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基质辅助激光解吸电离飞行质谱技术联合纳米磁珠在宫颈癌早期诊断中的应用性研究
目的：探讨蛋白指纹图谱技术筛选宫颈癌患者血清中可用于诊断的特异性蛋白标志物。方法：采用弱阳离子纳米磁珠微球捕获的蛋白，用PBSⅡ-C型蛋白芯片阅读仪检测绘制成蛋白指纹图谱。所有蛋白指纹图谱采用Bomarker Wizard软件分析之后，用Biomarker Pattern软件识别终用于诊断的蛋白标志物，并优化组合建立诊断模型。结果：在宫颈癌与对照组之间找到74个差异蛋白峰（P＜0.01），其中质荷比（m/z）为3947 Da，4175 Da，5906 Da的蛋白峰组成的诊断模型可以将宫颈癌患者和健康志愿者区分，敏感性达94.0％（47/50），特异性为90.8％（59/65）。经双盲实验验证，该模型对宫颈癌诊断的敏感性达90.5％（38/42），特异性为96.0％（48/50）。结论：MALDI-TOF-MS技术联合纳米磁珠可以用来检测宫颈癌血清中的特异性蛋白标志物，并建立敏感性和特异性均较高的宫颈癌诊断模型。
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MALDI-TOF-MS结合WCX技术在垂体腺瘤诊断中的应用
目的:应用基质辅助增强激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)结合WCX纳米磁珠技术,筛选垂体腺瘤血清生物标志物,并建立血清蛋白指纹分类决策树.方法:分析40例垂体腺瘤、60例健康成人的血清样本,找到差异蛋白峰,建立垂体腺瘤的诊断模型和分类决策树.结果:在实验与对照组间找到42个差异蛋白峰(P＜0.01),以其中质荷比(m/z)为3382.0、4601.9、9191.2的3个蛋白峰建立垂体腺瘤的诊断模型.该模型对正常人群筛选垂体腺瘤的敏感性90.00％,特异性为88.30％；经双盲实验验证,该模型对垂体腺瘤诊断的敏感性为88.00％,特异性为83.30％.结论:利用MALDI-TOF-MS结合WCX纳米磁珠技术可筛选出垂体腺瘤患者和健康对照成人血清蛋白质谱存在的差异蛋白质峰,可作为垂体腺瘤检测、随访的指标.
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大肠埃希菌蛋白指纹图谱的建立
目的 建立大肠埃希菌(Escherichia coli,E.coli)蛋白指纹图谱,为E.coli感染快速诊断奠定基础.方法 收集临床分离E.coli 88株,提取细菌DNA,PCR检测E.coli 16S rRNA.蛋白提取液提取细菌蛋白,干化学法测蛋白浓度,应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)检测E.coli蛋白,采用Ciphergen Proteinchip软件自动采集数据.重复测定20次E.coli混合标本,评价SELDI检测E.coli蛋白分子量的重复性.结果 E.coli标准菌株ATCC 25922和临床分离株均可检出16S rRNA.AU芯片能捕获近30个E.coli蛋白峰,其中19个蛋白峰构成E.coli特征性蛋白指纹图谱,各蛋白峰在临床分离E.coli间分子量变异系数≤0.2%.SELDI重复检测20次E.coli混合标本显示同一蛋白峰的分子量变异系数≤0.05%.结论 E.coli在分子量3～20 kD范围内具有特征性蛋白指纹图谱,为快速诊断E.coli感染提供了新思路.
关键词： 大肠埃希菌 蛋白指纹 表面增强激光解析电离飞行时间质谱 -
引起血流感染常见的革兰氏阴性杆菌蛋白指纹图谱的建立
目的 建立引起血流感染的临床常见革兰氏阴性杆菌的蛋白指纹图谱,为血流感染快速诊断奠定基础.方法 在血培养分析仪报阳后 8 小时内抽取报阳血培养基 3 ml,经离心、红细胞裂解液溶解红细胞及无菌去离水洗涤后,留取细菌 悬液,应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术(surface-enhanced laser desorption /ionization time-of-flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)和 Au 蛋白芯片检测细菌蛋白,采用 Ciphergen Proteinchip 软件自动采集数据.每个标本重复测定 4 次评 价 SELDI-TOF-MS 检测细菌蛋白的重复性.结果 在分子量 5 ～20 kD 范围内不同种细菌具有不同的蛋白指纹图谱;同种细 菌具有相似的蛋白指纹图谱,主要蛋白峰分子量的变异系数＜0.1%;同一株细菌蛋白指纹图谱具有很好的重复性,主要蛋白 峰分子量的变异系数＜0.05%.结论 在分子量 5 ～20 kD 范围内不同种细菌具有特征性蛋白指纹图谱,为血流感染病原菌 的快速鉴定提供了新思路.
关键词： 血流感染 革兰氏阴性杆菌 蛋白指纹 表面增强激光解析电离飞行时间质谱 -
大肠埃希菌蛋白指纹诊断模型临床应用价值的验证
目的 验证已建立的大肠埃希菌(Escherichia coli,ECO)蛋白指纹图谱实验诊断模型在细菌快速鉴定中的应用价值.方法 利用前期建立的基于ECO蛋白标志物和Fingerwave软件的蛋白指纹诊断模型,对2014年临床分离的163株细菌进行盲法检测.通过与传统微生物学及分子生物学鉴定方法相比较,计算模型的诊断符合率,以验证模型的诊断识别能力.结果 163株细菌检测到29个共有蛋白质峰,经聚类分析后将前期建模的19个蛋白质峰表达丰度导入Fingerwave软件,设置判定阈值为0.7,利用该模型的判定结果与传统微生物学鉴定方法及分子生物学方法相比较,其符合率为86.5％(141/163).结论 细菌蛋白指纹诊断模型在ECO快速鉴定中具潜在应用价值,但需进一步优化建库的各细菌蛋白质峰谱,建立标准化流程和质量控制规则.
