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TRIM33对人脑胶质瘤U251细胞生物学功能影响的实验研究
目的 观察低氧条件下TRIM33基因表达的变化情况及对胶质瘤U251细胞生物学功能的影响.方法 将U251细胞分别在低氧及常氧条件下培养不同时间,采用实时荧光定量PCR及Western blot检测TRIM33的表达变化情况.通过构建TRIM33过表达慢病毒转染U251细胞,采用Western blot检测转染后U251细胞TRIM33的表达,低氧条件下利用CCK-8检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移及侵袭,Western blot检测上皮-间质转化(EMT)相关蛋白的表达情况.结果 (1)与常氧条件培养的U251细胞相比,低氧条件下U251细胞中的TRIM33表达发生下调(P＜0.001).(2)与空白对照组相比,TRIM33组的TRIM33相对表达水平明显升高(P＜0.001).(3)CCK-8实验表明,与空白对照组相比,TRIM33组的细胞增殖活力差异无统计学意义(P＞0.05).(4) Transwell实验结果显示,TRIM33组的迁移及侵袭能力较空白对照组明显降低(均P＜0.05).(5)Western blot结果显示,与空白对照组相比,EMT相关蛋白即波形蛋白、N-钙黏素表达水平均明显降低(均P＜0.01),E-钙黏素表达水平显著升高(P＜0.001).结论 在低氧条件下人脑胶质瘤U251细胞TRIM33表达发生下调,过表达TRIM33可以显著抑制低氧环境对U251细胞迁移、侵袭的影响,其可能是通过影响EMT实现的.TRIM33可作为拮抗低氧微环境的潜在基因治疗靶点.
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Trim33对骨髓基质细胞脂堆积及脂肪特异性基因表达影响
目的 三结构域家族33(Trim33)在调控成骨细胞分化的过程中起到了非常重要的作用,而在脂肪细胞分化过程中的作用却鲜有报道.文中以Trim33为对象探讨其对脂肪细胞分化的影响.方法 以转染Trim33-pcDNA3.1过表达质粒的骨髓基质细胞ST2细胞作为实验组,以转染pcDNA3.1质粒的骨髓基质细胞ST2细胞作为对照组,将2组细胞进行成脂诱导分化后,利用油红O染色、qRT-PCR及Western blot技术分析2组细胞CCAAT增强子结合蛋白(C/EBP)α、成脂相关因子过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ、脂肪细胞表征因子FABP4、脂肪因子adipsin等脂肪特异性基因表达的变化.结果 与对照组相比,实验组Trim33表达水平显著上升(1.00±0.31 vs 88.51±14.31,P<0.01).成脂诱导5 d后,经油红O染色,转染Trim33-pcDNA3.1过表达质粒,实验组较对照组细胞脂滴数量明显增多.A520结果与染色一致,实验组的A值明显高于对照组(0.69±0.03 vs 0.34±0.03,P<0.01).与对照组比较,实验组PPARγ、C/EBPα、FABP4、adipsin mRNA相对表达[(1.00±0.19)vs(1.79±0.21)、(1.00±0.12)vs(2.28±0.24)、(1.00±0.01)vs(10.30±1.38)、(1.00±0.16)vs(12.50±1.96)]均明显增加(P<0.05).实验组较对照组成脂特异性基因Trim33、PPARγ、C/EBPα、FABP4的蛋白表达上调.结论 Trim33能促进骨髓基质细胞脂堆积并增强脂肪特异性基因的表达.
