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内皮抑素对NSCLC细胞系中VEGF受体2表达的影响及其放射增敏效应机制研究
目的：研究内皮抑素对NSCLC细胞（人肺腺癌A549细胞、人肺鳞癌Calu?1细胞）中VEGF受体2（ VEGFR2）表达影响，并探索其放射增敏效应的可能机制。方法 CCK8法检测内皮抑素对细胞增殖抑制作用，计算24 h的20％药物抑制浓度（ IC20）；采用RT?PCR及蛋白印迹法检测各组VEGFR2、相关信号通路及HIF?1α mRNA与蛋白表达变化；克隆形成实验检测各组细胞放射敏感性，流式细胞术检测凋亡及周期分布。多样本均数比较采用单因素方差分析，组间比较采用两样本均数t检验。结果经内皮抑素处理后，Calu?1细胞增殖活力明显下降（F＝50?36，P＜0?01），IC20＝296?5μg／ml；VEGFR2和HIF?1αmRNA与蛋白表达水平均受抑制（F＝25?43、10?44，P 值均＜0?05）；同时Akt、ERK 1／2和p38的蛋白磷酸化水平均减低（ F＝2?89、0?24、1?09，P值均＜0?05）；其放射增敏比为1?38；凋亡率、G2＋M期阻滞增加（ F＝44?15、104?24，P值均＜0?01）。此外，与Calu?1细胞相比，内皮抑素对A549细胞放射增敏比为1?09。结论内皮抑素能促进VEGFR2高表达Calu?1细胞凋亡并能增强放射敏感性，对低表达的A549细胞效果有限。
关键词： 内皮抑素 A549细胞系 Calu-1细胞系 血管内皮生长因子受体2 放射敏感性 -
RNA干扰VEGFR-2表达对Calu-1细胞增殖、迁移、侵袭力及放射效应影响
目的：研究VEGFR?2对肺癌细胞系Calu?1细胞增殖、迁移、侵袭及联合放射后凋亡率影响，并探讨其可能机制。方法 siRNA敲低Calu?1细胞中的VEGFR?2基因，借助实时荧光定量PCR和蛋白印迹法检测VEGFR?2表达水平的变化；将细胞分为对照组、VEGF组、VEGFR?2基因敲低组和基因敲低加VEGF组。利用CCK8法、细胞划痕实验及Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移和侵袭能力变化，利用蛋白印迹法检测VEGFR?2及下游相关信号通路蛋白表达水平变化；各组细胞联合放射后，检测细胞凋亡。结果 RNA干扰VEGFR?2后Calu?1细胞中VEGFR?2的mRNA水平和蛋白水平均降低（ P＝0．001、0．000）；RNA干扰VEGFR?2后Calu?1细胞的增殖、迁移、侵袭能力均降低（ P＝0．000、0．000、0．031）；RNA干扰VEGFR?2后Calu?1细胞中Akt、ERK 1／2、p38的蛋白磷酸化水平均降低（ P＝0．336、0．986、0．553）；RNA干扰VEGFR?2后联合放射后Calu?1细胞的凋亡率增加（ P＝0．012），RNA干扰VEGFR?2后HIF?1α蛋白表达被抑制（ P＝0．016）。结论 VEGFR?2基因表达敲低后显著抑制了Calu?1细胞的多项生理功能，并提高了放射后细胞凋亡率。
