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逆转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)文献资料
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逆转录-环介导等温扩增技术检测急性呼吸道感染儿童中的呼吸道合胞病毒
目的 利用逆转录-环介导等温扩增技术(reverse loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP),建立一种快速且敏感、特异的从急性呼吸道感染儿童的呼吸道标本中检测呼吸道合胞病毒(Rsv)的方法.方法 设计特异性RT-LAMP扩增引物,对引物进行特异性与灵敏度评估后,应用LA-320C实时浊度仪,对RSV 5株分离株及经直接免疫荧光法(DFA)呼吸道病毒多病原检测过的急性呼吸道感染患儿的呼吸道标本101例进行RT-LAMP检测,并以本研究室已建立的RT-巢式PCR为对照方法.结果 所建立的RT-LAMP方法敏感度好,60 min扩增反应时间内每个反应可检测到1个拷贝的RSV(A或B亚型)RNA；且方法特异性好,与其他病毒间无交叉反应；4株A亚型及1株B亚型RSV分离株RT-LAMP方法检测均为阳性；在101例经DFA检测的呼吸道标本中,所建立的RT-LAMP方法与DFA方法在RSV A、B亚型检测的总符合率为95.0％,且两种方法的相关系数为0.895；与RT-巢式PCR的总符合率为94.1％,两种方法的相关系数为0.871.结论 本研究所建立的RT-LAMP方法耗时短、操作简便、灵敏且特异,适用于儿科临床工作中疑似RSV感染的呼吸道标本的快速、特异的病原学检测.
