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脂联素对子宫内膜癌细胞AMPK/mTOR/S6K1信号通路及胰岛素增敏的影响
目的 探讨脂联素对子宫内膜癌HEC-1B细胞腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳类雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)信号通路及胰岛素增敏效应的影响.方法 实验分为4组:脂联素组(Ad组,加入20μg/ml的脂联素作用30 min);抑制剂组(加入10μmol/L的AMPK抑制剂——复合物C作用30 min);脂联素+抑制剂组(Ad+抑制剂组,10μmol/L复合物C预处理30 min后,再加入20μg/ml脂联素作用30 min);对照组(仅加入无血清DMEM培养基).(1)荧光定量PCR技术及蛋白印迹法检测HEC-1B细胞中脂联素受体(AdipoR)1、AdipoR2 mRNA和蛋白的表达水平.(2)以不同浓度(分别为2.5、5、10、20μg/ml)脂联素作用于HEC-1B细胞30 min,增敏实验时再加50 nmol/L胰岛素作用5 min;以20μg/ml脂联素作用于HEC-1B细胞不同时间(分别为15、30、45、60 min),增敏实验时再加50 nmol/L胰岛素作用5 min.蛋白印迹法检测HEC-1B细胞中AMPK、mTOR、S6K1蛋白活化水平以及胰岛素受体底物1(IRS1)酪氨酸磷酸化水平.(3)活细胞计数(CCK-8)法检测4组HEC-1B细胞的增殖能力,体外穿膜实验检测4组HEC-1B细胞的迁移能力.结果 (1)在HEC-1B细胞中,AdipoR1 mRNA及蛋白的表达水平分别为8.50±0.09、0.91±0.03,明显高于AdipoR2 mRNA及蛋白(分别为1.00±0.00、0.69±0.03;P<0.05).(2)脂联素以时间、浓度依赖方式诱导HEC-1B细胞中AMPK蛋白活化水平增高但抑制mTOR、S6K1蛋白活化水平(P<0.05),且脂联素浓度为20μg/ml、作用时间为30 min时,AMPK蛋白的活化水平均达到峰值.脂联素以浓度依赖方式诱导IRS1酪氨酸磷酸化水平增高(P<0.05).(3)Ad组HEC-1B细胞增殖的抑制率为(0.68±0.34)％,Ad+抑制剂组为(0.24±0.04)％,两组比较,差异有统计学意义(t=17.88,P<0.05).Ad组穿膜细胞数为(77±8)个,Ad+抑制剂组为(132±13)个,两组比较,差异有统计学意义(t=-7.34,P<0.05).结论 脂联素通过AMPK/mTOR/S6K1信号通路发挥抑制子宫内膜癌HEC-1B细胞增殖的效应,并通过调控AMPK/S6K1/IRS1信号通路增加HEC-1B细胞对胰岛素的敏感性.
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滋养细胞自噬在子痫前期胎盘中的形成及调控机制
目的 探讨自噬在子痫前期患者胎盘滋养细胞中的形成及调控机制.方法 选择2016年8月至2016年11月在南京医科大学附属常州妇幼保健院产科剖宫产的20例重度子痫前期患者为子痫前期组,随机选取同期剖宫产的血压正常、无蛋白尿的20例正常孕妇为对照组.同时收集2组孕妇胎盘组织,采用透射电镜观察胎盘滋养细胞的超微结构及自噬体形成情况,实时定量聚合酶链反应和Western印迹法检测胎盘组织中微管相关蛋白l轻链3B(microtubule associated protein 1 light chain 3B,MAPlLC3B,亦称LC3B)和Beclin 1的表达情况,以及Western印迹法检测胎盘组织中蛋白激酶B(protein kinase B,PKB,亦称Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)通路的活性.采用两独立样本t检验或Mann-Whitney U检验对数据进行统计学分析.结果 透射电镜可观察到重度子痫前期患者胎盘滋养细胞胞膜微绒毛稀少、排列紊乱,胞质中可见典型的自噬体形成增加.子痫前期组孕妇胎盘组织中LC3B mRNA和蛋白的表达水平及LC3-Ⅱ/LC3-I比值均高于对照组[分别为3.37 (2.37～6.11)与0.62(0.25～4.15)、1.40±0.17与1.00±0.13及1.57±0.25与1.00±0.31,Z或t值分别为-4.440、3.274及3.113,P值均＜0.05].而2组孕妇胎盘组织中Beclin 1 mRNA和蛋白的表达差异无统计学意义(P值均＞0.05).与对照组相比,子痫前期组孕妇胎盘组织中Akt和mTOR蛋白的磷酸化修饰水平明显下降(分别为1.00±0.29与0.64±0.21、1.00±0.32与0.60±0.22,t值分别为-3.672及-2.895,P值均＜ 0.05);但2组胎盘组织中Akt及mTOR蛋白表达差异均无统计学意义(P值均＞0.05).结论 重度子痫前期患者胎盘中Akt/mTOR通路活性下降,滋养细胞自噬过度激活,提示Akt/mTOR通路活性下降致使滋养细胞自噬过度激活可能是子痫前期发病的重要机制.
关键词： 先兆子痫 滋养层 自噬 胎盘 原癌基因蛋白质c-akt TOR丝氨酸-苏氨酸激酶 -
mTOR/P70S6K 信号通路在宫颈癌组织中的表达及其临床意义
目的：探讨 mTOR/ P70S6K 信号通路在宫颈癌组织中的表达水平及其相关临床诊断、治疗意义。方法收集2012年1月—2014年1月手术切除或进行活检的正常宫颈组织65例,宫颈癌组织、癌旁组织各85例,提取组织中的 mRNA,应用 RT-PCR 的方法来检测3种组织中 mTOR 和 P70S6K mRNA 的表达水平,并进行分析。结果宫颈癌组织中 mTOR、P70S6K mRNA 的表达明显高于癌旁组织及正常组织(P <0．05),mTOR、P70S6K mRNA 水平在宫颈癌组织、癌旁组织及正常组织中均呈正相关(P <0．05)。结论 mTOR 信号通路在宫颈癌组织中处于活化状态,其在宫颈癌的发生发展以及向其他部位转移中具有重要作用,是一个诊断和治疗的分子靶点。
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mTOR抑制剂治疗结节性硬化症的临床研究进展
结节性硬化症(TSC)是一种累及多器官的常染色体显性遗传综合征,近年来其治疗方面已取得一定进展.mTOR抑制剂能持续抑制mTOR靶点,缩小室管膜下星形细胞瘤和血管肌脂瘤的体积,具有改善患者肺功能、控制癫痫发作的作用.目前美国FDA已批准西罗莫司用于治疗淋巴管平滑肌瘤,依维莫司用于治疗不能手术的伴有室管膜下巨细胞星形细胞瘤或肾血管肌脂瘤的TSC患者.mTOR抑制剂治疗TSC的有效性和安全性有待进一步深入研究.
关键词： TOR丝氨酸-苏氨酸激酶 结节性硬化症 药物疗法 mTOR抑制剂 -
mTOR信号通路在心血管系统中作用研究的进展
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)是一种非典型的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,它是调控细胞生长、增殖、翻译、代谢及自噬的关键蛋白激酶,初因为其能被雷帕霉素抑制而被认识.研究表明,mTOR在调节心血管系统的生理与病理过程中起到关键的作用.本文重点回顾了mTOR信号通路在心血管系统中作用研究的进展.
关键词： TOR丝氨酸-苏氨酸激酶 磷酸肌醇3-激酶类 心血管系统 -
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路在心脏发育和重构中作用的研究进展
哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)是一种非典型的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,其行使生理功能主要通过两种不同的蛋白质复合体mTORC1和mTORC2. mTORC1调节蛋白质的合成、细胞的生长增殖,而mTORC2调节细胞的存活.研究表明,mTOR在心脏发育和重构中发挥关键调节作用.寻找心脏特异性mTORC1的抑制剂,而不损害其生理功能,可能为心血管疾病治疗提供新思路.
关键词： TOR丝氨酸-苏氨酸激酶 生长发育 心肌肥大 心律失常
