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达沙替尼抑制前列腺癌细胞雄激素受体磷酸化机制研究
目的 探讨酪氨酸激酶抑制剂达沙替尼抑制前列腺癌细胞雄激素受体(AR)磷酸化的机制.方法 以HEK-293T及COS7细胞株为研究对象,野生型AR(WT-AR)载体及其突变载体AR Y267F、AR Y534F分别与Ack1或Src载体共转染细胞,Western blot方法检测AR磷酸化位点.以LNCaP细胞株为研究对象,在无雄激素条件下,用表皮生长因子(EGF)或内皮样生长因子家族成员heregulin处理后,Western blot法检测AR磷酸化状态,再加入达沙替尼或用siRNA转染法沉默Ack1或Src基因后,Western blot法观察AR磷酸化变化;反转录-实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测不同处理的LNCaP细胞前列腺特异抗原(PSA.)以及人激肽释放酶2(hK2) mRNA的表达.结果 转染载体后,HEK-293T细胞中Ack1激酶介导AR Tyr267特异位点磷酸化,COS7细胞中Src介导AR Tyr534特异位点磷酸化.heregulin处理LNCaP细胞后,AR Tyr267位点磷酸化;加入达沙替尼后,该位点磷酸化被抑制;Ack1被沉默后,heregulin诱导的AR Tyr267位点磷酸化亦被抑制.EGF处理LNCaP细胞后,AR Tyr534位点磷酸化;加入达沙替尼后,该位点磷酸化被抑制;Src被沉默后,EGF诱导的AR Tyr534位点磷酸化亦被抑制.EGF或heregulin可上调LNCaP细胞内源性AR靶基因PSA和hK2 mRNA水平(P＜0.05),给予达沙替尼后,抑制了heregulin诱导的PSA和hK2 mRNA水平(P＜0.05),但EGF所诱导的PSAmRNA及hK2 mRNA的表达水平无明显变化(P＞0.05).结论 达沙替尼抑制AR Tyr267、AR Tyr534位点磷酸化,其通过抑制heregulin诱导的前列腺癌细胞AR Tyr267特异位点磷酸化及前列腺癌标志物PSA及hK2 mRNA的表达而发挥抗前列腺癌效应.
