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超顺磁氧化铁纳米颗粒对人牙髓干细胞生物学影响的体内外研究
目的：探讨不同浓度超顺磁氧化铁纳米颗粒（SPIO）在体内外对人牙髓干细胞（hDPSCs）活力、增殖和成骨分化的影响。方法：用不同浓度 SPIO 标记 hDPSCs 后，体外条件下对其活力、增殖、分化等进行观察；然后将细胞／支架复合物植入裸鼠皮下，观察体内条件下 SPIO 对 hDPSCs 成骨分化的影响。结果：25、50μg／mL 的 SPIO 不影响 hDPSCs 的活力，100μg／mL 的 SPIO 抑制细胞活力；25、50μg／mL 的 SPIO 在1～3 d促进细胞增殖，而100μg／mL 的 SPIO 则抑制细胞增殖且促进其凋亡。25μg／mL 的 SPIO 在体外和体内条件下对 hDPSCs 的成骨分化均无明显影响。结论：25μg／mL 的 SPIO 可以有效标记 hDPSCs，在早期可促进其增殖，而对其成骨分化无影响。
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PI3K特异性抑制剂LY294002对人牙髓干细胞增殖和成骨向分化能力的影响
目的：体外实验研究磷脂酰肌醇3－激酶（PI3K）信号通路特异性抑制剂 LY294002对人牙髓干细胞（hDPSCs）增殖和成骨向分化能力的影响。方法：将第3代 hDPSCs 以含有不同浓度 LY294002的普通培养液刺激不同时间，CCK－8方法检测细胞的增殖能力；以含不同浓度 LY294002的矿化液诱导 hDPSCs，2周后用茜素红染色检测 hDPSCs 成骨向分化能力；用 RT－PCR 检测 hDPSCs 的成骨相关基因碱性磷酸酶（ALP）、骨唾液酸蛋白（BSP）和骨钙素（OCN）的表达水平。结果：随着刺激时间延长，不同浓度的 LY294002均能促进hDPSCs 的增殖。LY294002不同浓度组均抑制了 hDPSCs 的矿化结节的形成，且该抑制效果具有剂量依赖性。不同浓度的 LY294002均抑制了 ALP、BSP 和 OCN mRNA 的相对表达量。结论：LY294002能促进 hDPSCs 增殖，并抑制 hDPSCs 成骨向分化能力，PI3K 信号通路可能参与并调控了 hDPSCs 的增殖与成骨向分化。
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炎症状态下 A20基因沉默对人牙髓干细胞增殖及分化的影响
目的：探讨在体外模拟炎症状态下，A20基因沉默对人牙髓干细胞（hDPSCs）增殖及分化能力的影响。方法：用脂多糖（LPS）刺激 hDPSCs，Western－Blot 技术检测不同时间点锌指蛋白 A20表达量的变化；通过 RNA 干涉技术构建 A20基因沉默的细胞模型，CCK －8法检测细胞增殖能力；矿化液诱导培养后，用碱性磷酸酶检测试剂盒测定 ALP 的活性，茜素红染色观察矿化结节的形成，并用 RT－PCT 检测成牙／成骨分化相关基因ALP、DSPP、OCN、RUNX2表达水平。结果：hDPSCs 在 LPS 刺激2 h 后，A20的表达即显著增加，在接近72 h 时其表达量恢复至基础水平；在模拟炎症状态下，与对照组相比，A20基因沉默后的 hDPSCs，其增殖能力明显降低（P ＜0．05），ALP 的活性、矿化结节的形成、成牙／成骨分化相关基因的表达水平均受到抑制（P ＜0．05）。结论：在炎症状态下，A20在早期呈现一过性的高表达，A20基因沉默能够抑制 hDPSCs 的增殖及分化能力。
关键词： 锌指蛋白A20 人牙髓干细胞(hDPSCs) 脂多糖(LPS) 增殖 分化 -
敲减ALPL基因对人牙髓干细胞凋亡的影响
目的：观察敲减ALPL基因对人牙髓干细胞（hDPSCs）凋亡的影响。方法：取第3代hDP-SCs，将其随机分为实验组和对照组后，通过慢病毒转染法敲减实验组 hDPSCs 的 ALPL 基因，并采用Western－Blot及ALP染色法检测两组细胞中ALP蛋白的表达水平。用Western－Blot和流式细胞术分别检测各组hDPSCs的凋亡状态及凋亡相关蛋白caspase－3、caspase－8的表达水平。结果：Western－Blot及ALP染色结果显示，人ALPL敲减病毒颗粒能在hDPSCs中有效敲减ALPL基因；敲减ALPL基因后，可使hDPSCs的凋亡水平及其凋亡相关蛋白caspase－3和caspase－8的表达水平明显上升（P＜0．05）。结论：敲减ALPL基因可促进hDP-SCs的凋亡。
关键词： 人牙髓干细胞(hDPSCs) 细胞凋亡 碱性磷酸酶(ALP) 转染 -
阿司匹林对人牙髓干细胞体外增殖、分化的影响及分子机制的研究
目的：探讨阿司匹林对人牙髓干细胞（hDPSCs）在体外增殖及分化过程的作用。方法：取体外培养的hDPSCs，加入矿化液和0．005、0．05、0．5、5 mmol／L的阿司匹林为实验组；单独加矿化液为对照组；不加矿化液为空白组。MTT法检测细胞增殖；在矿化液条件下阿司匹林诱导14 d时，茜素红染色观察细胞矿化情况，用western blot检测MAPK信号通路在hDPSCs分化中的作用。结果：0．05、0．005 mmol／L的阿司匹林均可促进hDPSCs增殖，5 mmol／L的阿司匹林则明显抑制hDPSCs的增殖；0．5、0．05 mmol／L的阿司匹林可抑制hDPSCs矿化结节的形成。Western blot结果显示，0．5 mmol／L阿司匹林刺激可抑制p－p38、p－JNK的表达且与作用时间相关，而对p－ERK表达无明显影响。结论：阿司匹林对hDPSCs的作用有剂量依赖性。阿司匹林可能是通过抑制MAPK的p38、JNK信号通路而抑制hDPSCs成牙向分化。
关键词： 阿司匹林 人牙髓干细胞(hDPSCs) 成牙分化 增殖 MAPK通路 -
E RK信号通路在人牙髓干细胞增殖与分化中的作用
目的：探讨细胞外信号调节激酶（ERK）通路是否参与对人牙髓干细胞（hDPSCs）增殖及分化过程的调控。方法：用不同浓度的ERK通路抑制剂U0126干预hDPSCs，用CCK－8法检测细胞增殖；在矿化液诱导条件下，用不同浓度U0126干预hDPSCs 14 d，茜素红染色观察矿化结节的形成，RT－PCR检测成骨／成牙相关基因ALP、OCN、DSPP及BSP的表达；Western blot检测U0126（25μmol／L）干预后，ERK通路活性的变化。结果：不同浓度的U0126对hDPSCs的增殖能力无显著影响（P＞0．05）；与对照组相比，不同浓度的U0126对矿化结节的形成和成骨／成牙相关基因ALP、OCN、DSPP及BSP的表达均有抑制作用，25μmol／L U0126的抑制作用明显（P＜0．05）；Western blot结果显示随着时间的延长，p－ERK的表达量逐步增加，在加入25μmol／L U0126后，p－ERK表达量下降（P＜0．05）。结论：ERK信号通路可能不参与对hDPSCs增殖的调控，而在促进hDPSCs成骨／成牙分化过程中起调控作用。
关键词： 人牙髓干细胞(hDPSCs) ERK信号通路 增殖 分化
