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miR-610通过调控缝隙连接α3蛋白的表达抑制人肺癌细胞的增殖和侵袭
目的 探讨miR-610对肺癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其机制.方法 应用real-time PCR法检测miR-610在高低不同转移潜能肺癌细胞株95D和95C中的表达.分别将miR-610模拟物和抑制物转染入95D和95C细胞,应用细胞计数盒8(CCK-8)法和5-溴-2'-脱氧尿苷(BrdU)掺入实验检测miR-610对肺癌细胞增殖的影响;应用划痕实验和Transwell侵袭实验检测miR-610对肺癌细胞侵袭的影响.以生物信息学软件预测miR-610的潜在靶基因,采用双荧光素酶报告基因系统和Western blot法验证miR-610对缝隙连接α3蛋白(GJA3)表达的调控作用.结果 miR-610在低转移肺癌细胞95C中的表达水平是其在高转移肺癌细胞95D中的表达水平的(8.75±0.21)倍(P＜0.01).空白对照组和转染miR-610抑制物组95C细胞的增殖细胞数分别为(37.41±2.39)％和(59.63±4.57)％,空白对照组和转染miR-610模拟物组95D细胞的增殖细胞数分别为(68.75±4.28)％和(46.13±3.27)％,差异均有统计学意义(均P＜0.01).划痕24h和48 h后,转染miR-610抑制物组95C细胞划痕的宽度分别为初始划痕宽度的(58.74±4.62)％和(34.63 ±2.73)％,均明显低于空白对照组和转染miR-610抑制物对照组(均P＜0.01);转染miR-610模拟物组95D细胞划痕的宽度分别为初始划痕宽度的(88.59±6.92)％和(72.24±5.46)％,均明显高于空白对照组和转染miR-610模拟物对照组(均P＜0.01).转染miR-610抑制物对照组、转染miR-610抑制物组95C细胞的侵袭细胞数分别为(112.4±10.6)个/空格和(161.8 ±12.5)个/空格,转染miR-610模拟物对照组、转染miR-610模拟物组95D细胞的侵袭细胞数分别为(178.4±12.3)个/空格和(76.7±5.8)个/空格,差异均有统计学意义(均P＜ 0.01).miRanda软件预测、双荧光素酶报告基因系统和Western blot法检测结果均表明,GJA3是miR-610调控的靶基因.结论 miR-610通过调控GJA3的表达抑制肺癌细胞的增殖和侵袭.
