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白细胞介素12和共刺激分子B7-1联合修饰肿瘤细胞疫苗诱导抗肿瘤免疫治疗的实验研究
目的探讨经白细胞介素12(IL-12)和共刺激分子(costimulatory molecule)B7-1基因联合修饰的肿瘤细胞疫苗诱导机体抗肿瘤免疫反应,对大鼠卵巢上皮癌腹腔转移瘤的治疗效果.方法采用酶切、去磷酸化、连接、重组的方法,构建携带B7-1基因的逆转录病毒表达载体pLmB7-1SN ,以脂质体介导法,建立高表达细胞株NuTu-19/B7-1、NuTu-19/IL-12及双基因联合表达细胞株NuTu-19/IL-12-B7-1,并以转染空载体pLXSN的细胞NuTu-19/Neo为对照组.观察各组细胞在大鼠体内的致瘤性;将经丝裂霉素C处理的各组肿瘤细胞,以皮下接种方式免疫动物,观察其对卵巢癌腹腔转移大鼠模型生存期的影响,及对大鼠脾淋巴细胞增殖及诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性的作用.结果本研究构建pLmB7-1SN成功.建立的NuTu-19/B7-1、NuTu-19/IL-12和NuTu-19/IL-12-B7-1细胞株中mB7-1和mIL-12稳定表达.与对照组细胞相比,各组肿瘤细胞在动物体内的致瘤性有不同程度下降.B7-1组[NuTu-19/BT-1(B7-1单独免疫)]和IL-12组[NuTu-19/IL-12(IL-12单独免疫)]大鼠的脾淋巴细胞增殖指数(PI)分别为2.4和4.6,后者与对照组(PI=1.05)相比,差异有显著性(P<0.05),而联合组[NuTu-19/IL-12-B7-1(IL-12+B7-1联合免疫)]PI为10.2,与对照组和B7-1组、IL-12组相比,差异有极显著性(P<0.01).诱导CTL杀伤活性的作用,B7-1组(15.0%)和IL-12组(31.5%)明显强于对照组(2.6%)(P<0.05,P<0.01);而联合组(52.4%)与对照组、B7-1组及IL-12组相比,差异均有显著性(P<0.05).B7-1组或IL-12组荷瘤动物生存期均有所延长(分别为56.2 d和59.8 d),但与对照组(53.4 d)相比,差异无显著性(P>0.05),而联合组(66.0 d)与对照组相比,差异有显著性(P<0.05). 结论 IL-12和B7-1联合制备的肿瘤细胞疫苗,通过刺激CTL增殖、成熟和增强CTL对肿瘤细胞的识别及杀伤活性,诱导机体抗肿瘤免疫反应, 对提高卵巢癌的治疗效果具有重要意义.
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鼠神经生长因子联合激素治疗对格林巴利综合征患者血清IL 12、IL 18的影响
目的：探讨鼠神经生长因子联合激素治疗对格林巴利综合征患者血清白细胞介素(IL)12、IL 18的影响。方法采用双盲法将我院2013年10月—2014年10月收治的格林巴利综合征患者80例随机分为观察组和对照组,各40例。观察组采用鼠神经生长因子联合激素进行治疗,对照组单纯采用甲泼尼松龙进行治疗。观察对比两组患者治疗前后血清中 IL 12、IL 18的蛋白表达情况和淋巴白皮细胞 IL 12、IL 18受体的 mRNA表达情况,分析两种治疗方法对二者的影响。结果两组患者治疗后 IL 12和 IL 18蛋白表达均有所降低(P<0.05),观察组降低水平明显比对照组低(P<0.05)。而且二者蛋白表达和受体 mRNA的蛋白表达都具有正相关性。观察组治疗总有效率为95.0%,明显高于对照组的80.0%(χ2=3.645,P<0.05),观察组患者不良反应发生率为2.5%,对照组为5.0%,两组比较差异无统计学意义(χ2=0.985,P>0.05)。结论鼠神经生长因子联合激素治疗格林巴利综合征患者可以有效抑制 IL 12和 IL 18的蛋白表达,从而抑制促炎症因子,疗效显著。
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倍他乐克对老年慢性心力衰竭及血清 IL-12与BNP 水平的影响
目的：探讨倍他乐克辅助治疗老年慢性心力衰竭（CHF）的疗效，及其对血清白细胞介素12（IL-12）与脑尿钠肽（BNP）水平的影响。方法选择86例老年 CHF 患者为研究对象，随机将其分为观察组和对照组，每组43例。对照组患者采用常规药物进行，观察组在此基础之上联合应用倍他乐克治疗12周，观察临床疗效和血清 IL-12与 BNP 的变化。结果观察组总有效率为93．02％，显著高于对照组（P ＜0．01）；2组患者治疗后血压、心率、LVEF 较治疗前均有显著改善（P ＜0．01），组间比较有显著差异（P ＜0．01）；2组患者治疗后血清 BNP 和 IL-12水平均显著低于治疗前（P ＜0．01）；组间比较有显著差异（P ＜0．01）。结论基础治疗联合应用倍他乐克治疗老年CHF的临床疗效优于单用基础治疗，可以更有效地调节血清中IL-12和 BNP 的表达，改善机体内环境。
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辅助性T细胞1、2及白细胞介素4、12在椎间盘突出症患者髓核组织中的表达
目的：探讨辅助性 T 细胞1（Th1），辅助性 T 细胞2（Th2）及细胞因子白细胞介素12（IL-12）和白细胞介素4（IL-4）在椎间盘突出症患者髓核组织中的表达水平和临床意义。方法选取接受手术治疗的腰椎间盘突出症患者30例作为观察组，同时选取腰椎骨折需摘除椎间盘的患者10例作为对照组，运用流式细胞术检测 Th 细胞亚群中 Th1和 Th2的分布情况；酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定髓核组织中 Th1型细胞因子干扰素γ（IFN-γ）和 IL-12的表达水平及 Th2型细胞因子 IL-4的表达水平；运用 RT-PCR 检测 Th1细胞转录因子 STAT4以及 Th2的转录因子 STAT6的表达水平。结果与对照组比较，Th1、Th2细胞在观察组髓核中，细胞数量明显增加[（6．24±2．89）比（25．12±3．20），t ＝16．26，P ＜0．05；（2．68±0．58）比（8．16±1.20），t ＝3．84，P ＜0．05]；Th1型细胞因子 IL-12和 IFN-γ在观察组体内表达水平高于对照组[（23．47±5.61）比（7．65±3．21），t ＝8．422，P ＜0．05；（1．52±0．87）比（5．34±1．39）pg／mL，t ＝8．135，P ＜0．05]；而在对照组织中未检测到 Th2型细胞因子 IL-4的表达；而在观察组中，IL-4在某些髓核组织中有一定的表达。且IL-12、IFN-γ和 IL-4在椎间盘突出症患者体内的表达呈负相关（r ＝－0．57，P ＜0．05；r ＝－0．23，P ＜0．05）；STAT4的表达水平在观察组患者髓核内明显高于对照组[（3．21±0．49）比（1．12±0．24），t ＝13．15，P ＜0.05]，差异有统计学意义（P ＜0．01），而 STAT6在腰椎间盘突出症患者与对照组差异无统计学意义（P ＞0.05）。结论Th1和 Th2细胞及其分泌的细胞因子在椎间盘突出症的发病机制中可能有重要的作用。
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结核病患者胸腔积液和血清白细胞介素-12、-18、-10水平变化及意义
目的：探讨结核病患者胸腔积液和血清白细胞介素（IL）-12、-18、-10水平变化及临床意义。方法随机选取60例结核病患者作为研究对象，检测患者胸腔积液和血清，观察患者胸腔积液和血清中IL-12、IL-18、IL-10的变化情况，比较初治患者和复治患者胸腔积液和血清中 IL-12、IL-18、IL-10含量的差异。结果无论在初治组还是复治组患者中，胸腔积液 IL-12和 IL-10水平均明显高于血清，差异均有统计学意义（均 P ＝0．000），而初治组患者胸腔积液中 IL-18含量稍低于血清，但差异无统计学意义（P ＝0．151），且复治患者血清和胸腔积液中 IL-12和 IL-10含量高于初治患者。Ⅱ型患者胸腔积液中 IL-12含量为（3025．80±1324．75）pg／mL，血清中 IL-12含量为（498．84±326．73）pg／mL，胸腔积液中 IL-12含量明显高于血清（P ＝0．020），Ⅲ型结核病患者和Ⅳ型结核病患者胸腔积液中 IL-12也显著高于血清中 IL-12含量，差异均有统计学意义（P ＝0．000）。Ⅱ型患者胸腔积液中 IL-18含量为（1735．54±872．65）pg／mL，Ⅲ型患者胸腔积液中 IL-18含量为（754．63±426．87）pg／mL，Ⅳ型患者胸腔积液中 IL-18为（655．19±412．63）pg／mL，不同类型结核病患者血清和胸腔积液中 IL-18水平变化没有明显规律，差异无统计学意义（P ＝0．998）。Ⅱ型患者胸腔积液中IL-10含量为（29．35±8．46）pg／mL，Ⅲ型患者胸腔积液中 IL-10含量为（183．49±56．76）pg／mL，Ⅳ型患者胸腔积液中 IL-10含量为（162．95±52．43）pg／mL，不同临床类型的结核病患者胸腔积液中 IL-10含量不同，并且均明显高于患者血清中 IL-10含量，差异均有统计学意义（P ＝0．000）。结论结核病患者在发病时，胸腔积液中 IL-12和 IL-10含量均显著高于血清，并且复治患者胸腔积液中 IL-12和 IL-10水平明显高于初治患者，但是 IL-18在患者血清和胸腔积液中没有明显变化规律。
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再生障碍性贫血患者血清IL-10、IL-12和sFas水平及其意义
目的探讨再生障碍性贫血(再障)患者血清白细胞介素 10( IL- 10)、白细胞介素 12( IL- 12)和可溶性 Fas( sFas)水平及其临床意义. 方法利用双抗体夹心酶联免疫吸附法( ELISA)检测 30例再障患者和 15例骨髓增生异常综合征( MDS)患者血清 IL- 10、 IL- 12和 sFas水平.结果与正常组比较,重型再障( SAA)患者血清 IL- 10、 IL- 12和 sFas水平均明显升高( P均 《 0. 01); 慢性再障( CAA)和 MDS患者血清 IL- 10和 sFas水平均明显升高( P均 《 0. 01),而 IL- 12水平较正常有上升的趋势,但无统计学意义( P 》0. 05); SAA和 CAA患者血清 IL- 10、 IL- 12水平较 MDS患者有上升的趋势,但组间无统计学意义( P均 》0. 05); SAA和 MDS患者血清 sFas水平较 CAA患者明显升高( P《 0. 05, P《 0. 01),而 MDS患者较 SAA患者血清 sFas水平有上升的趋势,但无显著性差异( P 》0. 05). 结论血清高水平的 IL- 10、 IL- 12和 sFas可能参与再障骨髓造血干 /祖细胞衰竭的病理生理过程;检测上述细胞因子水平,为再障患者监测病情、评价疗效、指导临床治疗及预后判断提供较为客观的指标.
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白细胞介素12基因治疗结肠癌的实验研究
目的观察携白细胞介素 12( mIL-12)基因逆转录病毒载体的包装细胞( PA317-mIL-12)瘤内注射后,对肿瘤生长的抑制及对荷瘤动物生存的影响.方法在非免疫缺陷的结肠癌动物模型上分别施以化疗、放射免疫 (放免 )导向治疗、 PA317-mIL-12基因治疗以及放免导向与 IL-12基因联合治疗,比较各治疗组的肿瘤抑制效果和荷瘤动物的生存情况.结果经筛选后的携有 mIL-12逆转录病毒载体包装细胞系 PA317-mIL-12的上清, mIL-12浓度 48 h达 27 ng/106细胞.治疗 3周后, IL-12基因治疗组( GT组)和 IL-12基因与 RIT联合治疗组 (GT加 RIT组 )无论瘤体积还是瘤重量均明显低于对照组,生存率明显高于对照组( P< 0.01).结论 PA317-mIL-12瘤内注射可有效抑制肿瘤生长,延长荷瘤动物的生存时间.基因治疗疗效优于化疗、放免导向治疗.放免导向与 IL-12基因联合治疗疗效更佳.
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EGFP-CD40L 融合基因的构建、表达及功能鉴定
目的 构建编码增强型绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,EGFP)和人CD40L胞外段(hecdCD40L)组成的融合基因真核表达载体,并探讨表达后的融合蛋白对人树突状细胞(dendritic cells, DCs)表型和功能的影响. 方法 以RT-PCR方法从健康人外周血单个核细胞中克隆hecdCD40L基因片段.小鼠血管内皮细胞生长因子受体2信号肽序列(SigmKDR)和EGFP与hecdCD40L基因片段融合或不融合,插入真核表达载体pcDNA3.1(-),构建pcDNA3.1 SigmKDR-EGFP(sEGFP)和pcDNA3.1 sEGFP-hecdCD40L.用脂质体将表达载体转染至体外培养的COS-7细胞后,G418抗性筛选,流式细胞仪分选并检测EGFP和/或CD40L的表达.Western blot检测融合蛋白在COS-7细胞及其上清中的表达,用镍柱和超滤离心管获取纯化浓缩的sEGFP-hecdCD40L和sEGFP融合蛋白与人DCs共孵育,流式细胞仪和ELISA分析DCs对2种融合蛋白的摄取率、DCs表型变化以及细胞因子IL-12的分泌. 结果 pcDNA3.1 sEGFP或pcDNA3.1 sEGFP-hecdCD40L转染COS-7细胞后,经G418抗性筛选和流式细胞仪分选筛选获得高效表达融合蛋白的单克隆细胞株,EGFP阳性细胞可达95%以上,Western blot在细胞内和上清中均能检测到融合蛋白.sEGFP或sEGFP-hecdCD40L与DCs共孵育2 h,流式细胞仪检测示EGFP阳性率前者为28.6%,后者为56.9%,24 h后分析DCs的表型,sEGFP-hecdCD40L融合蛋白增强DCs表面CD80、CD83和HLA-DR分子的表达以及刺激IL-12的分泌,而sEGFP对DCs的表型和IL-12的分泌无明显影响. 结论 用SigmKDR、EGFP和hecdCD40L构建的融合基因能在真核细胞中表达并能分泌至细胞外,这种分泌型融合蛋白能靶向DCs,诱导DCs的成熟和上调其表面共刺激分子和MHC-II分子的表达,并刺激IL-12分泌.
