB基因,占75.0％(9/12).与E.coli BL21(pET-12a)相比,诺氟沙星、环丙沙星和左氧氟沙星对E.coli BL21 (pET-12a-qepA)的MIC分别升高64倍、32倍和4倍；而与羰基氰氯苯腙(CCCP)联合应用时三种药物的MIC值则至少降低为原值的1/4.进一步检测菌体内环丙沙星含量,在不含CCCP时,E.coll BL21 (pET-12a-qepA)菌体中环丙沙星低于E.coli BL21 (pET-12a)或E.coli BL21(P＜0.01)；加入CCCP后,菌体内环丙沙星含量明显升高(P＜0.01).结论 本组多重耐药E.coli的qepA基因检出率较高(14.0％).qepA基因和rmtB基因具有较密切的相关性和共存率,且容易在菌际间传播.QepA为质子依赖的外排蛋白,可降低某些喹诺酮类药物在细菌体内的含量,使得对药物的敏感性下降.
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肺炎克雷伯菌质粒介导的喹诺酮类抗生素耐药机制的研究
目的 研究质粒介导的喹诺酮类耐药机制(PMQR)在肺炎克雷伯菌临床分离株上的分布情况,并对阳性菌株上染色体介导的喹诺酮类耐药机制进行分析.方法 细菌的鉴定和药敏采用Vitek-2 compact系统;采用PCR法检测质粒介导的喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB、qnrS、aac-(6')-Ib-cr和qepA的分布情况.对包含PMQR的细菌,采用E-试验测定环丙沙星的MIC大小,同时扩增测序分析染色体基因gyrA、gyrB、parC、parE的突变情况.结果 临床分离的67株肺炎克雷伯菌中,qnrS、qnrB、aac-(6')-Ib-cr、qepA的检出率分别为14.93%、2.99%、2.99%和16.42%.8株细菌同时包含qnr和qepA基因,其中2株qnr、qepA和aac-(6')-Ib-cr同时阳性.PMQR阳性菌株对环丙沙星的MIC值不定(0.032～≥64μg/mL),其中8株(占61.54%)对环丙沙星高水平耐药(≥64μg/mL).比对结果显示,环丙沙星MIC≤0.5μg/mL的3株细菌几乎未见染色体的氨基酸序列改变;而环丙沙星MIC≥8μg/mL的菌株全部存在gyrA和parC编码氨基酸序列改变,且突变主要集中在gyrA 83位、87位和parC 80位上.所有PMQR阳性的肺炎克雷伯菌的gyrB和parE均未发现任何氨基酸序列突变.结论 临床分离的肺炎克雷伯菌上检测到qnr、aac-(6')-Ib-cr、qepA的分布与共存.PMQR阳性菌株对环丙沙星的MIC值不定,但染色体机制仍是肺炎克雷伯菌对喹诺酮类抗生素耐药的主要机制,突变主要见于gyrA的83位、87位及parC的80位上.
