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蛋白激酶R样内质网激酶的磷酸化对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑神经细胞凋亡的影响
目的：研究蛋白激酶R样内质网激酶( protein kinase R-like ER kinase,PERK)的磷酸化及其下游的 C/EBP 同源蛋白( C/EBP homologous protein, CHOP )的表达在缺氧缺血性脑损伤( hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)中的作用和机制。方法60只新生7日龄SD大鼠分为假手术组和HIBD组,每组各30只,每组又按照手术0 h,6 h和24 h分为3个亚组,每组10只。采用流式细胞仪检测脑细胞凋亡情况,并用 Western blot 方法测定脑组织中磷酸化的PERK 及 CHOP表达水平。结果(1) HIBD 6 h 出现典型的凋亡细胞峰,细胞凋亡率为(2．17±0．19)%。 HIBD 24 h 凋亡峰更为明显,细胞凋亡率达到(13．42±0．83)%,与假手术组(0．57±0．06)%相比,差异有统计学意义( P <0．01)。(2)假手术组与HIBD 0 h 大鼠脑组织中磷酸化的PERK和CHOP表达水平较低,在 HIBD 6 h后二者表达开始上升,24 h 上升更加明显,而假手术组各个时间点二者表达差异无统计学意义( P>0．05)。与假手术组比较,HIBD组各时间点二者的表达均明显上升,差异有统计学意义(P<0．01)。(3)缺氧缺血后各时间点磷酸化的PERK 的表达和 CHOP 的表达呈正相关(r=0．997,P<0．05)。结论脑缺氧缺血后,随着凋亡的出现,磷酸化的PERK 和 CHOP 表达水平升高,提示 PERK-CHOP通路的活化可能参与了新生大鼠 HIBD 神经细胞凋亡的发生。
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阿托伐他汀对大鼠脑缺血再灌注 PERK/elfR2a通路及 Caspase-3表达的影响
目的：研究蛋白激酶 R 样内质网激酶(PERK)/ eIFR2a 通路及 Caspase-3在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用机制及阿托伐他汀对其的影响。方法采用大脑中动脉线栓塞法制作大鼠脑缺血再灌注模型；随机分为缺血再灌注组、假手术组、阿托伐他汀组、阿托伐他汀+ Salubrinal 抑制剂组，大体标本采用 TTC 染色，釆用 West-ern-blot 法检测 PERK、Caspase-3蛋白表达及 eIF2a 蛋白磷酸化。结果与假手术组相比，大鼠缺血再灌注后PERK 蛋白表达及 eIF2a 的磷酸化增加， Caspase-3表达的活性增强(P <0.01)；阿托伐他汀干预可以减轻 PERK 蛋白表达及 eIF2a 蛋白磷酸化(P <0.05)。给予特异性 eIF2a 磷酸化抑制剂 Salubrinal 后可抑制 eIF2a 的磷酸化及Caspase-3表达的活性(P <0.05)，对 PERK 蛋白表达无影响。形态学上从 TTC 染色提示：在缺血再灌注组 TTC 染色可见大片脑梗死组织。 Salubrinal 抑制剂及阿托伐他汀干预后脑梗死体积明显缩小(P <0.05)。结论内质网应激通过 PERK/ eIF2a/ Caspase-3途径促进细胞凋亡，阿托伐他汀干预可以减轻脑缺血再灌注损伤。
