首页 > 文献资料
-
乳腺癌细胞体外摄取2-脱氧葡萄糖荧光类似物
目的 观察2-脱氧葡萄糖(2-DG)荧光类似物2-N[7-硝基苯-2-乙二酸,34羟氨基]-2-脱氧葡萄糖(2-NBDG)被高表达葡萄糖转运蛋白1(GLUT-1)的乳腺癌细胞靶向摄取的情况.方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫组化法检测乳腺癌MDA-MB-231细胞GLUT-1 mRNA和蛋白的表达,采用Western blot法比较乳腺癌MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞GLUT-1的蛋白表达量.应用2-NBDG孵育人乳腺癌MDA-MB-231细胞,采用荧光显微镜及流式细胞仪观察、分析对2-NBDG的摄取情况,比较MDA-MB-231和MCF-7细胞吸收2-NBDG量的差异.结果 RT-PCR和免疫组化检测结果显示,MDA-MB-231细胞高表达GLUT-1;Western blot检测结果进一步显示,MDA-MB-231细胞的GLUT-1表达(0.946 4±0.007)高于MCF-7(0.833±0.010).荧光成像及流式细胞仪分析结果显示,MDA-MB-231细胞能快速摄取2-NBDG,且加入50 mmol/L D-葡萄糖后,荧光强度降低了46.0%.2-NBDG孵育乳腺癌细胞20 min后,MDA-MB-231细胞荧光强度(25.10±0.57)明显高于MCF-7细胞(10.12±0.62).结论 2-NBDG能迅速被高表达GLUT-1的乳腺癌MDA-MB-231细胞靶向吸收.
-
2-NBDG用于乳腺癌MDA-MB-231细胞荧光检测研究
目的:评价荧光2-N[7-硝基苯-2-乙二酸,3-4羟氨基](2-[N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)amino],NBD)标记2-脱氧葡萄糖(2-deoxyglucose,2-DG)即2-NBDG,靶向探测高表达葡萄糖转运蛋白1(Glut1)的MDA-MB-231乳腺癌细胞可行性. 方法:2-NBDG分别孵育接种在6孔板里的人乳腺癌MDA-MB-231细胞1,10,20,40 min后,荧光显微镜观察并摄像;为了进行竞争性抑制,用D型葡萄糖预先孵育细胞30 min后再加入2-NBDG孵育20 min,荧光显微镜观察并摄像.同时用流式细胞仪分析孵育不同时间及有无竞争抑制的细胞吸收2-NBDG量的差异.结果:荧光成像显示2-NBDG积聚在 MDA-MB-231细胞膜和细胞质内,加入D型葡萄糖竞争抑制后,荧光信号显著减弱;流式细胞仪分析表明初的1 min 2-NBDG被肿瘤细胞迅速摄取(MDA-MB-231细胞自发荧光强度为2.66±0.09,2-NBDG孵育1 min后荧光强度为4.04±0.18),10 min时吸收持续增加(荧光强度为5.64±0.17),20 min吸收明显(荧光强度为25.10±0.57);加入D型葡萄糖竞争抑制后,细胞摄取2-NBDG的荧光强度降低46%.结论:2-NBDG能迅速被高表达Glut1的MDA-MB-231乳腺癌细胞靶向吸收,有望成为葡萄糖代谢的光学标记物来检测高代谢的恶性肿瘤.
-
代综方对C2C12骨骼肌细胞葡萄糖摄取及GLUT4蛋白表达的影响
目的:研究代综方(dai zong fang,DZF)对骨骼肌细胞葡萄糖摄取及葡萄糖转运体4(glucosetransponer 4,GLUT4)蛋白表达的影响.方法:采用含2％马血清(horse serum,HS)的DMEM培养液诱导C2C12骨骼肌细胞分化为肌管,荧光标记的葡萄糖类似物2-NBDG测定葡萄糖摄取,对2-NBDG的量效时效关系进行测定;采用不同剂量DZF干预分化的C2C12细胞,检测其对细胞基础状态及胰岛素刺激状态下葡萄糖摄取的影响;Western blot检测DZF对C2C12细胞GLUT4总蛋白表达及膜转位的影响.结果:在基础状态或胰岛素刺激下,DZF低、中、高剂量均可提高骨骼肌葡萄糖摄取,差异有统计学意义(P＜0.05).基础状态下,DZF能促进GLUT4总蛋白及膜转位蛋白的表达(P＜0.05);胰岛素刺激状态下,DZF对GLUT4总蛋白表达无显著影响(P＞0.05),但仍可促进GLUT4膜转位蛋白的表达(P＜0.05).结论:DZF可增加骨骼肌细胞葡萄糖摄取,具有类胰岛素作用,其作用机制可能与促进GLUT4蛋白向细胞膜转位有关.
-
胰岛素激活PI3K-AKT通路而促进H9c2心肌细胞葡萄糖摄取
目的 探索胰岛素(Insulin)对H9c2心肌细胞葡萄糖摄取的影响及其与PI3 K-AKT信号通路的关系.方法 采用不同时间及不同浓度的胰岛素处理H9c2心肌细胞,确定胰岛素处理H9c2细胞的佳浓度和适时间.实验分空白对照组(NC组),2-NBDG组,Insulin组,Insulin+ PI3K-AKT通路抑制剂LY294002组(LY294002组),Insulin+ p38 MAPK通路抑制剂BIRB796组(BIRB796组),使用荧光标记2-脱氧葡萄糖(2-NBDG)检测H9c2心肌细胞葡萄糖摄取能力,以流式细胞仪和荧光酶标仪检测心肌细胞对葡萄糖摄取的变化.通过间接免疫荧光法及激光共聚焦检测H9c2心肌细胞葡萄糖转运体-1(glucose tansporter-1,GLUT-1)及葡萄糖转运体-4(glucose tansporter-4,GLUT-4)的表达.结果 ①2-NBDG可用于检测H9c2心肌细胞葡萄糖摄取能力.②Insulin处理H9c2心肌细胞适浓度和时间分别为200 μmol/L和30 min.③Insulin组与对照组相比增加H9c2心肌细胞葡萄糖摄取(P＜0.05);LY294002组与Insulin组相比降低心肌细胞葡萄糖摄取,两组间差异明显(P＜0.05),BIRB796组较Insulin组无统计学差异(P＞0.05),提示LY294002可抑制Insulin促进心肌细胞葡萄糖摄取,而BIRB796不能抑制上述作用.④H9c2心肌细胞膜表达葡萄糖转运体1(GLUT1)和葡萄糖转运体4(GLUT4),Insulin处理H9c2心肌细胞30min后经激光共聚焦成像显示H9c2心肌细胞膜GLUT1和GLUT4表达增加(P＜0.05).结论 胰岛素促进H9c2心肌细胞葡萄糖摄取的作用可能与PI3 K-AKT通路相关,与p38MAPK通路不相关,胰岛素激活PI3 K-AKT信号通路后可能促进H9c2心肌细胞膜上GLUT-1及GLUT-4的表达,从而使H9c2心肌细胞对葡萄糖摄取增加.
-
2-NBDG检测H9c2心肌细胞葡萄糖摄取能力的研究
目的 评估荧光标记2-脱氧葡萄糖(2-deoxyglucose,2-DG)即2-NBDG(2-[N-(7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diaxol-4-yl) amino]-2-deoxyglucose,2-NBDG)作为光学探针检测H9c2心肌细胞葡萄糖摄取的能力.方法 间接免疫荧光法测定H9c2心肌细胞葡萄糖转运体(GLUT-1、GLUT-4)的表达.用不同浓度2-NBDG和不同孵育时间处理H9c2心肌细胞,探讨其量效-时效关系,荧光酶标仪测定2-NBDG孵育H9c2细胞的适浓度和时间.以2-NBDG适浓度孵育H9c2心肌细胞,同时用共聚焦显微镜和流式细胞仪检测细胞内荧光强度差异,观察心肌细胞摄取2-NBDG情况.使用竞争性抑制剂D型葡萄糖(D - Glu)与2-NBDG共同孵育H9c2心肌细胞,观察D-Glu对2-NBDG的竞争性抑制情况.结果 间接免疫荧光法显示H9c2心肌细胞高表达GLUT-1、GLUT-4.2-NBDG孵育H9c2心肌细胞的适浓度和时间分别为100 μmol/L和30 min.共聚焦成像和流式细胞仪均显示H9c2心肌细胞能有效摄取2-NBDG,加入D-Glu后使心肌细胞内荧光信号强度分别降低27.0％和46.7％ (P ＜0.01).运用2-NBDG检测细胞葡萄糖摄取的方法,证实胰岛素能促进H9c2心肌细胞葡萄糖的摄取.结论 2-NBDG能迅速被高表达GLUT-1、GLUT-4的H9c2心肌细胞摄取并滞留于细胞内,且可以被D-Glu竞争性抑制,表明2-NBDG可作为一个方便且敏感的探针,用于检测细胞葡萄糖摄取的能力.
-
苯丙氨酸对C2C12细胞葡萄糖摄取能力的影响及与mTOR-p70S6K通路的关系探讨
目的 观察苯丙氨酸对小鼠成肌细胞系C2C12葡萄糖摄取能力的影响,以及刺激后细胞内哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)-p70S6K信号通路分子的变化.方法 体外培养C2C12细胞,分化诱导为多核的肌管细胞后进行饥饿处理,然后分别用不同浓度苯丙氨酸(1.25、2.5、5、10、20 mmol/L)处理细胞,以KRB平衡液作为对照.通过检测2-NBDG评价细胞葡萄糖摄取能力.用Western blot方法检测细胞内mTOR、p70S6K、胰岛素受体底物(IRS)-I、蛋白激酶B(Akt)的表达情况.结果 与KRB平衡液对照相比,5 mmol/L亮氨酸使C2C12细胞的葡萄糖摄取能力下降了约30％(P=0.001),5 mmol/L苯丙氨酸使C2C12细胞摄取葡萄糖的能力上升了约40％(P＜0.01),且苯丙氨酸的这种促进作用随浓度增大有逐渐增强的趋势.苯丙氨酸对细胞内mTOR Ser2448磷酸化水平无明显影响.除1.25 mmol/L外,其它浓度苯丙氨酸均能抑制p70S6K Thr389的表达.亮氨酸使IRS-1Ser636/639磷酸化水平表达增高(P＜0.01),除1.25 mmol/L外,其它浓度的苯丙氨酸均有抑制IRS-1 Ser636/639表达的趋势,但与对照相比差异无统计学意义(P=0.381).高浓度短时间的苯丙氨酸刺激对C2C12细胞内的AktSer473表达无明显影响.结论 苯丙氨酸可能通过减少p70S6K的磷酸化,继而减少p70S6K对IRS-1的刺激作用而使细胞葡萄糖摄取能力增强.但苯丙氨酸对mTOR-p70S6K通路的抑制作用不通过Akt的激活.
关键词： 苯丙氨酸 胰岛素抵抗 mTOR-p70S6K 2-NBDG C2C12细胞
