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青海地区汉族和藏族结直肠癌组织HIF-2α及VEGF表达差异研究
目的 结直肠癌是常见的恶性肿瘤之一,全球结直肠癌发病率居第3位,死亡率居第4位.青海省是我国结直肠癌高发的地区,省内民族众多.因此,本研究观察青海地区汉族、藏族结直肠癌组织中缺氧诱导因子-2α(hypoxia-inducible factor-2alpha,HIF-2α)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达变化.方法 选取2015-03-01-2017-10-31青海大学附属医院收治的结直肠癌患者120例.根据民族不同分为汉族患者组及藏族患者组.根据第七版《AJCC肿瘤分期手册》对患者进行临床分期.根据细胞分化程度分为高分化组、中分化组及低分化组.采用免疫组化、实时定量荧光PCR技术检测汉族、藏族癌组织及癌旁正常组织中的HIF-2α及VEGF蛋白表达.比较不同民族的HIF-2α及VEGF蛋白在癌组织及癌旁正常组织的表达,在不同结直肠癌临床因素之间比较癌组织中的HIF-2α及VEGF蛋白表达,并分析二者的相关性.结果 汉族及藏族患者组的癌组织HIF-2α(z'=-6.792,P=0.001;z'=-6.782,P=0.001)、VEGF免疫组化评分(z'=-7.035,P=0.001;z'=-6.872,P=0.001)与癌旁组织比较升高,差异有统计学意义;汉族患者组癌组织中的HIF-2α、VEGF免疫组化评分与藏族患者组比较差异无统计学意义,z值分别为-1.013和-0.109,P值分别为0.311和0.913.汉族及藏族患者组的癌组织HIF-2α(t=15.384,P=0.001;t=16.415,P=0.001)、VEGF RNA表达(t=22.558,P=0.001;t=19.833,P=0.001)与癌旁组织比较明显升高,差异有统计学意义;汉族患者组癌组织中的HIF-2α、VEGF RNA表达与藏族患者组比较差异无统计学意义,t值分别为0.691和1.372,P值分别为0.491和0.173.HIF-2α及VEGF免疫组化评分在≥50岁组(z值分别为-8.726和-5.971)、肿瘤≥5 cm组(z值分别为-6.574和-4.476)和淋巴结转移组(z值分别为-5.853和-3.495)明显升高,差异有统计学意义,均P=0.001;HIF-2α及VEGF免疫组化评分在不同性别比较差异无统计学意义,z值分别为-1.300和-0.156,P值分别为0.193和0.876;HIF-2α及VEGF免疫组化评分随着分期的增加逐渐增加,Ⅲ期患者的评分较Ⅰ、Ⅱ期明显升高,差异有统计学意义,x2值分别为67.036和28.975,均P=0.001.HIF-2α及VEGF免疫组化评分在低分化组中较中及高分化组明显增加,差异有统计学意义,x2值分别为51.595和16.726,均P=0.001.HIF-2α及VEGF RNA表达在不同临床因素中的比较结果与HIF-2α及VEGF免疫组化评分结果相似.HIF-2α、VEGF免疫组化评分与TNM分期(r值分别为0.747和0.493)、组织分化(r值分别为0.655和0.375)相关,P值均为0.001.HIF-2α、VEGF RNA表达与TNM分期(r值分别为0.689和0.674)、组织分化(r值分别为0.595和0.628)相关,均P=0.001.结论 不同民族的癌症组织中的HIF-2α及VEGF表达无明显差异.HIF-2α及VEGF在中度海拔的结直肠组织中高表达,与临床分期及组织细胞分化程度密切相关.HIF-2α及VEGF表达越高,患者的临床分期越高或组织细胞分化越差.
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FH基因在遗传性平滑肌瘤病及肾癌综合征中的研究进展
遗传性平滑肌瘤及肾细胞癌(HLRCC)综合征不同于普通家族性肾癌,其肾肿瘤比其他类型的家族性肾癌更具侵袭性.延胡索酸水化酶(FH)基因突变导致"假缺氧"驱动机制不依赖低氧环境的低氧诱导因子2α(HIF-2α)的稳定表达,这可能是HLRCC的生物学发病机制.该文就FH基因突变、HIF-α表达及其肿瘤作用机制,与其相关的核转录因子Nrf2基因失活的新观点进行阐述.
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HIF-2α调控FoxM1对低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响
目的 探讨低氧诱导因子2α(HIF-2α)基因调控叉头框M1蛋白质(FoxM1)蛋白表达对低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖的影响.方法 构建HIF-2α过表达慢病毒载体(LV-HIF-2α)和沉默RNA(siRNA),并分别在常氧和低氧条件下转染大鼠PASMC,其中常氧组分成常氧对照组、常氧+ LV-HIF-2α空载组、常氧+LV-HIF-2α组;低氧组分成低氧对照组、低氧+siRNA-HIF-2α空载组、低氧+siRNA-HIF-2α组,采用Western印迹检测HIF-2α及其对下游FoxM1蛋白、细胞周期蛋白D1 (cyclinD1)及细胞增殖相关Aurora A蛋白表达影响.5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(EdU)细胞增殖检测过表达和抑制HIF-2α表达对大鼠PASMC增殖能力的影响.结果 常氧+LV-HIF-2α组HIF-2α表达均显著高于常氧对照组和常氧+LV-HIF-2α空载组(0.17±0.02比0.09±0.01和0.07±0.00),而低氧+siRNA-HIF-2α组PASMC中HIF-2α表达均显著低于低氧对照组和低氧+siRNA-HIF-2α空载组(0.28±0.01比0.35±0.02和0.30±0.01)(均P＜0.05);常氧+LV-HIF-2α组FoxM1蛋白、cyclinD1及细胞增殖相关Aurora A蛋白表达均显著高于常氧对照组和常氧+LV-HIF-2α空载组(分别为0.40±0.03比0.24±0.01和0.30±0.01,0.22±0.02比0.09±0.01和0.08±0.02,0.29±0.02比0.04±0.01和0.07±0.01)(均P＜0.05);低氧+siRNA-HIF-2α组FoxM1蛋白、cyclinD1及AuroraA蛋白表达均显著低于低氧对照组和低氧+siRNA-HIF-2α空载组(分别为0.23±0.01比0.36±0.02和0.32±0.01,0.15±0.01比0.31±0.01和0.28±0.03,0.14±0.02比0.33±0.03和0.27±0.02)(均P＜0.05);常氧对照组PASMC的EdU阳性表达率显著低于常氧+LV-HIF-2α组[(30.77±2.43)％比(55.56±3.01)％],而低氧对照组显著高于低氧+siRNA-HIF-2α组[(65.28±3.21)％比(44.64±2.78)％](均P＜0.05).结论 HIF-2α调控FoxM1表达明显增加而促进低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖.
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中国高原地区老年男性退行性骨质疏松患者氧化应激相关因子和骨代谢指标的相关性:非随机对照临床试验方案
背景:低氧是影响和调节骨生长代谢的重要因素,因此高原低氧地区老年人骨质疏松患者较多.与氧化应激有关的低氧诱导因子可诱导血管内皮生长因子、胰岛素样生长因子及内皮素等多种因子表达异常,但是否能影响骨代谢指标的变化尚不清楚.目的:试验探讨高原地区老年男性退行性骨质疏松患者氧化应激相关因子和骨代谢指标的相关性.方法:试验为前瞻性,单中心,非随机,对照临床试验方案.试验计划纳入中国青海大学附属医院中国高原低氧地区老年退行性骨质疏松患者120例设为骨质疏松组,同时收集120位健康老年人作为对照组.于入院后1 d采用酶联免疫吸附法检测两组血清氧化应激相关因子低氧诱导因子1α,2α,血管内皮生长因子、骨钙素及抗酒石酸酸性磷酸酶5 b水平变化,采用双能X射线骨密度仪检测L1-4椎体、右侧股骨颈和股骨大转子共3个区域的骨密度变化.试验的主要观察指标为入院后1 d血清低氧诱导因子1α水平变化;次要观察指标为入院后1 d血清低氧诱导因子2α,血管内皮生长因子及骨钙素及抗酒石酸酸性磷酸酶5 b水平变化;入院后1 d氧化应激指标低氧诱导因子1α,2α,血管内皮生长因子和骨代谢指标骨钙素及抗酒石酸酸性磷酸酶5 b水平的相关性.试验经青海大学附属医院伦理委员会批准[审批单位:青海大学附属医院,审批号:QHY1402G].研究符合世界医学会制定的《赫尔辛基宣言》的要求.参与者本人对试验方案和过程均知情同意,并签署知情同意书.试验于2015年1月开始进行患者招募,样本及数据收集时间为2015年1月至2018年2月,结果指标分析时间及试验完成时间为2018年3月.文章结果将以科学会议报告,或在同行评议的期刊上发表传播.试验已在中国临床试验注册中心注册(注册号:ChiCTR-ROC-17012848).讨论:文章希望通过此试验证实高原地区老年男性退行性骨质疏松患者氧化应激相关因子和骨代谢指标具有相关性,以进一步明确高原地区老年男性退行性骨质疏松的发病危险因素,从而为该地区人群骨质疏松发生及发展的预防提供帮助.
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HIF-2α和Tie2在乳腺癌中的表达及临床意义
目的 研究低氧诱导因子2α(HIF-2α)、血管生成素受体(Tie2)、微血管密度(MVD)在乳腺癌中的表达及临床意义.方法 采用免疫组化法检测41例乳腺癌组织(A组)及22例乳腺正常组织(B组)中HIF-2α、Tie2及MVD表达,RT-PCR方法检测HIF-2α mRNA和Tie2 mRNA表达水平,分析HIF-2α、Tie2表达与乳腺癌临床指标的关系.结果 与B组相比,A组HIF-2α、Tie2、MVD表达明显增加(P＜0.05).A组中HIF-2α mRNA、MVD表达均与Tie2 mRNA表达呈正相关(r=0.881、0.832,P＜0.05).HIF-2α、Tie2蛋白表达与肿瘤大小、淋巴结转移密切相关.结论 HIF-2α、Tie2在乳腺癌血管生成过程中起到了重要的作用,可作为判断肿瘤生物学行为指标之一.
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长期移居高原的健康汉族人HIF-2α基因型分布变化及意义
目的 探讨长期移居高原的健康汉族人低氧诱导因子2α (HIF-2α)基因型分布变化及其意义.方法 选择39例移居高原(平均海拔约3 300米)且居住20年以上的健康汉族志愿者(青海汉族组),采用Sanger基因测序法检测其HIF-2α基因14个位点(rs1867785、rs2881324、rs11125068、rs11675441、rs10193827、rs13419896、rs4953360、rs4953361、rs7571879、rs7589621、rs7571218、rs7598371、rs7594912、rs1562453)的基因型,分别与45例北京健康汉族人(北京汉族组,来源于人类基因组单体型图计划数据库)、47例青海健康藏族人(青海藏族组,来源于以往文献)的基因型进行比较.结果 青海汉族组和北京汉族组HIF-2α基因14个位点的基因型分布比较差异均无统计学意义(P均＞0.05);与青海藏族组比较,青海汉族组和北京汉族组HIF-2α基因9个位点(rs1 1125068、rs11675441、rs10193827、rs13419896、rs4953360、rs4953361、rs7571879、rs7589621、rs7598371)的基因型分布比较差异均有统计学意义(P均＜0.05).结论 长期移居高原的健康汉族人与北京健康汉族人的HIF-2α基因型分布具有一致性,其对高原低氧环境的适应能力与HIF-2α基因型分布无关.
关键词： 低氧诱导因子2α 基因分布 高原健康汉族 人类基因组单体型图计划数据库 -
藏族人群HIF-2α基因rs1867785位点多态性与高原肺动脉高压的关系
目的 探讨高原地区藏族人群低氧诱导因子2α(HIF-2α)基因rs1867785位点突变与高原肺动脉高压(HAPH)的关系.方法 选取世居高海拔地区藏族人71例,存在HAPH 27例(HAPH组),不存在HAPH 44例(对照组),收集其一般资料,行心脏彩超检测肺动脉收缩压,测定血氧饱和度,行全血细胞分析,运用基因测序的方法测定HIF-2α基因rs1867785位点基因型,并分析肺动脉收缩压与血氧饱和度、红细胞压积、血红蛋白相关性.结果 两组除肺动脉收缩压外,一般资料、血氧饱和度及全血细胞分析指标均无统计学意义.HAPH组HIF-2α基因rs1867785位点GG、GA、AA基因型分布频率分别是7.4％、55.6％、37.0％,A、G等位基因频率分别为64.8％、35.2％.对照组rs1867785位点GG、GA、AA基因型分布频率分别是2.3％、25.0％、72.7％,A、G等位基因频率分别为85.2％、14.8％.rs1867785位点3种基因型分布频率组间差异有统计学意义(p=0.01),HAPH组G等位基因频率显著高于对照组(P=0.01).肺动脉收缩压与血氧饱和度、红细胞压积、血红蛋白无明显相关性(P均＞0.05).结论 携带HIF-2α基因rs1867785位点GA基因型的藏族人群患HAPH的风险可能较携带AA基因型的高,G等位基因可能为HAPH易感等位基因.
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低氧环境下低氧诱导因子2α对大鼠肾小球内皮细胞细胞间紧密连接蛋白表达和细胞通透性的影响
目的：探讨低氧环境下大鼠肾小球内皮细胞（rGENC）中低氧诱导因子2α（HIF?2α）对细胞间紧密连接蛋白闭合蛋白（occludin）、闭锁小带蛋白1（ZO?1）的表达和细胞通透性的影响。方法10%FBS的DMEM培养基37℃5%CO2体外培养rGENC ，待细胞生长达到80%时进行不同分组：（1）给予不同时间（0、12、24、48 h）低氧处理，即置于5%O2，5%CO2和90%N2低氧培养箱培养；（2）分为正常对照组、低氧组、阴性对照组（转染空载体+低氧）、低氧转染组（转染HIF?2αsiRNA+低氧）培养24 h。慢病毒转染空载体或HIF?2αsiRNA；Western印迹检测各组细胞中occludin、ZO?1和HIF?2α蛋白表达。电阻仪检测跨上皮细胞电阻（TEER）。结果随着缺氧时间的延长，低氧组细胞中HIF?2α表达逐渐增加，而occludin和ZO?1蛋白表达逐渐降低（与对照组比较，均P＜0.01），均呈时间依赖性。并且低氧组TEER低于正常对照组（P＜0.01），其细胞通透性增加。慢病毒转染后筛选出稳定抑制HIF?2α表达细胞株。与低氧组比较，低氧转染组细胞中HIF?2α表达降低，occludin和ZO?1蛋白表达增加，TEER升高（均P＜0.01）；阴性对照组上述各项目与低氧组比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。结论低氧环境下rGENC通过上调HIF?2α表达来降低细胞间紧密连接蛋白occludin和ZO?1的表达，进而增加细胞通透性。
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低氧对L02细胞脂肪代谢的影响及其机制
目的 研究低氧对L02细胞脂质代谢的影响及其可能的机制. 方法 以正常人肝细胞株L02细胞为研究靶细胞,对照组和低氧处理组细胞分别在21％和1％氧浓度下培养.油红O染色、甘油三酯(TG)测定检测肝细胞脂肪变程度；RT-PCR法检测细胞内低氧诱导因子(HIF) 2α、固醇调节元件结合蛋白(SREBP) -lc mRNA的表达情况; Western blot法检测HIF-2α亚基、脂肪分化相关蛋白(ADRP)、脂肪酸合成酶(FAS)蛋白的表达量.各组甘油三酯测定值行2×3的析因设计方差分析；两样本均数间比较采用t检验；其他多个样本均数的比较采用单因素方差分析与NewmanKeulS法检验.结果 与对照组比较,低氧组L02细胞内出现脂质沉积,TG含量增多,且随低氧处理时间延长逐渐增多(F=115.04,P＜0.01).低氧12、24、48 h组SREBP-1c mRNA表达水平校对照组下调(0.236±0.043、0.287±0.044、0.342±0.049与0.503±0.037,F=28.37,P＜0.01),FAS蛋白表达水平较对照组下调(0.562±0.054、0.674±0.062、0.682±0.057与0.857±0.069,F=16.08,P＜0.0l).对照组未检测到HIF-2α表达,而低氧处理3h后HIF-2 α蛋白表达逐渐增加,6h后达高峰,12、24h又逐渐降低,各时间点分别为0.609±0.031、0.973±0.067、0.792±0.056、0.437±0.038(F=85.30,P＜0.01);低氧12、24、48h各组ADRP蛋白相对含量分别为0.319±0.043、0.732±0.056、0.873±0.066,均明显高于对照组0.211±0.019(P值均＜0.05),且随低氧时间延长,表达量逐渐增多(F=167.49,P＜0.01).结论 低氧通过HIF-2 α-ADRP途径诱导肝细胞脂肪沉积.
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低氧诱导因子2α的研究进展
低氧诱导因子2α(hypoxia inducible factor 2α,HIF-2α),又称为内皮PAS区域1(endothelial PAS domain protein 1,EPAS1),由Tian等[1]于1997年发现,主要存在于内皮细胞中.近年国内外的研究表明,HIF-2α作为低氧调节通路中的重要调控因子,首先能够维持藏族人低的血红蛋白浓度,在高原居民对缺氧环境的适应方面起着重要作用;其次还发现其在铁代谢、红细胞生成等生理方面也起着重要作用,此外还与一些疾病的发生有关.然而近年来的大部分研究主要集中于HIF-2α在生理方面的所起作用,而对具体的信号通路与调控基因没有阐述清楚,因此进一步加强对HIF-2α在疾病发生过程中作用机制的研究,不仅有助于加深对于疾病的认识,而且有助于临床医师从基因蛋白水平辅助诊治疾病.本文主要叙述HIF-2α在生理及其相关疾病中的研究进展.
