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顺铂对FOLR1基因表达上调的卵巢上皮性癌细胞生物学功能的影响
目的 探讨顺铂作用于叶酸结合蛋白(FOLRl)基因表达上调的卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞系SKOV3细胞后对其生物学功能的影响.方法 将FOLR1基因与pWPI质粒进行慢病毒包装,构建重组质粒pWPI-FOLR1并转染入SKOV3后得到pWPI-FOLR1-SKOV3细胞,作为重组质粒转染组；以同样方法将pWPI质粒转染入SKOV3后得到pWPI-SKOV3细胞,作为空载体转染组；并设立未转染的SKOV3细胞为空白对照组,采用逆转录(RT)-PCR技术和蛋白印迹法分别检测3组细胞中FOLR1 mRNA和蛋白的表达.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法,检测并绘制3组细胞的生长曲线,检测3组细胞对顺铂的敏感性[以50％抑制浓度(IC50)表示,选择重组质粒转染组的IC50作为下一步实验中顺铂浓度的基准],并检测不同浓度(分别为0.5×IC50、1×IC50、2×IC50,即分别为1.8、3.6、7.2 μg/ml；下同)顺铂作用不同时间(分别为24、48、72 h,下同)后3组细胞生长的抑制率；采用流式细胞仪检测不同浓度顺铂作用不同时间后3组细胞的凋亡率,及不同浓度顺铂作用48 h后3组细胞的细胞周期比例；高效液相色谱法检测同一浓度(3.6 μg/ml)顺铂作用48 h后3组细胞内顺铂的浓度.结果 RT-PCR技术和蛋白印迹法分别检测显示,重组质粒转染组细胞中有FOLR1 mRNA和蛋白的表达,而空载体转染组、空白对照组细胞中无FOLR1 mRNA和蛋白的表达.MTT比色法检测显示,重组质粒转染组细胞生长速度快、对顺铂敏感(其IC50低,为3.6 μg/ml)、相同作用条件(包括顺铂的浓度和作用时间)下其细胞生长的抑制率高,分别与空载体转染组、空白对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05)；而空载体转染组与空白对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).流式细胞仪检测显示,3组细胞的凋亡率随着顺铂浓度(分别为1.8、3.6、7.2 μg/ml)的升高及作用时间(分别为24、48及72 h)的延长而升高,呈明显的剂量-时间依赖关系(P＜0.05),S期细胞比例随着顺铂浓度的升高而升高,呈明显的剂量依赖关系(P＜0.05)；在相同的作用条件下,重组质粒转染组细胞的凋亡率、S期细胞比例分别与空载体转染组、空白对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05),而空载体转染组与空白对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).高效液相色谱法检测显示,同一浓度(3.6μg/ml)的顺铂作用48 h后,重组质粒转染组细胞内顺铂浓度为(2.60±0.21) μg/106个细胞,高于空载体转染组的(1.49 ±0.12) μg/106个细胞和空白对照组的(1.54±0.11) μg/106个细胞,差异均有统计学意义(P＜0.05)；而空载体转染组与空白对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 卵巢癌SKOV3细胞中FOLR1基因表达上调后,SKOV3细胞的生物学功能发生改变,表现为对顺铂的敏感性增加、细胞内顺铂浓度升高、细胞周期中S期比例增加、抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡.
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叶酸受体1在鼻咽癌紫杉醇耐药细胞系中表达及意义
目的 探讨鼻咽癌紫杉醇耐药细胞系中叶酸受体1 (folate receptor 1,FOLR1)的表达及其作用.方法 人鼻咽癌亲本细胞株CNE1采用大剂量冲击和小剂量维持方式诱导建立耐药指数(resistance index,RI)分别为2.0、5.8、10.5的耐药细胞系,采用反转录PCR法检测不同耐药指数细胞的FOLR1 mRNA表达情况;选择耐药指数为10.5的耐药细胞为耐药组,人鼻咽癌亲本细胞株CNE1为对照组,2组细胞采用20、40、80μg/L FOLR1抗体预处理后,检测细胞增殖抑制率;将耐药组和对照组细胞分别再分为预处理和未预处理2个亚组,其中预处理组均采用低浓度20 μg/L FOLR1抗体进行预处理,未预处理组均正常培养,然后各组分别添加5、10、15 μg/L紫杉醇,检测各组细胞增殖抑制率.结果 RI为10.5耐药细胞FOLR1 mRNA表达水平(2.49±0.29)高于RI为5.8、2.0细胞和对照细胞(1.28±0.31、0.51±0.16、0.12±0.04),RI为5.8耐药细胞高于RI为2.0耐药细胞和对照细胞,RI为2.0耐药细胞高于对照细胞(P＜0.05);耐药组和对照组细胞20 μg/L FOLR1抗体预处理下细胞增殖抑制率比较差异无统计学意义(P＞0.05),40、80 μg/LFOLR1抗体预处理下,耐药组细胞增殖抑制率[(14.45±2.03)％、(47.85±7.07)％]明显高于对照组[(11.92±2.74)％、(29.19±5.17)％](P＜0.05);2组细胞80 μg/L FOLR1抗体预处理下细胞增殖抑制率高于20、40 μg/LFOLR1抗体预处理下,40 μg/L FOLR1抗体预处理下高于20 μg/L FOLR1抗体预处理下(P＜0.05);对照组中预处理组和未处理组细胞在5、10、15 μg/L紫杉醇处理下细胞增殖抑制率比较差异均无统计学意义(P＞0.05),耐药组中预处理组细胞在5、10、15 μg/L紫杉醇处理下细胞增殖抑制率[(10.85±0.74)％、(33.91±3.17)％、(46.39±2.87)％]明显高于未预处理组[(4.31±0.33)％、(24.68±2.02)％、(29.25±2.53)％](P＜0.05);对照组中预处理组和未预处理组在5、10、15 μg/L紫杉醇处理下细胞增殖抑制率均明显高于耐药组中预处理组和未预处理组(P＜0.05).结论 FOLR1表达与鼻咽癌细胞抵抗紫杉醇耐药相关,低浓度FOLR1抗体可使耐药细胞对紫杉醇敏感性提高,有效逆转鼻咽癌耐药,高浓度FOLR1抗体可直接杀死鼻咽癌耐药细胞.
