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RNA结合蛋白QKI-5表达对人头颈鳞癌细胞株的影响
目的：研究QKI-5对人头颈鳞癌细胞株的生长抑制作用。方法采用Western blot和免疫组化方法检测人头颈鳞癌临床组织样本中的QKI-5的蛋白表达情况。常规培养舌鳞癌SCC15细胞、舌鳞癌SCC25细胞和头颈鳞癌PCI13细胞，以5×104／ml的密度种植细胞。采用Western blot和反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测三种头颈鳞癌细胞株中的QKI-5的蛋白和mRNA表达情况。采用病毒介导QKI-5在SCC25细胞中过表达和在PCI13细胞中沉默QKI-5。采用MTT法和流式细胞法检测SCC25细胞中过表达QKI-5和在PCI13细胞中沉默QKI-5的细胞增殖和凋亡情况。采用Western blot方法检测SCC25细胞中过表达QKI-5和PCI13细胞中沉默QKI-5中细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、CDK4、P27、PARP-cleaved蛋白的表达情况。结果 SCC15和SCC25细胞中QKI-5的蛋白和mRNA表达水平较低，而PCI13细胞中的QKI-5蛋白和mRNA表达水平较高。采用病毒介导的QKI-5过表达后，SCC25细胞中QKI-5的蛋白和mRNA水平显著增加。采用病毒介导的QKI-5沉默后，PCI13细胞中QKI-5的蛋白和mRNA水平显著减少。 SCC25细胞中过表达QKI-5后，细胞增殖减少（P＜0.05），细胞多停留在G0／G1期，而凋亡增加，同时Cyclin D1和CDK4表达水平下调（P＜0.05），P27和PAPR-clevead蛋白表达水平上调（P＜0.05）。PCI13细胞中的QKI-5被沉默后，细胞增殖增加（P＜0.05），细胞多进入S期，而凋亡减少，同时Cyclin D1和CDK4表达水平上调（P＜0.05），P27和PARP-cleaved表达水平下调（P＜0.05）。结论 QKI-5的表达可对人头颈鳞癌细胞增殖产生抑制作用。
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RNA结合蛋白QKI-5对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响研究
目的:检测RNA结合蛋白QKI-5在乳腺癌细胞中的表达水平以及对癌细胞增殖能力的抑制作用.方法:通过免疫印迹实验检测QKI-5在不同乳腺癌细胞株中的表达水平,通过慢病毒感染构建能够稳定过表达QKI-5基因的细胞株,使用MTT,流式细胞仪检测细胞周期来观察过表达QKI-5对细胞增殖能力及周期的影响.结果:MCF-7细胞在三株乳腺癌细胞中QKI-5表达水平相对低,MTT实验结果显示与对照相比,过表达QKI-5的MCF-7细胞增殖能力出现显著降低P＜0.05,同时细胞周期检测显示过表达QKI-5的MCF-7细胞组出现了明显的G1期阻滞,进入S期G2/M期细胞减少.结论:在乳腺癌中QKI-5的高表达可能通过抑制癌细胞周期致使细胞增殖变缓,从而导致肿瘤生长受限.
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RNA结合蛋白QKI-5、Ezrin在浆液性卵巢癌中的研究
目的 检测RNA结合蛋白QKI-5、Ezrin在浆液性卵巢癌中的表达,探讨其在浆液性卵巢癌发生发展中的作用.方法 选取2012年至2017年在浙江大学舟山医院就诊且诊断为浆液性卵巢癌的患者40例及正常女性20例为研究对象,采用免疫组化的方法对卵巢组织标本中的RNA结合蛋白QKI-5、Ezrin的表达进行检测,对结果进行分析,并比较两者之间的相关性.结果 与对照组相比,QKI-5 mRNA、Ezrin在浆液性卵巢癌患者卵巢组织中的表达均显著的下调,差异均具有统计学的意义(t值分别为2.71、3.72,均P<0.05).浆液性卵巢癌组织样品中Ezrin阳性率为97.50%,对照组卵巢上皮组织细胞中Ezrin阳性率为100.00%,两组之间比较无显著性差异(χ2=0.51,P=0.48).结论 RNA结合蛋白QKI-5、Ezrin的表达下调与浆液性卵巢癌患者肿瘤的发生发展等临床病理过程相关,这两个指标有望成为卵巢癌的早期诊断指标,并可能为卵巢癌患者临床治疗提供新思路.
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人Qki-5基因重组腺病毒的制备
目的:构建针对Qki-5人重组腺病毒表达载体,并在能在转染该病毒的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231中观察到该基因过表达效果.方法:重组腺病毒穿梭载体pShuttle-Qki-5-IRES-EGFP与骨架载体共转化到大肠杆菌BJ5183中,同源重组得到重组腺病毒载体,后者转染HEK293细胞,包装并扩增出病毒颗粒.用获得的病毒感染Qki-5表达较低的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,收集细胞总RNA和总蛋白,采用RT-PCR和Western blot方法检测细胞中基因表达的变化.结果:经限制性内切酶酶切鉴定,证实针对Qki-5基因的重组腺病毒载体构建成功.RT-PCR和Western blot方法证实,在MDA-MB-231细胞中,Qki-5基因在mRNA和蛋白水平均有上升.结论:Qki-5腺病毒载体够建成功并且可以在乳腺癌细胞MDA-MB-231内表达.
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慢病毒载体介导RNA结合蛋白QKI-5过表达对前列腺癌细胞PC3增殖的抑制作用
目的：观察RNA结合蛋白Quaking-5（QKI-5）对雄激素非依赖性前列腺癌PC3细胞增殖的影响。方法：采用Western blot及逆转录-聚合酶链反应（ RT-PCR）方法检测不同前列腺癌细胞株（ PC3、LNCaP、DU145）及正常人前列腺上皮细胞（RWPE1）中QKI -5的表达水平；通过慢病毒感染并构建稳定过表达QKI-5的PC3细胞，噻唑蓝比色法（ MTT法）绘制细胞生长曲线、流式细胞仪（ FCM）检测细胞周期。结果：3株前列腺癌细胞中QKI-5的表达水平明显低于正常前列腺上皮细胞，其中PC3细胞表达水平低，细胞生长曲线显示稳定转染QKI-5的PC3细胞增殖能力明显低于对照组（ P<0.05），FCM检测发现稳定转染QKI-5的PC3细胞同对照组比较出现了明显的G1期阻滞（ P<0.05）。结论：RNA结合蛋白QKI-5可能与前列腺癌的发生发展有着密切的联系，慢病毒介导的QKI-5基因能够抑制PC3细胞的增殖。
