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膀胱肿瘤T24/ADM多药耐药细胞株的建立及耐药机制的研究
目的 建立人类膀胱肿瘤多药耐药(MDR)细胞株并研究其耐药机制.方法 以人类膀胱肿瘤细胞株T24为研究对象,用多柔比星(ADM)浓度梯度递增诱导法,建屯人类膀胱肿瘤细胞多药耐药模型(简称T24/ADM).用MTT法检测肿瘤细胞的MDR特性;RT-PCR检测膀胱肿瘤耐药细胞株MDR基因的表达情况.流式细胞术检测耐药细胞P-糖蛋白(P-gp)的表达.结果 T24/ADM对多种化疗药物产生耐药,对ADM的耐药性提高了16.3倍.RT-PCR检测发现T24/ADM中MDR基因和P-gp的表达明显增强.结论 T24/ADM细胞具有MDR特性,其耐药性与MDR基因和P-gp的过表达有关.
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靶向MDR1基因siRNA逆转HepG2/ADM细胞耐药性的研究
目的 采用RNA干扰技术逆转人类肝癌细胞系/阿霉素(human hepatocellular liver carcinoma cell line/adriamycin,HepG2/ADM)细胞中多耐药基因,探讨该基因能否有效地抑制多耐药基因(multidrug resistance gene,MDR1)及其编码的糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达,并检测对HepG2/ADM耐药表型的逆转效果.方法 采用药物大剂量冲击法建立HepG2/ADM耐药模型,构建靶向MDR1的小干扰RNA表达载体,并转染到HepG2/ADM细胞中,应用半定量逆转录-聚合酶链反应检测基因转染前后MDR1 mRNA表达水平的变化,Western-blot检测各组细胞P-gp蛋白表达的变化,用噻唑蓝法检测各组细胞对阿霉素、顺铂、长春新碱和氟尿嘧啶等药物的敏感性.结果 HepG2/ADM细胞系不仅对阿霉素耐药,而且对其他化疗药也有抗性,呈现多药耐药特性;重组质粒鉴定结果表明针对MDR1的小干扰RNA表达载体成功构建;与对照组比较,转入细胞后MDR1 mRNA水平明显下降,P-gp蛋白表达明显降低;转入细胞后HepG2/ADM细胞对化疗药物的敏感性明显提高,部分逆转其耐药性.结论 靶向MDR1的小干扰RNA可显著抑制HepG2/ADM细胞中MDR1基因和P-gp蛋白的表达,逆转P-gp介导的HepG2/ADM细胞的耐药性.
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三氧化二砷对膀胱癌细胞耐药性的影响
目的 探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对膀胱癌细胞株BIU-87耐药性的影响.方法用As2O3与羟基喜树碱联合处理耐药膀胱移行细胞癌株BIU-87后,用四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡和生存素(survivin)表达的变化.结果三氧化二砷与羟基喜树碱联合处理耐药膀胱移行细胞癌株BIU.87细胞后,细胞生长受到明显的抑制,survivin表达明显减少,凋亡细胞百分比较对照组明显增多,且均具有浓度依赖性.结论As2O3可增强化疗药物作用,部分逆转膀胱癌的耐药性,并促进凋亡,且呈现浓度依赖性.
