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沙利度胺、5-氟尿嘧啶对胃癌细胞生长和凋亡作用的影响
目的 探讨沙利度胺(Thal)、5-氟尿嘧啶(5-Fu)单用和联合应用对MGC-803细胞株的抑制增生、诱导凋亡的作用.方法 采用AO/EB染色荧光显微镜观察处理细胞的形态变化,MTT法榆测对细胞的增生抑制作用,流式细胞术(FAM)定量检测对细胞的诱导凋亡作用.结果 在MTT分析中,单药,Thal药物浓度≥25 mg/L、5-Fu单药各浓度组与空白对照组相比均可增加对MGC-803细胞的增生抑制率(P＜0.05).在5-Fu剂量为25 mg/L时,联合用药组的增生抑制率增加更显著(P＜0.01),但两个联合用药组之间差异无统计学意义(P＞0.05);在5-Fu剂量均为12.5 mg/L时,联合使用沙利度胺50mg/L或100 mg/L时与5-Fu 25 mg/L单药组相比差异均无统计学意义(P＞0.05).而在FAM检测中,各实验组与空白对照组相比及各实验组两两比较,凋亡率差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 Thal和5-Fu单用时对MGC-803细胞株均有抑制增生和诱导凋亡作用,联合应用时其作用明显增强,联合使用沙利度胺时可降低5-Fu的使用剂量.
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细胞毒力因子CagA上调人胃黏膜上皮GES-1细胞TET2蛋白的表达
目的:探讨幽门螺旋杆菌细胞毒素相关基因A(cytotoxin associated gene A,CagA)与胃黏膜中TET2(ten-eleven translocation 2)蛋白表达的关系,以及TET2在CagA致癌过程中可能的作用.方法:Real-time PCR检测人胃黏膜上皮细胞株GES-1和胃癌细胞株MGC-803中TET2 mRNA的表达水平,细胞免疫染色法检测TET2蛋白的细胞定位及表达.将pEGFP-CagA通过脂质体介导转染GES-1细胞,用200 μmol/L H2O2处理GES-1细胞建立氧化应激模型,流式细胞仪检测细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)和细胞周期的变化.结果:TET2 mRNA在GES-1细胞的表达水平低于胃癌MGC-803细胞(1.00±0.08 vs 1.68 ±0.07,P＜0.05),TET2蛋白在GES-1细胞表达水平低于胃癌MGC-803细胞(8.09 ±3.57 vs 14.60±2.31,P＜0.05).与阴性对照组pEGFP-N1相比,pEGFP-CagA转染组GES-1细胞中TET2 mRNA表达水平升高(1.00 ±0.04 vs 0.06 ±0.00,P＜0.05),TET2蛋白表达水平也升高(16.45 ±4.40 vs 10.82 ±3.39,P＜0.05),ROS积累水平升高(18.39 ±4.52 vs 15.31 ±4.40,P＜0.05),细胞周期检测出现明显的凋亡峰.氧化应激(H2O2处理)模型中GES-1细胞与空白对照GES-1细胞相比,TET2 mRNA水平升高(1.44 ±0.02 vs 1.00 ±0.04,P＜0.05),TET2蛋白表达水平增高(15.72±4.52vs 11.74 ±4.34,P＜0.05).结论:幽门螺旋杆菌毒力因子CagA可诱导GES-1细胞ROS增高和细胞周期的失衡,氧化应激可以诱导TET2表达上调,TET2可能参与CagA的致癌过程.
