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小鼠诱导性多能干细胞向牙源性细胞分化的体内研究
目的:探讨小鼠诱导性多能干细胞(iPS,induced pluripotent stem cell)体内向牙源性细胞分化的潜能及适宜的诱导微环境.方法:经成釉细胞无血清条件培养液(ASF-CM)以及加入BMP4的ASF-CM(ASF-BMP4)不同微环境体外诱导的iPS细胞,分别移植入小鼠肾被膜内,HE染色及免疫组织荧光检测相关指标的表达.结果:ASF-CM组移植物HE染色可见上皮样结构生成,免疫组织荧光检测AMBN表达阳性;ASF-BMP4组可见上皮样和牙本质样结构生成,免疫组织荧光检测AMBN和DSP表达阳性.结论:ASF-BMP4提供了一个适宜的成牙微环境,能够促进iPS细胞体内形成牙源性上皮样和牙本质样结构.
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血小板浓缩生长因子对人牙髓细胞存活及其增殖分化的影响
目的 探讨血小板浓缩生长因子(Concentrate Growth factors,CGF)对人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)增殖分化的影响,为其今后在牙髓及根尖周疾病治疗应用进行前期研究.方法 从因正畸治疗拔除的健康恒牙分离培养出入牙髓细胞,在体外采用CGF或矿物三氧化物聚合体(mineral trioxide aggregate,MTA)处理人牙髓细胞,分别在第1、3、7天,CCK-8法测定各组细胞增殖水平、碱性磷酸酶活性、流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况.结果 与MTA组相比,CGF组的细胞增殖能力增强,S期细胞的比例增加,且第3、7天ALP活性增高(P＜0.05),而第1、7天牙髓细胞凋亡率降低.结论 CGF在体外具有良好的促进牙髓细胞增殖,抗凋亡以及诱导成骨/成牙分化的能力.
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碱性成纤维细胞生长因子对3D培养条件下牙髓干细胞成牙分化的研究
目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, FGF-2)对3D培养的牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)成牙分化的影响.方法:体外分离和培养DPSCs,通过成牙/成骨和成脂诱导,鉴定其多向分化的潜能;构建纳米纤维微球,将 DPSCs 与纳米纤维微球复合3D 培养,FGF -2 (20 ng/mL)刺激DPSCs 7 d,常规培养7 d,诱导培养7 d后,实时定量PCR和免疫荧光染色分别测定DPSCs成牙分化相关基因和蛋白的表达变化.结果:体外成功培养的DPSCs,具有成牙/成骨和成脂方向分化的潜能;FGF-2刺激3D培养的DPSCs后,成牙分化相关基因ALP、DMP1、OCN、DSPP以及成牙分化相关蛋白在2周时显著升高(P＜0.05).结论:FGF-2可效促进DPSCs向成牙本质样细胞分化.
关键词： 牙髓干细胞 碱性成纤维细胞生长因子 成牙分化 -
阿司匹林对人牙髓干细胞体外增殖、分化的影响及分子机制的研究
目的：探讨阿司匹林对人牙髓干细胞（hDPSCs）在体外增殖及分化过程的作用。方法：取体外培养的hDPSCs，加入矿化液和0．005、0．05、0．5、5 mmol／L的阿司匹林为实验组；单独加矿化液为对照组；不加矿化液为空白组。MTT法检测细胞增殖；在矿化液条件下阿司匹林诱导14 d时，茜素红染色观察细胞矿化情况，用western blot检测MAPK信号通路在hDPSCs分化中的作用。结果：0．05、0．005 mmol／L的阿司匹林均可促进hDPSCs增殖，5 mmol／L的阿司匹林则明显抑制hDPSCs的增殖；0．5、0．05 mmol／L的阿司匹林可抑制hDPSCs矿化结节的形成。Western blot结果显示，0．5 mmol／L阿司匹林刺激可抑制p－p38、p－JNK的表达且与作用时间相关，而对p－ERK表达无明显影响。结论：阿司匹林对hDPSCs的作用有剂量依赖性。阿司匹林可能是通过抑制MAPK的p38、JNK信号通路而抑制hDPSCs成牙向分化。
关键词： 阿司匹林 人牙髓干细胞(hDPSCs) 成牙分化 增殖 MAPK通路 -
他莫昔芬对牙髓干细胞体外分化的影响
目的：体外观察他莫昔芬（Tamoxifen）对牙髓干细胞分化的作用。方法：培养人牙髓干细胞（hDPSCs），将hDPSCs用不同浓度的他莫昔芬刺激不同时间，CCK－8法检测细胞的增殖情况；矿化诱导培养2周后茜素红染色观察矿化结节的形成，RT－PCR检测各组矿化相关基因碱性磷酸酶（ALP）、骨钙素（OCN）、骨唾液酸蛋白（BSP）、牙本质涎磷蛋白（DSPP）的表达水平。结果：10μmol／L 他莫昔芬抑制hDPSCs增殖，其他浓度对hDPSCs无明显影响；与对照组相比0．5、1、2．5、5、10μmol／L他莫昔芬均能促进矿化结节的形成，其中5μmol／L 明显；且与对照组相比，5μmol／L他莫昔芬明显上调矿化相关基因ALP、OCN、BSP 和DSPP 的mR-NA表达水平。结论：他莫昔芬可明显促进牙髓干细胞向成骨／成牙分化。
