This study investigated the possible involvement of microRNAs in the regulation of genes that participate in peripheral neural regeneration. A microRNA microarray analysis was conducted and 23 microRNAs were identiifed whose expression was signiifcantly changed in rat dorsal root ganglia after sciatic nerve transection. The expression of one of the downregulated microRNAs, microRNA-214, was validated using quantitative reverse transcriptase-PCR. MicroRNA-214 was predicted to target the 3′-untranslated region of Slit-Robo GTPase-activating protein 3. In situ hybridization veriifed that microRNA-214 was located in the cytoplasm of dorsal root ganglia primary neurons and was downregulated following sciatic nerve transection. Moreover, a com-bination of in situ hybridization and immunohistochemistry revealed that microRNA-214 and Slit-Robo GTPase-activating protein 3 were co-localized in dorsal root ganglion primary neu-rons. Western blot analysis suggested that Slit-Robo GTPase-activating protein 3 was upregulated in dorsal root ganglion neurons after sciatic nerve transection. These data demonstrate that mi-croRNA-214 is located and differentially expressed in dorsal root ganglion primary neurons and may participate in regulating the gene expression of Slit-Robo GTPase-activating protein 3 after sciatic nerve transection.

血浆microRNA-214在AMI患者中的表达及其与左室重构的关系

目的 探讨血浆微小RNA(microRNA)-214在急性心肌梗死(AMI)中的表达及其与左室重构(LVR)的关系.方法 选取AMI患者158例和正常对照组85例.根据经皮冠状动脉介入术(PCI)术后是否发生左室重构,将AMI患者分为LVR组41例和非LVR组105例.荧光定量反转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测血浆microRNA-214含量,免疫法检测脑钠肽(BNP)及C反应蛋白(CRP)水平.Pearson相关分析LVR患者血浆microRNA-214水平与BNP、CRP的相关性.应用受试者工作特征(ROC)曲线评价血浆microRNA-214、BNP及CRP对AMI患者PCI术后发生LVR的诊断价值,Logistic回归模型分析上述指标与LVR的关系.结果 与对照组比较,LVR组和非LVR组左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(FS)均明显下降,且LVR组较非LVR组下降更明显(均P<0.05);而LVR组和非LVR组左室舒张末期内径(LVDD)、左心室舒张末期容积(LVEDV)、左心室收缩末期容积(LVESV)均明显升高,且LVR组较非LVR组升高更明显(均P<0.05).LVR组血浆microRNA-214、BNP及CRP水平均明显高于非LVR组和对照组(均P<0.05).相关分析显示,LVR患者血浆microRNA-214与BNP、CRP均呈正相关(r分别为0.684和0.402,均P<0.01).血浆microRNA-214、BNP预测AMI患者发生LVR的ROC曲线下面积(AUC)及95%CI分别为0.824(0.757~1.015)和0.785(0.721~0.864),均高于CRP[0.716(0.645~0.837)](P=0.0167).血浆microRNA-214预测AMI患者发生LVR的敏感度和特异度高,分别为72.6%和86.2%.Logistic回归模型分析显示,血浆microRNA-214及BNP水平升高为发生LVR的危险因素.结论 血浆microRNA-214在LVR患者中高表达,有望作为预测AMI患者PCI术后发生LVR的生物学指标.

MicroRNA-214在心肌缺血／再灌注的研究进展

MicroRNA是一种内源性的小核苷酸片段,已检测出700余种.大约30％的人类基因受miRNAs调节.其中miRNA-214在不同细胞有多种生物学作用,通过调控多种靶基因在诸多疾病中都发挥着重要作用.microRNA-214在心肌损伤及免疫方面也发挥积极的作用,通过抑制心肌缺血／再灌注的细胞凋亡、HIFlAN等机制参与心肌缺血／再灌注,其有可能成为预防和治疗治疗心肌缺血／再灌注损伤性疾病的新型靶向分子,为临床预防和治疗心肌缺血／再灌注损伤性疾病提供思路和方法.

慢病毒介导microRNA-214在成牙骨质细胞分化过程中的作用

目的:构建microRNA-214沉默慢病毒载体并研究其在成牙骨质细胞分化过程中的作用.方法:常规条件下培养成牙骨质细胞系,并对其进行矿化诱导,检测牙骨质分化及矿化相关标记物的变化.随后,构建microRNA-214沉默慢病毒载体并感染成牙骨质细胞,荧光显微镜观察其感染效率,并用茜素红和Von kossa染色检测不同组成牙骨质细胞的矿化能力,后检测不同组之间牙骨质分化标志物的变化.结果:Real-time PCR结果显示,随着诱导时间的延长,成牙骨质细胞分化的标志物ALP、Runx2、BSP、OCN、Col1a和CAP mRNA的相对表达量逐渐增加.空白组、阴性对照组和microRNA-214沉默载体组感染成牙骨质细胞系比率达到90%以上.相对于空白组和阴性对照组,microRNA-214沉默组microRNA-214的表达量显著下降,这表明microRNA-214沉默载体很好地发挥了沉默功能.相对于空白组和阴性对照组,microRNA-214沉默组能显著提高成牙骨质细胞的增殖速率.成牙骨质细胞矿化程度的检测发现,相对于空白组和阴性对照组,microRNA-214沉默组矿化结节数量增多,形态变大.同时,成牙骨质细胞分化的标志物ALP、Runx2、OCN、Col1a、BSP和CAP的表达量在microRNA-214沉默组中均显著增加.结论:microRNA-214沉默能够促进成牙骨质细胞分化.

下调microRNA-214表达对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖及凋亡的影响

目的 观察下调microRNA-214(miRNA-214)表达对人卵巢癌SKOV-3细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能机制.方法 采用脂质体介导方法将miRNA-214抑制剂转染人卵巢癌SKOV-3细胞,分为正常对照组、阴性对照组和miRNA-214下调组,采用实时定量聚合酶链反应方法检测miRNA-214、p21和p53基因mRNA表达,Western blot法检测细胞p21和p53蛋白表达.四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡.结果 正常对照组、阴性对照组和miRNA-214下调组人卵巢癌SKOV-3细胞miRNA-214表达分别为11.32 ±0.47、10.18 ±0.45和6.52±0.49,细胞增殖率分别为(17.61±1.83)％、(19.14±1.86)％和(11.24±1.89)％,细胞凋亡率分别为(14.47±1.86)％、(13.72±1.89)％和(21.21 ±1.91)％,p21基因mRNA表达分别为5.96±0.69、5.38±0.74和8.31 ±0.72,p53基因mRNA表达分别为3.64 ±0.39、3.17 ±0.38和5.86 ±0.37,p21蛋白表达分别为0.47 ±0.19、0.49 ±0.21和0.75 ±0.22,p53蛋白表达分别为0.40±0.14、0.39±0.16和0.66 ±O.18.与正常对照组和阴性对照组比较,miRNA-214下调组人卵巢癌SKOV-3细胞miRNA-214表达、细胞增殖率降低(P＜0.05,P＜0.01),细胞凋亡率、p21基因mR-NA表达、p53基因mRNA表达、p21蛋白表达、p53蛋白表达均增加(P＜0.05,P＜0.01);阴性对照组与正常对照组比较,miRNA-214表达、细胞增殖率、细胞凋亡率、p21基因mRNA表达、p53基因mRNA表达、p21蛋白表达、p53蛋白表达差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 下调人卵巢癌SKOV-3细胞miRNA-214表达可抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡,上调p21和p53基因表达可能是其作用机制.

MicroRNA-214在缺氧所致心肌细胞损伤过程中的作用

目的:探讨MicroRNA-214(miR-214)表达的变化与低氧诱导心肌细胞损伤的关系.方法:实时荧光定量PCR技术检测miR-214在心肌细胞低氧损伤中表达的变化.根据培养环境和有无使用miR-214的特异性抑制剂,将心肌细胞分为常氧培养组、常氧培养+ miR-214抑制组、低氧培养组及低氧培养+miR-214抑制组.MTT比色法测定各组细胞活力,流式细胞仪(FCM)检测各组细胞的凋亡情况,酶法测定各组细胞的乳酸脱氢酶(LDH)漏出情况.结果:低氧培养后,心肌细胞内的miR-214表达相对常氧培养的对照组有所增高(P＜0.05),并呈时间依赖关系,低氧培养24h,miR-214表达相对常氧培养的对照组可增高(1.9±0.1)倍.低氧培养会降低心肌细胞的存活率、增加心肌细胞凋亡及LDH漏出,miR-214抑制后,缺氧造成的上述损伤有所减轻.结论:miR-214的表达水平升高与低氧诱导的心肌细胞损伤有关,可能作为对抗缺氧损伤的靶点和诊断指标.

慢病毒介导microRNA-214在成牙骨质细胞分化过程中的功能研究

目的:构建microRNA-214沉默慢病毒载体并研究其在成牙骨质细胞分化过程中的作用.方法:常规条件下培养成牙骨质细胞系(OCCM-30 cell lines),并对其进行矿化诱导,检测牙骨质分化相关标记物的变化.构建microRNA-214沉默慢病毒载体并感染成牙骨质细胞后,用荧光显微镜检测其感染效率,cck8测定各组细胞的增殖速率;用茜素红和Von kossa染色检测各组成牙骨质细胞的矿化能力;Real-Time PCR检测各组细胞牙骨质分化标志物的表达水平.结果:常规诱导成牙骨质细胞并检测其标志物的改变,结果表明成牙骨质细胞矿化诱导成功.荧光显微镜显示,microRNA-214沉默载体能够顺利进入细胞;cck8测定结果显示,microRNA-214沉默组能显著提高成牙骨质细胞的增殖速率;茜素红和Von kossa染色结果发现,空白组和阴性对照组矿化结节形成量较少,而microRNA-214沉默组则形成较多的矿化结节;成牙骨质细胞矿化标志物检测显示,microRNA-214沉默组成牙骨质矿化标志物表达量较高(P<0.05).结论:microRNA-214沉默能够促进成牙骨质细胞的分化.

胃癌组织中microRNA-214和MGAT5表达及预后的相关性分析

目的:探讨胃癌组织中microRNA-214和MGAT5的表达及预后的相关性分析.方法:随机选取80例胃癌患者,收集其进行手术切除的胃组织标本作为研究对象,患者的胃癌组织作为研究组,患者的癌旁正常胃黏膜组织作为对照组,使用免疫组织化学的方法对患者的胃癌组织及癌旁正常胃粘膜组织进行检测,对测得的结果进行分析.结果:患者胃癌组织中的microRNA-214和MGAT5的表达率明显高于癌旁正常胃黏膜组织(P<0.05);在胃癌中出现淋巴结转移患者的microRNA-214和MGAT5的表达率明显高于未出现淋巴结转移的患者(P<0.05),Ⅲ 、Ⅳ期的microRNA-214和MGAT5表达率明显高于Ⅰ期、Ⅱ期患者(P<0.05);男性胃癌患者的microR-NA-214和MGAT5表达率明显低于女性患者(P<0.05);在年龄方面,<60岁的胃癌患者要比>60岁患者的microRNA-214和MGAT5表达率要明显低(P<0.05),肿块<5 cm的胃癌患者的microRNA-214和MGAT5表达率要比肿块>5 cm的胃癌患者要明显偏低(P<0.05),分化程度呈高、中分化的胃癌患者的microRNA-214和MGAT5表达率要比分化程度呈低分化的要明显偏低(P<0.05).结论:microRNA-214和MGAT5在胃癌组织中高表达,能够预测胃癌的发展、发生以及预后,在临床诊断和治疗过程中会起到一定的预示作用.