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潜伏膜蛋白2A嵌合抗原受体-T细胞的制备及对鼻咽癌细胞杀伤作用的研究
目的 制备靶向潜伏膜蛋白2A(latent membrane protein 2A,LMP2A)的嵌合抗原受体(chimeric antigen receptor,CAR)-T细胞,观察LMP2A CAR-T细胞体内外对鼻咽癌细胞的杀伤作用.方法 2016年9月至2017年12月,本研究以基因工程技术构建抗LMP2A慢病毒表达载体,测序鉴定并通过Western blot法验证抗LMP2A CAR在293T细胞中的表达;通过质粒包装体系制备LMP2A CAR慢病毒,并感染人T细胞,制备LMP2A CAR-T细胞;CCK-8法检测LMP2A CAR-T细胞对鼻咽癌细胞的杀伤作用.酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测LMP2A抗原激活后的LMP2A CAR-T细胞白细胞介素(IL)-2与干扰素(IFN)-γ的分泌水平.体内实验观察LMP2A CAR-T细胞对鼻咽癌移植瘤的抑瘤作用.SPSS 21.0统计学软件用于统计分析.结果 PCR结果显示抗LMP2 A CAR片段大小约为1500 bp,与理论值相一致,测序显示序列正确;Western blot结果显示抗LMP2A慢病毒表达载体能在293T细胞中表达;CCK-8法结果发现在效靶比为20:1、10:1与5:1时,LMP2A CAR-T细胞对LV-LMP2A-CNE1细胞的杀伤率分别为(72.11±9.75)％、(54.65±5.42)％与(36.68±3.80)％,与CD19 CAR-T细胞、T细胞相比差异有统计学意义(P<0.05),而对CNE1细胞的杀伤作用与CD19 CAR-T细胞和T细胞相比差异无统计学意义;ELISA法结果发现LMP2A CAR-T细胞与LV-LMP2A-CNE1细胞共培养上清中IL-2与IFN-γ的含量,显著高于与CNE1细胞共培养上清,差异具有统计学意义(P<0.05);体内实验中LMP2A CAR-T细胞组瘤体体积为(80.3±10.0)mm3,显著小于各对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).结论 成功制备的LMP2A CAR-T细胞对LMP2A阳性的鼻咽癌细胞具有显著靶向杀伤效应.
