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微小RNA-3175对胶质瘤生长与侵袭的作用
目的 探讨微小RNA(miR)-3175在胶质瘤中的表达及对胶质瘤生长与侵袭的作用.方法 通过定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测40例人胶质瘤组织和胶质瘤细胞A172、U87中miR-3175的表达水平;用Lipofectamine 2000对胶质瘤细胞转染miR-3175抑制物后,qRT-PCR检测miR-3175的抑制程度,并通过噻唑蓝实验、流式细胞术、Transwell实验分别检测miR-3175对胶质瘤细胞增殖、周期、凋亡、侵袭的作用.Western blot分析miR-3175与凋亡相关蛋白p53、Bcl-2、细胞色素C、Caspase-3的关系.结果 miR-3175在胶质瘤中表达水平明显升高(与对照组比较P＜0.05).转染miR-3175抑制物后,胶质瘤细胞miR-3175的表达量明显下降(P＜0.05).miR-3175抑制物可有效抑制胶质瘤细胞增殖和侵袭能力,A172、U87增殖能力分别下降(23.56±8.06)％、(40.33±12.94)％;侵袭细胞数减少(47.83±4.33)％、(45.13±5.03)％;同时miR-3175抑制物可明显提升胶质瘤细胞G0/G1期的比例和凋亡率,A172、U87细胞G0/G1期比例分别升高13.51％、13.22％;细胞凋亡率分别提高(8.85±2.51)％、(12.31±5.20)％.miR-3175表达下降可导致凋亡相关蛋白p53、Bcl-2、细胞色素C、Caspase-3的异常表达(P＜0.05).结论 miR-3175在人胶质瘤中高表达,miR-3175表达量下降可有效抑制胶质瘤细胞生长和侵袭,促进凋亡.
关键词： 神经胶质瘤 微小RNA-3175 细胞增殖 细胞凋亡 侵袭 -
人胶质瘤细胞中微小RNA-3175对同源异形盒基因家族成员B1基因表达的调控作用
目的 观察在人胶质瘤细胞中微小RNA(miRNA,miR)-3175通过3'端非编码区(3'-UTR)对同源异形盒基因家族成员B1(HOXB1)表达的调控作用.方法 通过生物信息学可见miR-3175与HOXB1基因3'-UTR相互配对,构建HOXB1基因3'-UTR野生型和变异型荧光素酶载体,生物合成miR-3175 mimics、miR-3175 inhibitor和各自阴性对照.采用Lipofectamine 2000转染和双荧光素酶报告基因系统检测人胶质瘤细胞株(A172、U87)中miR-3175对HOXB1基因3'-UTR的调控作用.寡核苷酸转染24、48、72 h后,通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot分析miR-3175在人胶质瘤细胞株(A172、U251、U87)对HOXB1基因的表达调控.结果 双荧光素酶报告基因系统提示共转染HOXB1基因野生型载体和miR-3175 mimics后荧光素酶活性明显下降(P＜0.05),A172细胞株荧光素酶活性下降(37.38±10.98)％,U87细胞株荧光索酶活性下降(24.62±3.22)％.与对照组比较miR-3175 mimics可下调HOXB1基因的表达,转染72h后HOXB1 mRNA表达水平在A172细胞株中下降(42.57±5.52)％,U251细胞株中下降(71.06±0.41)％,U87细胞株中下降(55.54±7.57)％;miR-3175 inhibitor可上调HOXB1基因的表达,转染72 h后HOXB1 mRNA表达水平在A172细胞株中升高(92.39±31.88)％,U251细胞株中升高(250.25±60.37)％,U87细胞株中升高(128.44±25.11)％.转染后HOXB1蛋白水平的变化也得出了相类似的结果.结论 HOXB1基因3'-UTR为miR-3175调控直接靶点,并且miR-3175 mimics为靶向负调控,miR-3175 inhibitor为靶向正调控.
关键词： 胶质瘤 同源异形盒基因家族成员B1 微小RNA-3175
